Материал: 2_MIKROBIOLOGIYa_temy_5-9_FIZIOLOGIYa_I_IZMENChIVOST_MIKROORGANIZMOV

ауксотрофы – микроорганизмы, которые получают отдельные органические вещества в готовом виде из окружающей среды или из организма хозяина, нуждаются в факторах роста при культивировании на искусственных питательных средах.

2.Характеристика бактериологических питательных сред

Влабораторных условиях микроорганизмы культивируют на специальных питательных субстратах, называемых искусственными

питательными средами.

Бактериологические питательные среды (БПС) – это препараты, предназначенные для выявления, культивирования, дифференциации, транспортирования и хранения микроорганизмов.

Требования, предъявляемые к питательным средам:

наличие набора питательных веществ, адекватных физиологическим потребностям определенной группы микроорганизмов (источники аминного азота, металлы, минеральные соединения, факторы роста);

наличие определенных физико-химических свойств;

стерильность;

стандартность и простота приготовления;

соответствие сроков и условий хранения.

Оценку качества питательных сред ведут по следующим показателям:

1.Биологические свойства:

характер роста культуры на среде;

типичность биологических свойств возбудителя в чистой культуре (морфологических, биохимических, серологических, фаголизабельность);

скорость роста;

чувствительность среды – максимальное разведение культуры, обеспечивающее визуально обнаруживаемый рост колоний искомого штамма в течение определенного времени и при определенной температуре на всех засеянных чашках;

6

дифференцирующие свойства (для дифференциальнодиагностических сред) – выраженность и четкость дифференциации разных групп микроорганизмов по характеру колоний и другим признакам роста, в том числе изменению цвета среды;

ингибирующие свойства (для элективно-селективных сред) – степень подавляющего воздействия на рост сопутствующих микроорганизмов;

эффективность (для жидких сред) – выход микробных клеток с 1 мл питательной среды (в млрд/мл) и прирост числа микроорганизмов относительно засеянного количества; определяется по концентрации микробных клеток в среде после инкубации.

2.Физико-химические свойства:

растворимость;

рН;

вязкость;

консистенция;

прочность студня агаровых сред;

содержание белка, общего и аминного азота, хлоридов;

внешний вид готовых сред (гомогенность, прорачность, цветность и др.).

Классификация питательных сред

1.По консистенции:

жидкие (мясопептонный бульон (МПБ), 1% пептонная вода и др.);

полужидкие (концентрация агара 0,3-0,7%) (полужидкий мясопептонный агар (МПА), полужидкие цветные ряды и др.);

плотные (концентрация агара 1,5-2%) (МПА; среда Эндо и др.).

2.По составу:

эмпирические (на основе естественных продуктов): кровяной агар, сывороточный агар, молочно-желточно-солевой агар (МЖСА);

7

полусинтетические (химический состав установлен частично): казеиново-угольный агар (КУА),

синтетические (химический состав определен точно): среда 199, Сотона, Игла.

3.По назначению (Табл.12)

Таблица 12 Классификация питательных сред по назначению

8

1.Среда Эндо (дифференциально-диагностическая среда для выделения и идентификации кишечных бактерий): питательный агар 1,5%, лактоза 1%, индикатор - фуксин, обеспеченный сульфитом натрия.

Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледнорозовый цвет. Лактоза разлагается микроорганизмами до альдегида и кислоты. Альдегид в свою очередь освобождает фуксин из фуксинсульфитного комплекса, в результате чего колонии окрашиваются в красный цвет (лактозопозитивные, lac+). При росте эшерихий также происходит кристаллизация фуксина, в результате чего появляется зеленоватый металлический блеск (фуксиновый глянец) колоний.

2.«Цветные» ряды Гисса (набор нескольких пробирок со средами, приготовленными по рецептуре Гисса), чаще используются полужидкая консистенция: 0,4% питательного агара, 1% определенного углевода или многоатомного спирта (глюкоза, лактоза, мальтоза, манит, сахароза и др.) и индикатор BP (смесь водного голубого и розоловой кислоты).

При расщеплении углевода до кислых продуктов цвет индикатора и среды меняется, при расщеплении до кислоты и газа наблюдаются еще и разрывы в среде.

Определенный вид бактерий разлагает не все углеводы, представленные в ряду Гисса, поэтому цвет меняется только в некоторых пробирках и получается "пестрый ряд".

3.Среда Китт-Тароцци (для культивирования анаэробных микроорганизмов): МПБ, содержащий несколько кусочков печени или других тканей животных в качестве поглотителя свободного кислорода, 1% глюкозы, 0,05% агара (для снижения окислительновосстановительного потенциала среды); перед посевом бактерий среду регенерируют кипячением.

9

3. Изучение принципов культивирования бактерий.

Микроорганизмы, за исключением облигатных внутриклеточных паразитов, культивируют на искусственных питательных средах. Условия культивирования зависят от биологических свойств соответствующих микроорганизмов.

При культивировании необходимо:

выбрать адекватную питательную среду, отвечающую физиологическим потребностям микроорганизмов;

соблюдать оптимальный температурный режим:

большинство патогенных и условно-патогенных микроорганизмов являются мезофилами с температурными границами роста от 200С до 400С, при оптимальной температуре 370С; психрофилы — бактерии, размножающиеся при низких температурах, например, бактерии рода йерсиний (оптимум при10-120С); термофилы - растут при 40-600С, например, оптимальной температурой для кампилобактерий является

420С;

учитывать тип дыхания микроорганизмов (для анаэробов применяют особые методы культивирования);

соблюдать сроки культивирования, которые зависят от периода генерации микроорганизмов.

Период генерации – время между двумя делениями бактериальной клетки, которое зависит от вида микроорганизмов, возраста культуры, характера питательной среды. Для большинства видов микроорганизмов он составляет в среднем 20 мин., что определяет появление видимого роста на питательной среде через 1820 часов. У некоторых бактерий период генерации более длительный - 14-15 часов, поэтому видимый рост на среде наблюдается через 2-6 нед.

10