33. Аллергический метод диагностики инфекционных болезней.
Обнаруживают повышенную чувствительность макроорганизма к опр. возбудителям инфекционного заболевания или продуктам их жизнедеятельности. Используемые препараты – аллергены. Внутрикожный способ введения аллергена.
34. Биологический метод диагностики инфекционных болезней.
Заражение лаб. животных исследуемым материалом от больного с целью воспроизведения у них инфекционного заболевания или последующего выделения возбудителя.
35. Молекулярно-генетический метод диагностики инфекционных болезней.
ПЦР (Полимеразная цепная реакция) - анализ позволяет определить содержание (количество копий, титры) ДНК и РНК, провести генотипирование возбудителей, определить чувствительность к антибиотикам, прогнозировать исход болезни.
36. Характеристика возбудителя ВИЧ-инфекции. Принципы микробиологической диагностики. Препараты для специфического лечения.
Морфология и культивирование:
Вирус иммунодефицита человека относится к семейству Ретровирусов (единственное семейство с диплоидным геномом).
РНК-содержащий, имеющий в геноме 9 генов, имеет сферическую форму, внешняя оболочка из двойного липидного слоя с гликопротеиновыми «шипами». Каждый «шип» состоит из двух субъединиц (gp 41 и gp120 – рецептор вируса).
В состав вириона входит обратная транскриптаза, с помощью кот. двунитевый РНК-овый геном переводится в ДНК-овый и встраивается в ДНК хозяина и происходит носительство вируса макроорганизмом.
Вирус очень трудно культивируется в искусственных условиях. Не размножается на куриных эмбрионах, размножается только в культурах лимфоцитов.
Антигенная структура:
Имеет ряд поверхностных (gp160, gp120, gp41) и сердцевинных АГ. ВИЧ обладает уникальной антигенной изменчивостью, что затрудняет диагностику и специфическую профилактику ВИЧ-инфекции.
Факторы патогенности:
ВИЧ обладает лимфотропностью, благодаря тому, что на лимфоцитах Т-хелперах (В-лимфоцитах, макрофагах, клетках Лангерганса) существуют в норме рецепторы CD-4, имеющие сродство к белку gp120 вируса. Это создаёт благоприятные условия для прикрепления вируса к лимфоцитам, проникновения в клетку и последующего размножения в лимфоците, в результате чего Т-хелперы распознают клетки как чужеродные и уничтожают их, образую симпласты. Поражение иммунных и др. клеток приводит к снижению защитных функций иммунной системы, развитию иммунодефицитного состояния.
Резистентность:
При комнатной температуре сохранется до 4 сут. Кипячение убивает мгновенно. Через 5-10 мин. убивается после обработки спиртом, эфиром.
Эпидемиология:
Вирус у инфицированных людей выделяется из всех биологических жидкостей: макс. кол-во в крови и семенной жидкости. Антропоноз – источником является только больной человек и носитель ВИЧ. Заражение происходит при половом контакте и парентеральном введении ВИЧ-инфицированных материалов (кровь, сыворотка, плазма, препараты крови), а также при использовании нестерильных инструментов, загрязнённых кровью больных (шприцы, иглы, системы для переливания крови). Возможно заражение вертикальным механизмом, а также через молоко ВИЧ-инфицированной матери.
Патогенез:
Инфекция начинается с момента внедрения вируса в организм человека .
Патогенез включает 5 стадий:
Инкубационный период (до 3-х месяцев);
Стадия первичных проявлений (лихорадка, интоксикация, понос, увеличение лимфатических узлов, ОРВИ,грипп);
Латентный период (5-10 лет, человек внешне здоров, но у него появляются АТ к ВИЧ);
Четвёртый период включает в себя СПИД -ассоциированный комплекс, вирус интенсивно размножается во всём организме.;
Пятый период – полное отсутствие иммунного ответа.
Летальность 100%, причиной смерти явл. вторичные инфекции, опухоли.
