Материал: Bilet_1

Азидный метод. Метод Т. Курциуса находит широкое применение в синтезе пептидов.

Гидразиды получаются либо прямым гидразинолизом эфиров защищенных аминокислот или пептидов, либо из защищенных гидразидов (—СО—NH—NH—Z—, —СО—NH—NH—Вос и т. д.). Перевод в азиды осуществляется обработкой водным раствором нитрита натрия в кислой среде при —5 °С или действием изоамилнитрита или трет-бутилнитрита при —20 °С в органическом растворителе (модификация Хонцля и Рудингера, 1961). Азиды можно получать и непосредственно из НООС-производных с помощью дифенилфосфорилазида N3PO(OC6H5)2, применяемого в качестве конденсирующего агента (в частности, для получения циклопептидов).

Азидный метод не свободен от недостатков. Основная побочная реакция — перегруппировка Курциуса:

Направление и степень протекания этой перегруппировки определяется структурой азида и условиями реакции. Хотя при азидной конденсации рацемизация сведена к минимуму, ее нельзя не учитывать, особенно при блочном синтезе; в качестве основания рекомендуется использовать не триэтиламин-, а N-метилморфолин или N-этилдиизопропиламин.

Более распространенным является применение смешанных ангидридов, в частности с производными угольной кислоты, получаемых с помощью изобутилхлоркарбоната (Р. Воган, 1951).

2)Метод активированных эфиров. Среди арильных активированных эфиров наиболее широко используются п-нитрофениловые (—ONp) (M. Боданский, 1956), 2,4-динитрофениловые, о- нитрофениловые и о-нитротиофениловые, 2,4,5-трихлорфениловые (—ОТср), пентахлорфениловые (—ОРср). Особое значение приобрели недавно предложенные Л. Кишфалуди высокореакционноспособные пентафторфениловые эфиры (—OPfp). Ариловые эфиры этих типов получаются обычно из соответствующих фенолов с помощью карбодиимида.

В последние годы большое распространение получили активированные эфиры на основе производных гидроксиламина, и прежде всего N-гидроксисукцинимидные эфиры, например:

3)Карбодиимидный метод. Первой стадией реакции является активирование карбоксильного компонента путем образования реакционноспособного производного О-ацилизомочевины.

Производное О-ацилизомочевины превращается в пептид непосредственно или через соответствующий симметричный ангидрид. Главным побочным процессом является О -*• N- ацильный сдвиг, приводящий к получению нереакционноспособных побочных продуктов — N- ацилизомочевин.

4) Карбоксиангидридный метод.

В 1966 г. Р. Хиршман предложил использовать для направленного синтеза пептидов в водной среде N-карбоксиангидриды (NCA, ангидриды Лейкса, оксазолидиндионы). Суть предложенного им приема заключается в точном регулировании рН среды: конденсация N-карбоксиангидрида с аминокислотой проводится при рН 10,2, при подкислении осуществляется N-декарбоксилирование производных карбаминовой кислоты, и затем цикл реакций повторяется (иногда такой прием обозначаетс как рН-весы ). Этим методом, в котором построение цепи ведется от С- к N-концу, Р. Хиршман получил весьма длинные пептидныефрагменты S-белка рибонуклеазы.

Но в лекции Иванова к карбоксиангидридному методу приведена такая реакция:

3. Химическая модификация остатков цистеина в белке.

Протонированная форма

Депротонированная форма

Это то, что было на лекции как-то бегло и мутно:

Вот что-то толковое из учебника:

С помощью химической модификации можно также увеличивать число гидролизуемых трипсином связей. Для этой цели, в частности, используется аминоэтилирование остатков цистеина этиле-нимином (Л. Линдлей, 1956):

Пептидные связи, образованные карбоксильной группой S-((З-аминоэтил) цистеина, являющегося структурным аналогом лизина, способны расщепляться под действием трипсина, однако с меньшей скоростью, чем связи, образованные остатками лизина и аргинина. Более полного расщепления можно достичь увеличением концентрации фермента и продолжительности гидролиза.