Материал: 2_MIKROBIOLOGIYa_temy_5-9_FIZIOLOGIYa_I_IZMENChIVOST_MIKROORGANIZMOV

4. Выделение и идентификация чистых культур микроорганизмов.

Чистая культура – это популяция бактерий одного вида или разновидности, выращенная на искусственной питательной среде.

Выделение чистой культуры необходимо:

при клинико-диагностических и профилактических исследованиях;

при санитарной оценке объектов окружающей среды;

для производства антибиотиков, иммунобиологических

препаратов.

Идентификацию чистой культуры проводят в логарифмическую фазу роста микробной популяции до вида или варианта (био-, серо-, хемо-, резистенс-, фаговара) по ряду основных свойств:

морфологические – форма бактерий, размеры, взаимное расположение в микропрепаратах;

тинкториальные – способность воспринимать красители (при окраске по Граму);

культуральные – характер роста на плотных и жидких питательных средах, условия культивирования;

биохимические – набор ферментов, присущий определенному виду или варианту микроорганизмов, который определяют на дифференциально-диагностических средах, с помощью СИБов, микротестсистем или автоматизарованных баканализаторов;

антигенные – набор антигенов, характерный для данного вида

и варианта, определяемый путем постановки серологических реакций, преимущественно реакций агглютинации.

При идентификации некоторых культур дополнительно изучают:

чувствительность к бактериофагам;

чувствительность к антибиотикам, колицинам и др.

11

Чистую культуру в бактериологических лабораториях в большинстве случаев получают из изолированных колоний, выросших на пластинчатых питательных средах.

Схема выделения и идентификации чистых культур бактерий

Исследуемый материал

1 этап (нативный материал):

ориентировочная микроскопия

подготовка материала к исследованию

посев на пластинчатые питательные среды с целью получения изолированных колоний и на среды обогащения для выделения и накопления чистой культуры

2этап (изолированные колонии):

описание культуральных, морфологических и тинкториальных свойств культуры

пересев на скошенный питательный агар (бульон) или другие среды для накопления чистой культуры

3этап (чистая культура):

проверка чистоты накопленной культуры в мазке

идентификация по комплексу биологических свойств (посев на дифференциально-диагностические среды, постановка серологических реакций и др.)

Заключение

о выделенной культуре (указать вид, вариант)

Схемы с описанием выделения и идентификации чистых культур факультативно-анаэробных и облигатно-анаэробных микроорганизмов находятся в приложении №1 и 2. Выполняется первый этап исследования.

12

1. Типы энергетического метаболизма и классификация бактерий по потребности в молекулярном кислороде.

Энергетический метаболизм (катаболизм, диссимиляция) -

процесс распада химических соединений до более простых, при котором выделяемая энергия запасается в клетке в виде молекул АТФ.

Различают эндогенный энергетический метаболизм (при окислении собственных клеточных структур) и экзогенный, или традиционный (при окислении субстратов, поступающих в клетку из внешней среды).

Основными типами экзогенного энергетического метаболизма являются дыхание и брожение (рис.2)

Дыхание - способ получения энергии в результате окисления органических субстратов (преимущественно углеводов), при котором конечным акцептором электронов и ионов водорода является

кислород При аэробном дыхании конечным акцептором выступает

молекулярный кислород. Распад субстрата идет при наличии О2 в среде не < 20% до СО2 и Н2О с полным освобождением энергии, заключенной в исходном субстрате. Это наиболее эффективный тип энергетического метаболизма.

Типы энергетического метаболизма у гетероорганотрофов

Рис. 2. Типы энергетического метаболизма бактерий

13

При анаэробном дыхании конечным акцептором являются неорганические соединения, содержащие «связанный» кислород (нитраты, нитриты, сульфаты, карбонаты и др.). Распад идет в условиях отсутствия молекулярного кислорода.

Брожение - способ получения энергии в результате анаэробного расщепления органических соединений до более простых органических соединений, которые становятся конечными акцепторами электронов и ионов водорода. В продуктах брожения сохраняется значительная часть энергии, которая не может быть использована клеткой.

По характеру превалирующего органического продукта, образующегося при брожении выделяют несколько видов брожения:

спиртовое (у дрожжей)

молочно-кислое (у молочно-кислых стрептококков, лактобацилл)

муравьинокислое (у энтеробактерий)

пропионовокислое (у пропионобактерий)

маслянокислое (у ряда клостридий) и т.д.

Кдыханию также относят окисление бактериями некоторых

неорганических соединений, не подверженных ассимиляции (Н2S – «сероводородное дыхание», Fe+3 – «железное дыхание»).

Классификация микроорганизмов по типу дыхания представлена в табл.13.

14

Таблица 13

Классификация микроорганизмов в зависимости от потребности в молекулярном кислороде

15