Симптомы ВИЧ-инфекции:
Похудение на 10% и более в течение 2 месяцев;
Длительное лихорадочное состояние, перемежающееся или постоянное;
Хроническая диарея;
Упорный кашель;
Генерализованный дерматит;
Кандидоз ротовой полости и глотки;
Хронический простой герпес.
Лабораторная диагностика:
Вирусологическая и серологическая диагностика сводится к определению в жидкостях и тканях организма вируса или его АГ, а также АТ к ВИЧ в сыворотке крови.
Иммуноферментный метод: скрининг АТ против ВИЧ. Если реакция положительная, то ставится повторная с др. сывороткой и на более совершённой системе.
Затем проводят иммуноблоттинг ( электрофорез и иммуноферментный анализ)
ПЦР (полимеразная цепная реакция).
Лечение:
Лечение неэффективно. Используют нек. химиотерапевтические препараты , задерживающие репродукцию ВИЧ в организме: Азидотимидин + α-интерферон удлиняют латентный период, подавляя репликцию. Также применяют переливание крови.
Специфическая профилактика не разработана.
HBV
Морфология и культивирование:
Возбудитель вирусного гепатита В относится к ДНК-содержащим гепаднавирусам. Вирионы имеют сферическую форму. Геном состоит из кольцевой двунитевой молекулы ДНК, кот. в отличие от ДНК других вирусов имеет однонитевой участок. В составе вириона есть фермент – обратная транскриптаза. Суперкапсид состоит из 3-ёх белков: главного, большого и среднего.
Вирус тяжело культивируется в культурах клеток, не культивируется в куриных эмбрионах. Единственное животное, восприимчивое к вирусу, - шимпанзе. Но она не является материалом для биологической диагностики, а является моделью человека.
Антигенная структура:
В составе вируса гепатита В обнаружено 4 АГ: HBs, HBc, HBe, HBx. В организме больных гепатитом В синтезируются АТ к трём АГ HBs, HBc, HBe.
Резистентность:
Вирус выдерживает кипячение в течение 15-20 мин. Не инактивируется при УФ-облучении плазмы и её хранении при -200С.
Эпидемиология:
Антропоноз – источниками явл. больные люди и вирусоносители. Заражение происходит через кровь парентеральным механизмом, половым путём и вертикальным способом.
Патогенез и клиническая картина:
Вирусы попадают в кровь парентерально, с кровью переносятся в печень и размножаются в гепатоцитах. Инкубационный период отличается продолжительностью до 3-6 мес.
В зависимости от типа взаимодействия вирусов с гепатоцитами (интегративный или пролиферативный), силы иммунного ответа, дозы вируса развиваются различные формы болезни: тяжёлый гепатит с высокой летальностью и переходом в хроническую форму; длительное носительство; первичный рак печени.
Иммунитет:
Хронические формы гепатита В обусловлены иммунодефицитным состоянием. Свыше 5% случаев гепатита В заканчивается носительством HBs-антигена, являющегося основным показателем перенесённой хронической инфекции и носительства.
Микробиологическая диагностика:
Материалом для исследования служит кровь больного. Серологическая диагностика основана на выявлении вирусных АГ и АТ к ним иммуноферментным и радиоиммунным методом, используют также ПЦР. Основное диагностическое значение имеет определение в сыворотке больных HBs-антигена, кот. появляется в инкубационном периоде и исчезает при благоприятном течение острого гепатита через 6-8 мес. после начала заболевания. Однако при переходе заболевания в хроническую форму и при вирусоносительстве данный АГ циркулирует в крови длительное время. Показателем острой инфекции служит одновременное обнаружение в крови HBs- и HBc-антигенов.
Специфическая профилактика:
Применяется энжерикс-вакцина из HBs-антигена, входящая в национальный календарь прививок. Первый раз вводится в первый день жизни, затем в конце 1 месяца и в конце 6 месяца. Вакцинируются также лица из группы риска заражения вирусным гепатитом В – работники здравоохранении.
