Материал: protokoly_2020
Протокол № 1 Окраска препаратов простым методом
При окраске препаратов простым методом использовали культуры микроорганизмов, выросшие на МПА - №1 и МПБ - №2.
Для приготовления мазка из культуры №1 на предварительно обезжиренное предметное стекло нанесли 3-4 капли физ.раствора. Простерилизованной в пламени спиртовки петлей взяли со скошенного МПА культуру №1, суспендировали ее в физ.растворе, высушили и зафиксировали над пламенем спиртовки.
Для приготовления мазка из культуры №2на предварительно обезжиренное предметное стекло нанесли 3-4 капли МПБ с находящимися там микроорганизмами. Мазок высушили и зафиксировали над пламенем спиртовки.
На фиксированный мазок из культур №1 нанесли краситель метиленовый синий на 5 мин., а на мазок из культуры №2 - краситель фуксин Пфейффера на 1-2 мин. Затем слили красители и промыли мазки дистиллированной водой, просушили фильтровальной бумагой.
Полученные препараты из культур №1 и №2 микроскопировали с иммерсионной системой.
В мазке из культуры №1 обнаружили кокки в виде «гроздьев винограда» синего цвета, из культуры №2 – палочки красного цвета.
Рисунок
Заключение
На основании полученных результатов считаем, что предположительно, в мазке из культуры №1 обнаружены, стафилококки, из культуры №2 – палочки средних размеров.
Протокол № 2 Окраска препаратов сложным методом по Граму
При окраске препаратов сложным методом использовали смесь неизвестных микроорганизмов в физ.растворе, из которой готовили фиксированный препарат.
Окрашивали препарат по Граму следующим образом:
1)на фиксированный мазок накладывали фильтровальную бумагу, на которую наносили раствор генциан-виолета на 1-2 мин., затем раствор сливали;
2)обрабатывали мазок раствором Люголя 30-60 с. и, не промывая его водой, сливали раствор;
3)обесцвечивали мазок путем нанесения на стекло 95% спирта на 20-50 с., далее промывали препарат водой;
4)наносили на мазок фуксин Пфейффера, через 1-2 мин. краситель сливали, препарат промывали водой, высушивали фильтровальной бумагой и микроскопировали с иммерсионной системой.
Вмазке обнаружили Грам+ бактерии – кокки, расположенные в
виде «гроздьев винограда» фиолетового цвета, и Грамбактерии – палочки средних размеров, окрашенные в красный цвет, расположенные хаотично
Рисунок
Заключение
На основании полученных результатов считаем, что в исследованной смеси микроорганизмов содержатся, предположительно, микроорганизмы, относящиеся к роду Staphylococcus, и палочковидные бактерии.
Протокол № 3 Выделение чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных
бактерий и их идентификация
1 этап исследования
Для выделения чистой анаэробных микроорганизмов петлей – секторами, штрихами МПА.
культуры аэробных и факультативнопроизвели посев смеси микроорганизмов и шпателем – площадками на пластинки с
|
I |
II |
|
8 |
|
8 |
|
|
|
|
|
● |
|
●●● |
8 |
8 8 8 8 |
8 8 8 |
8 |
|
|
|
|
IV |
III |
штрихами |
секторами |
площадками |
Посевы поместили в термостат при +370С на сутки.
2 этап исследования
Учет роста.
На МПА обнаружены колонии микроорганизмов 2-х типов:
1 типа - средних размеров, круглой формы, с гладкой поверхностью, полупрозрачные;
2 типа - мелкие, округлые, с гладкой поверхностью и ровным
краем, выпуклые, непрозрачные, золотистого цвета.
При окраске по Граму в мазках из колоний 1 типа обнаружены Грампалочки средних размеров, расположенные хаотично; 2 типа –Грам + кокки, расположенные в виде «гроздьев винограда».
Произвели посев культуры из колоний 1 и 2 типа на скошенный МПА для накопления выделенных чистых культур микроорганизмов. Посевы поставили в термостат на сутки.
