Выполняется 3 этап исследования чистых культур факультативно-анаэробных бактерий и 3-4 этапы исследования чистой культуры облигатно-анаэробных бактерий в соответствии с Приложениями 1 и 2.
Приложение 1
Выделение чистых культур аэробных бактерий и их идентификация
1-й этап: Производят посев смеси микробов шпателем – площадками, петлей – секторами и штрихами на пластинки с МПА; посевы помещают в термостат при 370С.
2-й этап: описывают выросшие колонии 2-х типов, готовят из ½ колонии каждого типа мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют; оставшиеся половинки колоний обоих типов отсевают на скошенные МПА для накопления чистых культур и термостатируют сутки.
3-й этап: а) проверяют чистоту накопленных культур в мазке б) определяют ферментативную активность: производят посев
чистой культуры Гр- палочек в среды короткого "пестрого" ряда с глюкозой, лактозой, маннитом, мальтозой, сахарозой для обнаружения сахаролитических ферментов, в МПБ - для определения индо- и сероводородообразования; Гр+ кокки исследуют в каталазном тесте и при положительном результате отсевают чистую культуру в цитратную кроличью плазму, на МЖСА, маннит в аэробных условиях и глюкозу анаэробно (для выявления соответственно плазмокоагулазы, лецитиназы и сахаролитических ферментов). Все посевы помещают в термостат на сутки; свертывание плазмы учитывают через 2, 4, 18 и 24 ч.
4-й этап: а) учитывают изменения "пестрого" ряда, выделение индола и сероводорода при посеве Гр- палочек; изменения цитратной кроличьей плазмы, окисление маннита, ферментацию глюкозы, характер роста на МЖСА (пигмент и наличие лецитиназной активности) при посеве стафилококка
9
б) проводят идентификацию выделенных культур, пользуясь справочными таблицами 10 и 11 и выдают ответ с указанием рода и/или вида микроорганизма.
Примечание: для постановки каталазного теста на предметное стекло наносят каплю 3% р-ра Н2О2 и петлю исследуемой культуры. При появлении пузырьков газа тест считают «+».
10
Таблица 33
Характеристика культуры №1 аэробной Гр- палочки по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим признакам в сравнении со сходными микроорганизмами.
|
Описан |
|
|
Окраска |
|
|
Описание характера роста |
|
|
|
|
Подви |
|
|
|
|
|
|
|
|
Биохимические свойства |
|
|
|
|
|
|
Наименова |
|
|||||||||||||
|
ие |
|
|
По |
|
|
(культуральные свойства) |
|
|
|
|
ж- |
|
|
|
|
|
|
|
окисление |
|
|
|
|
образование |
|
ние |
|
||||||||||||||
|
морфол |
|
|
Граму |
|
|
Колоний |
|
Культуры на |
|
|
ность |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
рода |
|
|||
|
огии |
|
|
(тинкто |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Маннит |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
культуры |
|
|
бактер |
|
|
риальн |
|
|
|
|
МПБ |
|
|
ско |
|
|
|
|
|
Глюк. |
|
|
Сах. |
|
|
Лакт |
|
|
|
|
Мальт. |
|
|
индол |
|
|
Н2S |
|
На ср. |
Ольк. |
|
|
|
|
|
ий |
|
|
ые |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
шаг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
свойств |
|
|
|
|
|
|
|
аре |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
а) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
палочк |
|
Грам |
|
Средние (или |
|
Дифф |
|
Пол |
+ |
|
|
кг |
|
в |
|
|
кг |
|
кг |
|
кг |
+ |
_ |
|
Гл:к |
|
Род |
||||||||||||||
|
а |
|
отрицат |
|
крупные), |
|
узное |
|
упр |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
г+ |
|
Escherichia |
||||||
|
|
|
|
ельные |
|
непигментированные |
|
помут |
|
озра |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Л:к |
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
с голубоватым |
|
нение |
|
чны |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
г+ |
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
оттенком прозрачные |
|
|
|
|
й |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Н2S |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
или полупрозрачные |
|
|
|
|
нал |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
- |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ет |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
палочк |
-"- |
|
|
Мелкие, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
- |
|
|
|
|
- |
|
|
|
|
|
|
Гл: |
|
Род |
|||||||
|
а |
|
|
|
|
непигментированные |
-"- |
|
-"- |
|
- |
|
|
к |
|
в |
|
|
в |
|
в |
|
|
в |
|
в |
- |
|
к+ |
|
Shigella |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
с голубоватым |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Л – |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
оттенком прозрачные |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Н2S |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
или полупрозрачные. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
- |
|
|
|
|
|
|
палочк |
-"- |
|
|
Мелкие, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
К |
- |
|
- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Гл:к |
|
Род |
|||||||
|
а |
|
|
|
|
непигментированные |
-"- |
|
-"- |
|
+ |
|
|
или |
|
|
|
|
|
|
|
К |
|
К или |
- |
|
+ |
|
г+ |
|
Salmonella |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
с голубоватым |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
кг |
|
|
|
|
|
|
|
или |
|
кг |
|
|
|
|
|
|
Л – |
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
оттенком прозрачные |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Н2S |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
или полупрозрачные. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
+ |
|
|
|
|
|
11