HDV
Возбудитель дельта-гепатита имеет сферическую форму, геном представлен РНК. Является дефектным, т. к. у него отсутствует собственная оболочка, поэтому для проявления патогенного действия он должен использовать оболочку вируса гепатита В. Вирус гепатита D может вызвать поражение печени лишь у людей, уже инфицированных вирусом гепатита В.
Не культивируется один нигде.
Иммунизация против гепатита В эффективна и против гепатита D.
Эпидемиология гепатита, вызываемого дельта-вирусом, практически не отличается от эпидемиологии гепатита В.
Серологическая диагностика основывается на выявлении АТ к АГ вируса в сыворотке крови с помощью ИФА и радиоиммунного метода.
HAV
Гепатит А – острое инфекционное заболевание, кот. характеризуется лихорадкой, поражением печени, в ряде случаев – желтухой и отличается склонностью к эпидемическому распространению. В основном болеют дети и подростки.
Вирус гепатита А - РНК-содержащий вирус, геном представлен однонитчатой позитивной РНК, относится к энтеровирусам, семейству Пикорнавирусы.
Культивируется в культурах клеток.
Вирусы выживают в окр. среде, инактивируются при кипячении в течение 5 мин.
Эпидемиология:
Источниками инфекции явл. больные как с клинически выраженными, так и бессимптомными формами инфекции. Механизм передачи инфекции фекально-оральный. Вирусы выделяются с фекалиями, начиная со второй половины инкубационного периода и в начале клинических проявлений; в это время больные наиболее опасны для окружающих. ВГА передаются через воду, пищевые продукты, предметы обихода, грязные руки.
Патогенез и клиника:
С пищей попадает в ЖКТ, где репродуцируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфатических узлах. Затем возбудитель проникает в кровь.
Выделяют три клинические формы гепатита А: желтушная, безжелтушная, бессимптомная.
Иммунитет:
Стойкий, связанный с IgG и секреторными IgA. В начале заболевания появляются IgМ, кот. сохраняются в организме в течение 4-6 мес. и имеют диагностическое значение.
Лабораторная диагностика:
Исследуемым материалом служат сыворотка и фекалии больного. При ранней диагностике основное значение имеет обнаружение нарастания титра АТ класса IgМ с помощью ИФА, РИА и иммунной электронной микроскопии. Этими же методами можно обнаружить вирусы и вирусный АГ в ыекалиях больных.
Специфическая профилактика массовая не проводится. Для профилактики детям в предэпидемический период, а также лицам, имевшим контакт с больными, вводят иммуноглобулин, полученный из смеси донорских сывороток.
HEV
Вирус гепатита Е - РНК-содержащий вирус сферической формы. С трудом культивируется в культурах клеток.
Источник - больные люди. Механизм заражения – фекально-оральный, основной путь передачи – водный. Болеют преимущественно лица молодого и среднего возраста
Клиническая картина схожа с таковой при гепатите А.
Для диагностики исп. серологический метод, заключающийся в обнаружении АТ к вирусу с помощью ИФА. РНК вируса гепатита Е можно определить в фекалиях и сыворотках больных методом ПЦР.
Грипп – острое респираторное заболевание, характеризующееся поражением слизистых оболочек верхних дыхательных путей, лихорадкой, симптомами общей интоксикации, нарушением деятельности сердечно-сосудистой и нервной систем. Грипп отличается склонностью к эпидемическому и пандемическому распространению благодаря высокой контагиозности и изменчивости возбудителя.
РНК-содержащие вирусы относятся к семейству Orthomyxoviridae (от греч. orthos – правильный, myxa- слизь).
Морфология:
Имеют сферическую форму, реже палочковидную и нитевидную. Геном представлен однонитчатой минус-нитевой РНК. На поверхности суперкапсидной оболочки имеются гликопротеидные шипы, одни из которых являются гемаггютинином, другие – нейраминидазой.
Культивирование:
Для культивирования используют куриные эмбрионы, культуры клеток, иногда лабораторных животных