Протокол № 20
Бактериологическое исследование крови больного с подозрением на брюшной тиф
1 этап исследования
В разгар лихорадки у больного из локтевой вены взяли 10 мл крови с соблюдением соответствующих правил асептики и сразу засеяли во флакон со 100мл среды Раппопорт. Флакон доставили в лабораторию и поставили в термостат при +37° Сс ежедневным просмотром до появления признаков роста бактерий, с максимальным сроком наблюдения до 10 суток.
Параллельно из крови приготовили мазок по типу «толстой капли», окрасили по Граму, при микроскопии обнаружили Грампалочки небольших размеров.
2 этап исследования
Через 24ч. обнаружили помутнение и покраснение среды Раппопорт, отсутствие пузырьков газа в поплавке. Произвели высев выросшей культуры на две среды: пластинку агара Эндо и в полиуглеводную среду Олькеницкого для первичной биохимической идентификации. Посевы поставили в термостат при +37° С на сутки-двое.
3 этап исследования
1. Учет роста.
На пластинке Эндо - колонии 2-3 мм в диаметре, прозрачные, lac- (бесцветные и бледно-розовые).
В среде Олькеницкого обнаружили изменение цвета среды в «столбике» с красно-оранжевого на желтый, без пузырьков газа; скошенная часть цвет не изменила; на границе «столбика» и скошенной части – кольцо черного цвета.
2.Для контроля чистоты выделенной культуры готовили мазки. Обнаружили Грампалочки.
3.Для изучения ферментативных свойств отсеяли чистую культуру в среды минимального дифференцирующего ряда с набором углеводов, многоатомных спиртов, аминокислот и др. в соответствии с идентификационной таблицей; на скошенный МПА - для последующего серотипирования.
4.Выполнили посевы чистой культуры для определения ее чувствительности к сальмонеллезному бактериофагу и антибактериальным препаратам по стандартным методикам.
4 этап исследования
1.Учет ферментативных свойств:
-глюкоза (газ) - «-»
-лактоза - «-»
-сахароза - «-»
-дульцит - «-»
-индол - «-»
-сероводород - «+»
-орнитин - «-»
-лизин - «+»
-цитрат Симмонса - «-»
-ацетат натрия - «-»
2.Провели серотипирование чистой культуры, выросшей на МПА, в реакции слайд-агглютинации последовательно с сальмонеллезными сыворотками:
-поливалентной ABCDE– «+»
-О 9, О12, Оvi - «+»; О2, О4, О6, О7 - «-»
-Нd - «+»
3.Учет определения чувствительности выделенной культуры к поливалентному сальмонеллезному бактериофагу: в месте нанесения капли бактериофага обнаружили зону лизиса на фоне «сплошного газона» исследуемой культуры.
4.Идентифицировали культуру по совокупности ферментативных и антигенных свойств, а также чувствительности к сальмонеллезному фагус помощью таблиц.
Заключение: на основании изучения морфологических, культуральных, ферментативных, антигенных свойств, чувствительности к сальмонеллезному бактериофагу считаем, что из крови больного выделена культура Salmonella enterica subsp. Enterica serovar Typhi.
Протокол № 21
Бактериологическое исследование фекалий больного с подозрением на дизентерию
1 этап исследования
1.2г испражнений отбирали с помощью ложки-шпателя, вмонтированного в крышку стерильного контейнера, сразу после дефекации из дезинфицированного и тщательно вымытого судна, на дно которого был помещен лист плотной чистой бумаги. Материал был доставлен в лабораторию в течение 2 ч.
2.Из нативных испражнений готовили суспензию в стерильной пробирке: 1г фекалий заливали пятью мл 0,9%-ого раствора хлорида, тщательно гомогенизировали, оставляли на 30 мин. для оседания крупных частиц.
2.По 2-3 капли надосадочной жидкости засевали на пластинки дифференциально-селективных сред средами Эндо и Плоскирева, висмутсульфитного агара;
1мл суспензии - в 5 мл селенитовой среды обогащения.
3.Посевы поставили в термостат при +37° Сна сутки-двое.
2 этап исследования
1.Учет роста:
-на среде Эндо и Плоскирева - характерные мелкие, прозрачные, бесцветные колонии;
-на висмут-сульфите - рост отсутствовал;
-в селенитовой среде – диффузное помутнение.
2.Из характерных колоний готовили мазки, обнаружили Грампалочки.
3.Отсевали колонии на среду Олькеницкого.
