Материал: protokoly_2020

Произвели идентификацию выделенной чистой культуры с использованием следующих тестов:

-оксидазный и каталазный – положительно,

-окисление сахаров путем посева на чашки с 20% сывороточным агаром, содержащие один из углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза, лактоза, фруктоза) и индикатор;

-посев на бессывороточный МПА;

-посев на 20% сывороточный агар с 0,2% желчи.

Посевы поместили в термостат на сутки при +37°С.

4 этап

Учет дифференциальных тестов:

-окисление сахаров: глюкоза «+», мальтоза «+», сахароза «-», лактоза «-», фруктоза «-»;

-на бессывороточном МПА - рост отсутствует;

-на 20% сывороточномагаре с 0,2% желчи – рост отсутствует. Идентифицировали вид нейссерий с помощью таблицы.

Произвели определение серогруппы, выделенной культуры Neisseria meningitidis в реакции агглютинации на стекле с помощью агглютинирующих сывороток против менингококков серогрупп А, В, С. Для этого на предметное стекло, разделенное маркером на три части, нанесли физ. раствор (по капле на каждую часть). Далее стерильной петлей с поверхности агаровой среды отобрали культуру менингококков и тщательно суспендировали в каплях физиологического раствора на стекле. После этого, если не выявлено спонтанной агглютинации с физ. раствором, в три подготовленные части добавили антисыворотки А, В и С (по капле) и перемешали.

Учет реакции произвели через 1 - 2 мин. Наблюдали образование крупных хлопьев на фоне полного просветления агглютинационного поля в капле с антисывороткой А и гомогенное помутнение в каплях с антисыворотками В и С.

Заключение

На основании изученных морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных свойств считаем, что из ликвора больного с подозрением на гнойный менингит выделена культура

Neisseria meningitidis серогруппы А.

Протокол № 18 Бактериологическое исследование отделяемого дыхательных путей

больного с подозрением на коклюш

1 этап исследования

У больного с подозрением на коклюш на 2-й неделе заболевания произвели забор материала двукратно ежедневно натощак. Для этого слизь с задней стенки глотки отобрали «заднеглоточными» тампонами (последовательно сухим, затем смоченным физиологическим раствором по прописи Е.А. Кузнецова).

Исседуемый материал доставили в лабораторию при температуре +3537°С в течение 2 часов.

Посев материала произвели на две чашки казеиново-угольного агара (КУА): с добавлением селективного фактора (цефалексин 40 мг/л среды) и без него. Материал тщательно втирали тампоном по периферии чашки Петри в виде 4 - 5 площадок, а затем - Z-образным штрихом в центре чашки. Далее стерильным шпателем растерли центральные части посева, не касаясь площадок.

Посевы поставили в термостат при +35°С на 2-5 суток с ежедневным просмотром.

2 этап исследования

Учет роста. Через 72 часа на КУА обнаружили рост небольшого количества выпуклых, влажных, гладких, блестящих с ровными краями, серого цвета с жемчужным оттенком колоний, мягкой (маслянистой) консистенции, легко снимающихся петлей. Произвели просмотр колоний при помощи бинокулярного стереоскопического микроскопа и обнаружили узкий луч света («хвост кометы»), отходящий от центра колонии.

Для накопления чистой культуры бордетелл подозрительные колонии пересеяли сектора пластинки КУА.

Посевы поставили в термостат при +35°С на 2-3 сут.

3 этап исследования

Учет роста. На секторах среды КУА - рост в виде сплошного сероватожемчужного налета. В мазках – Граммелкие овоидные палочки (коккобактерии), расположенные равномерно.

Для идентификации выделенной культуры по антигенным свойствам произвели постановку реакции агглютинации (РА) на стекле со специфическими неадсорбированными сыворотками в разведении 1/10:

-коклюшная «+»,

-паракоклюшная «+»,

адсорбированными монорецепторными сыворотками:

-факторная 1 «+»,

-факторная 14 «-»

Для определения сероварианта коклюшного микроба дополнительно поставили РА на стекле с монорецепторными сыворотками:

-- факторная 2 «-», - факторная 3 «+».

Для изучения биохимических свойств произвели посев выделенной чистой культуры на среду с тирозином (определение фермента тирозиназы), среду с мочевиной (определение фермента уреазы), среду Симмонса (определение способности утилизировать цитраты). Для определения подвижности сделали посев «уколом» в полужидкий агар. Для определения способности расти на простых средах – посев на скошенный МПА.