Таблица 34 Характеристика культуры №2 аэробных Гр+ кокков по морфологическим, тинкториальным, культуральным,
биохимическим признакам в сравнении со сходными микроорганизмами
|
Описание |
|
|
Окраска |
|
|
Описание характера роста |
|
|
Наличие |
|
|
Биохимические свойства |
|
|
|
Наименован |
|
||||||||||||||
|
морфологии |
|
|
по Граму |
|
|
(культуральные свойства) |
|
|
пигмента, |
|
|
Продукция кислоты |
|
|
Образование |
|
|
ие рода и |
|
||||||||||||
|
бактерий (морф. |
|
|
(тинктори |
|
|
Колоний |
|
|
Культуры на питательном |
|
|
его цвет |
|
|
|
|
|
|
|
|
ферментов |
|
|
вида |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
патогенности |
|
|
|
||||||||||||
|
свойства). |
|
|
альные |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
культуры. |
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
свойства) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Глюкоза |
|
|
Маннит |
|
|
плазм |
|
|
лецит |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
бульоне |
|
|
Скошенном |
|
|
|
|
|
(в |
|
|
(в |
|
|
окоаг |
|
|
иназа |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
анаэробных |
|
|
аэробных |
|
|
улаза |
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
агаре |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
условиях) |
|
|
услов |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
иях) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Кокки, |
|
|
|
|
Средние, выпуклые, |
|
|
|
|
|
|
|
Желтый (от |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
располагаются |
|
|
|
|
непрозрачные, желто- |
|
|
|
|
Густой налет |
|
желто-зеленого |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Род |
|||||
|
|
Гр+ |
|
зеленого или розового |
|
Диффузное |
|
желтоватого, желто- |
|
до оранжевого), |
- |
|
- |
|
- |
|
|
- |
|
|
Microccocus |
|||||||||||
|
тетрадами ,в |
|
|
|
|
цвета |
|
помутнение |
|
зеленого или |
|
розовый |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
виде пакетов |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
розового цвета |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
(0,5-1,5 мкм) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Кокки, располагаются |
|
|
|
|
Средние, выпуклые, |
|
|
|
|
|
|
|
Отсутствие или |
|
+, редко - |
+ |
|
+ |
|
|
+ |
|
|
|
|
||||||
|
по одиночке, парами, |
|
|
|
|
непрозрачные |
|
|
|
|
Густой налет |
|
наличие |
|
|
|
|
или |
|
или |
|
или |
|
|
|
|||||||
|
в виде гроздьев |
|
|
|
|
золотистого, |
|
|
|
|
золотистого, белого |
|
пигмента от |
|
|
|
- |
|
- |
|
|
- |
|
|
Род |
|||||||
|
винограда, скоплений |
|
Гр+ |
|
белого цвета или |
-"- |
|
|
цвета или |
|
белого до |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Staphylococcus |
|||||||
|
(0, 5-1,5 мкм) |
|
|
|
|
бесцветные в S-форме |
|
|
|
|
бесцветный |
|
желтого |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
Средние, выпуклые, |
|
|
|
|
|
|
|
Пигмент от |
+ |
|
+ |
|
+ |
|
|
+ |
|
|
Вид |
||||||
-"- |
|
|
Гр+ |
|
непрозрачные |
-"- |
|
|
Густой, |
|
белого до |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
S.aureus |
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
золотистого, |
|
|
|
|
непрозрачный |
|
желтого |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
белого цвета |
|
|
|
|
налет, цвет от |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
белого до желтого |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
-"- |
|
|
Гр+ |
|
Средние, выпуклые, |
-"- |
|
|
Густой налет |
|
отсутствие |
+ |
|
- |
|
- |
|
|
- |
|
|
Вид |
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
непрозрачные |
|
|
|
|
беловатого цвета |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
S.epidermidis |
|||
|
|
|
|
|
|
|
беловатого оттенка |
|
|
|
|
или бесцветный |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
или бесцветные |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
-"- |
|
|
Гр+ |
-"- |
|
-"- |
|
-"- |
|
|
отсутствие |
± |
|
+ |
|
- |
|
|
- |
|
|
Вид |
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
S.saprophyticus |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
12
Приложение 2
Выделение чистой культуры анаэробных бактерий и ее идентификация
1-й этап: Производят посев суспензии из почвы в регенерированные кипячением и охлажденные до 450С среды - молоко по Тукаеву, Вильсон-Блер и КиттТароцци. Посевы помещают в термостат при 370С на сутки, просматривая их через 3-6 часов.
2-й этап: а) учитывают рост на средах Китт-Тароцци, молоке по Тукаеву, Вильсон-Блер.
б) из культуры, выросшей на среде Китт-Тароцци, готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют.
в) производят разведение культуры, выросшей на среде Китт-Тароцци, по методу Вейнберга, выполняют посев методом Перетца с целью выделения чистой культуры анаэробов. Посевы помещают в термостат на сутки.
3-й этап: изучают характер роста колоний; из части колонии готовят мазки по Граму, микроскопируют и производят отсев второй половины колонии в среду Китт-Тароцци для накопления чистой культуры, помещают в термостат на сутки.
4-й этап: а) проверяют чистоту культуры в мазке б) производят посев в полужидкие среды "пестрого" ряда
Гисса, разлитые высоким столбиком, и на пластинку яично-желточного агара (ЯЖА) для выявления лецитиназной активности, свидетельствующей о продукции α-токсина, термостатируют сутки.
5-й этап: а) учитывают изменения сред "пестрого" ряда, наличие лецитиназной активности б) проводят идентификацию выделенной культуры с
помощью справочной таблицы 12 и выдают ответ с указанием вида микроорганизма.
13