4.Посевы поставили в термостат при +37° Сна сутки.
3этап исследования
1.Учет роста: в среде Олькеницкого обнаружили изменение цвета среды в «столбике» с красно-оранжевого на желтый, без пузырьков газа; скошенная часть цвет не изменила; почернение отсутствует.
2.Для контроля чистоты выделенной культуры готовили мазки. Обнаружили Грампалочки.
3.Для изучения ферментативных свойств отсевали чистую культуру в среды минимального дифференцирующего ряда с набором углеводов, многоатомных спиртов, аминокислот и др. в соответствии с идентификационной таблицей; на скошенный МПА - для последующего серотипирования.
4.Выполнили посевы чистой культуры для определения ее чувствительности к дизентерийному бактериофагу и антибактериальным препаратам по стандартным методикам.
5. Посевы поставили в термостат при +37° Сна сутки.
4этап исследования
1.Учет ферментативных свойств:
-глюкоза (газ) - «-»
-лактоза - «+» замедленно
-маннит - «+»
-сахароза - «-»
-дульцит - «-»
-индол - «-»
-сероводород - «-»
-орнитин - «-»
-лизин - «-»
-цитрат Симмонса - «-»
-ацетат натрия - «-»
2.Провели серотипирование чистой культуры, выросшей на МПА, в реакции слайд-агглютинации последовательно с шигеллезными сыворотками:
-поливалентной ФЗН (Флекснера-Зонне-Нью-Кастл)– «+»
-S.flexneri 1-5 - «-»
-S.flexneri 6 - «-»
-S.sonnei (1-2 фазы) - «+»
3.Учет определения чувствительности выделенной культуры к поливалентному дизентерийному бактериофагу: в месте нанесения капли бактериофага обнаружена зона лизиса на фоне «сплошного газона» исследуемой культуры.
4.Идентифицировали культуру по совокупности ферментативных и антигенных свойств, а также чувствительности к дизентерийному фагу с помощью таблиц.
Заключение: на основании изучения морфологических, культуральных, ферментативных, антигенных свойств, чувствительности к дизентерийному бактериофагу считаем, что из фекалий больного выделена культура Shigella sonnei.
Протокол № 22
Бактериологическое исследование фекалий больного с подозрением на эшерихиоз
1 этап исследования
1.2г испражнений отобрали с помощью ложки-шпателя, вмонтированного в крышку стерильного контейнера, сразу после дефекации из дезинфицированного и тщательно вымытого судна, на дно которого был помещен лист плотной чистой бумаги. Материал был доставлен в лабораторию в течение 2 ч.
2.Из нативных испражнений приготовили суспензию в стерильной пробирке: 1г фекалий залили пятью мл 0,9%-ого раствора хлорида, тщательно гомогенизировали, оставили на 30 мин. для оседания крупных частиц.
2.По 2-3 капли надосадочной жидкости засеяли на пластинки дифференциально-селективных сред средами Эндо и Плоскирева, висмутсульфитного агара;
1мл суспензии - в 5 мл селенитовой среды обогащения.
3.Посевы поставили в термостат при +37° Сна сутки-двое.
2 этап исследования
Учет роста:
-на среде Эндо и Плоскирева характерные lac+ колонии темно-красного цвета с металлическим блеском и lacбесцветные колонии;
-на висмут-сульфите–коричневые колонии, при снятии которых петлей под ними не оставалось отпечатка на среде;
-в селенитовой среде – диффузное помутнение.
2.Из характерных колоний готовили мазки, обнаружили Грампалочки.
3.Агглютинировали на стекле культуры из 10 подозрительных колоний поливалентной ОКА-эшерихиозной сывороткой; наблюдали положительный результат с культурой из lacколоний.
4.Отсеяли колонии, давшие положительный результат с ОКА-сывороткой, на среду Олькеницкого и параллельно — на скошенный агар для последующего серотипирования.
5.Посевы поставили в термостат при +37° Сна сутки.
3 этап исследования
1.Учет роста: в среде Олькеницкого обнаружили изменение цвета среды в «столбике» с красно-оранжевого на желтый, с пузырьками газа; скошенная часть цвет не изменила; почернение отсутствует.
2.Для контроля чистоты выделенной культуры приготовили мазки. Обнаружили Грампалочки.
3.Для изучения ферментативных свойств отсеяли чистую культуру в среды минимального дифференцирующего ряда с набором углеводов,