Посевы поставили в термостат при +35°С на 1-2 сут.

4 этап исследования

Произвели учет дифференциальных тестов:

-на МПА - роста нет,

-на среде с тирозином - изменения цвета среды не обнаружено (фермент тирозиназа отсутствует),

-на среде с мочевиной - изменения цвета среды не обнаружено (фермент уреаза отсутствует),

-на среде Симмонса - изменения цвета среды не обнаружено

(утилизация цитратов отсутствует).

Заключение:

На основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, антигенных и биохимических свойств считаем, что от больного выделена культура Bordetella pertussis, серовариант 1.0.3.

Протокол № 19 Бактериологическое исследование отделяемого из зева и носа больного с

подозрением на дифтерию

1 этап исследования

У больного с подозрением на дифтерию ротоглотки отобрали отделяемое зева и носа отдельными стерильными ватными тампонами натощак, с использованием шпателя, не касаясь тампоном языка и внутренних поверхностей щек и зубов. Материал из ротоглотки отбирали на границе пораженных и здоровых тканей миндалин, слегка нажимая на них тампоном. Материал из носа отбирали тампоном, который вводили сначала в один, а потом в другой носовой ход, не касаясь крыльев носа снаружи.

Тампоны доставили в лабораторию в течение 3 часов.

Произвели посев материала с тампонов на два сектора (по 1/2 пластинки) кровяно-теллуритового агара (КТА), маркируя их: «зев», «нос». При посеве

на секторе сначала формировали площадку 2х1 см2, затем оставшуюся поверхность засевали частыми штрихами.

Посевы поместили в термостат при +37°С на 1 сутки, при отсутствии роста - оставили на 2-е сутки.

2 этап исследования

Учет роста. На КТА обнаружили рост R-форм колоний: темно-серых, мелких (1 -2 мм), шероховатых в виде «маргаритки».

Произвели постановку основного диагностического теста — определение токсигенности культуры (продукции дифтерийного токсина) в иммунопреципитационном тесте (РП в геле) Элека. Исследовали не менее 2-х колоний, половину каждой из них отсеяли на среду для определения токсигенности дифтерийных микробов (ОТДМ) и необожженной петлей - на среду Пизу для определения цистиназной активности.

Другую половину колонии пересевали на скошенный сывороточный агар для накопления чистой культуры.

Постановка РП в геле по Элеку

На поверхность чашки Петри с ОТДМ поместили диски с дифтерийным антитоксином. Вокруг каждого диска с антитоксином сформировали пять «бляшек»: две бляшки контрольного токсигенного штамма С.diphtheriae tох+ и три — испытуемые.

Чашки с посевами поместили в термостат при +37°С.

3 этап исследования

Учет теста Элека произвели через 18-24 часа, а также — через 48 часов: между диском с антитоксином и испытуемой культурой образовались линии преципитации, которые под углом сливались с линиями преципитации контрольного токсигенного штамма С.diphtheriae tох+ (рис.1).

Рис. 1. Схема постановки реакции РП в геле по Элеку с помощью бумажных дисков

Условные обозначения:

А — бумажные диски с антитоксином; К - контрольный токсигенный штамм; 1 - испытуемый материал.

Проба Пизу положительна (в столбике среды вокруг «укола» образовалось облачко черно-коричневого цвета).

Предварительный ответ:

На основании наличия специфических линий преципитации и положительной пробы Пизу от больного выделена культура токсигенных коринебактерий дифтерии.

Для окончательной идентификации вида коринебактерий по биохимическим свойствам произвели посев чистой культуры на среды Гисса (с сахаразой, глюкоза, крахмалом) и добавлением сыворотки, а также в среду с мочевиной (для определения уреазной активности).

Посевы поместили в термостат при +37°С на сутки.

4 этап исследования

Учет дифференциальных тестов:

-сахарозой «-»,

-глюкоза «+»,

-крахмал «+»,

-уреаза «-».

С помощью идентификационных таблиц установили вид и биовар возбудителя.

Заключение:

На основании изучения токсигенных, морфологических, культуральных, биохимических, считаем, что от больного выделена культура C.diphtheriae

биовар gravis tox+.