3 этап исследования
Учет роста. На скошенном МПА с посевом культуры из колоний 1 типа обнаружен рост в виде полупрозрачного слизистого налета, 2 типа- золотисто-белого налета.
Для проверки чистоты выделенной культуры сделали мазки и окрасили по Граму. В мазках из культуры 1 типа – Грампалочки средних размеров, расположенные хаотично,2 типа - Грам+ кокки, расположенные в виде «гроздьев винограда».
Для идентификации выделенных чистых культур определили их ферментативную активность. Для этого произвели посев чистой культуры микроорганизмов 1 типа на среды короткого "пестрого" ряда с глюкозой, лактозой, маннитом, мальтозой, сахарозой (для обнаружения сахаролитических ферментов), в пробирки с МПБ и СИБами (для определения образования индола и сероводорода).
Посев чистой культуры микроорганизмов 2 типа произвели в пробирку с цитратной кроличьей плазмой (для определения фермента патогенности плазмокоагулазы), на пластинку МЖСА (для определения фермента патогенности лецитиназы), полужидкие среды Гисса с маннитом в аэробных условиях и глюкозой анаэробно (для выявления сахаролитических ферментов).
Посевы поместили в термостат на сутки.
4 этап исследования
Учет роста.
Впосеве культуры 1 типа на средах «пестрого ряда» обнаружено изменение цвета сред и пузырьки газа, что свидетельствует о наличии сахаролитических ферментов, разлагающих глюкозу, лактозу, маннит, мальтозу, сахарозу с образованием кислоты и газа. В МПБ индикаторная полоска на индол покраснела (индол «+»), на сероводород – диск остался без изменения цвета (Н2S «-»).
Впосеве культуры 2 типа обнаружено:
- в цитратной кроличьей плазме - образование сгустка, что свидетельствует о наличии фермента патогенности плазмокоагулазы,
-на МЖСА - колонии золотистого цвета с зонами опалесценции, что свидетельствует о наличии фермента патогенности лецитиназы,
-на средах с глюкозой и маннитом – изменение цвета сред на поверхности и внутри столбика, что свидетельствует на наличии ферментов, разлагающих глюкозу и маннит.
Спомощью сравнения полученных результатов со справочными таблицами (из инструктивных документов) провели идентификацию выделенных культур.
Регистрация результатов:
тесты |
глюкоза |
лактоза |
сахароза |
мальтоза |
маннит |
Н2S |
индол |
выделение |
|
|
|
|
|
|
|
К |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
|
Г |
+ |
|
|
|
|
- |
+ |
Условные обозначения: К – выделение кислоты; |
Г – выделение газа |
|
|||||
Заключение
На основании полученных результатов считаем, что из смеси микроорганизмов выделены культуры рода Esсherichia и вида Staphylococcus
аureus.
Протокол № 4 Выделение чистой культуры анаэробных бактерий и ее
идентификация
1 этап исследования
Произвели посев суспензии из почвы в регенерированные кипячением и охлажденные до +450С питательные среды: Китт-Тароцци, Вильсон-Блер и молоко по Тукаеву. Посевы поместили в термостат при +370С на сутки.
2 этап исследования
Учет роста через 5 часов культивирования. На среде Китт-Тароцци обнаружено диффузное помутнение и пузырьки газа на кусочках паренхиматозных органов. На среде молоко по Тукаеву – образование творожистого сгустка, выброшенного газами на поверхность среды, ВильсонБлер – почернение и разрывы среды вследствие газообразования.
Для выделения чистой культуры анаэробных микроорганизмов произвели разведение культуры, выросшей на среде Китт-Тароцци, по методу Вейнберга (схема 1) с помощью пастеровской пипетки, которую последовательно вносили в среду Китт-Тароцци с посевом, три пробирки с физ.раствором и три пробирки с расплавленным и остуженным МПА. Из последней пробирки (№6) содержимое (МПА и культура микроорганизмов) внесли в чашку по Перетцу. Посевы поместили в термостат.