(комплекса антиген — антитело) и отмывка его от остальных компонентов сыворотки; диссоциация преципитата; отделение А. от антигена на основе различий в их молекулярной массе, заряде и других физико-химических свойств. Для специфического выделения А. широко используют иммуносорбенты — нерастворимые носители, на которых фиксирован антиген. В этом случае процедура получения А. значительно упрощается и включает пропускание иммунной сыворотки через колонку с иммуносорбентом, отмывку иммуносорбента от несвязавшихся белков сыворотки, элюцию фиксированного на иммуносорбенте А. при низких значениях рН и удаление диссоциирующего агента путем диализа.
Применение антител в мед. Вследствие высокой специфичности и большой роли в защитных иммунных реакциях антитела используют для диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний, определение иммунного статуса организма, профилактики и терапии ряда инфекционных и неинфекционных болезней. Для этого сущ-ют соответствующие иммуннобиологические препараты, созданные на основе антител и имеющие целевое назначение.
89. Иммуномодуляторы – это лекарственные препараты, восстанавли
вающие в терапевтических дозах функции иммунной системы (эффек
тивную иммунную защиту). Следовательно, иммунологический эффект
иммуномодуляторов зависит от исходного состояния иммунитета боль
ного: эти лекарственные средства понижают повышенные и повышают
пониженные показатели иммунитета. В соответствии с названием им
муностимуляторы – это такие лекарственные препараты, которые пре
имущественно усиливают иммунитет, доводя пониженные показатели
до нормальных значений [2]. Иммунодепрессанты – это лекарственные
препараты, подавляющие иммунный ответ. Иммуностимуляторы применяют для лечения и профилактики ряда инфекционных и неинфекционных заболеваний.
Иммуносупрессоры используют для подавления активности лимфоцидных клеток при воспалении, аллергии, трансплантации, лечении аутоиммунных заболеваний.
Фармакологическое действие иммуномодуляторов
Иммуномодуляторы микробного происхождения
В организме главной мишенью для иммуномодуляторов микробного происхождения являются фагоцитарные клетки. Под влиянием этих препаратов усиливаются функциональные свойства фагоцитов (повышаются фагоцитоз и внутриклеточный киллинг поглощенных бактерий), возрастает продукция провоспалительных цитокинов, необходимых для инициации гуморального и клеточного иммунитета. В результате может увеличиваться продукция антител, активироваться образование антигенспецифических Т-хелперов и Т-киллеров.
Иммуномодуляторы тимического происхождения
Естественно, что в соответствии с названием главной мишенью для иммуномодуляторов тимического происхождения являются Т-лимфоциты. При исходно пониженных показателях препараты этого ряда повышают количество Т-клеток и их функциональную активность. Фармакологическое действие синтетического тимусного дипептида Тимогена состоит в повышении уровня циклических нуклеотидов по аналогии с эффектом тимусного гормона тимопоэтина, что ведет к стимуляции дифференцировки и пролиферации предшественников Т-клеток в зрелые лимфоциты.
90. Вакцинопрофилактика – вакцинирование с целью профилактики инфекционных болезней. Вакцинопрофилактику подразделяют на плановую и вынужденную. Плановую вакцинопрофилактику осуществляют с предохранительной целью в угрожаемой от болезни зоны, вынужденную вакцинопрофилактику – при возникновении болезни с целью ее ликвидации.
Вакцинотерапия
Вакцинотерапия – лечение инфекционных больных с помощью вакцин. Применяют вакцинотерапию при хронически протекающих болезнях (стафилококкоз, стрептококкоз); основана на многократном, ритмичном воздействии на организм специфическим антигенным раздражителем, сопровождающимся выработкой антител и повышением общей сопротивляемости организма.
Аутовакцина - вакцина, приготовленная из бактерий, выделенных от больного человека, с последующим их культивированием и дальнейшим использованием в качестве лекарства по классическому принципу медицины: лечи подобное подобным. Аутовакцины позволяют побеждать хронические инфекции за счет внутренних резервов самого организма человека методом повышения общего специфического иммунитета и восстановления местного иммунитета на слизистых оболочках. Т.е. не убивать бактерию, а восстановить такой уровень местной защиты, чтобы произошло самопроизвольное очищение слизистых оболочек от этих бактерий.
Аутовакцины готовятся из бактерий и грибов, выделенных из воспалительных очагов у пациентов. После идентификации бактерий их дополнительно подращивают в лабораторных условиях на питательных средах. В аутовакцине нет живых бактерий, только инактивированные, и то - в виде отдельных фрагментов. Поэтому
аутовакцины, обладая высокой иммуногенностью (способностью повышать местный иммунитет на слизистых оболочках), совершенно не вирулентны: не могут приводить к дополнительному заражению и вызывать новые заболевания.
Терапевтический эффект в результате аутовакцинотерапии обусловлен развитием противоаллергического иммунитета, приводящего к десенсибилизации организма.
91. Под вакцинальным процессом следует понимать изменения гомеостаза, возникающее в организме после введения вакцинного препарата. Вакцинальный процесс включает комплекс сложных реакций, к которым относятся: антителообразование, адаптационные (скрытые) и поствакцинальные реакции, поствакцинальные осложнения. Главным из этих реакций является комплекс патофизиологических процессов, направленных на сохранение постоянства внутренней среды. При отсутствии температуры и других клинических проявлений нормальный вакцинальный процесс считают бессимптомным. Частота развития нормального вакцинального процесса зависит от применяемой вакцины.
Эффективный иммунный ответ на вакцину зависит от способности вакцин:
- активировать антиген-презентирующие клетки;
- активировать антиген-специфические Т- и В-лимфоциты;
- индуцировать образование большого числа Т- и В-лимфоцитов памяти;
- генерировать образование Т-хелперов (Th2) и цитотоксических Т-лимфоцитов (СД8);
- обеспечивать длительное сохранение антигенов в лимфоидной ткани.
В иммунном ответе на введение вакцины участвуют макрофаги, Т-лимфоциты (эффекторные - цитотоксическими, регулярные - хелперы, супрессоры, Т-клетки памяти), В-лимфоциты (В-клетки памяти), продуцируемые плазматическими клетками антитела (Ig M, G, А), а также цитокины (монокины, лимфокины).
После введения вакцины макрофаги захватывают антигенный материал, расщепляют его внутриклеточно и представляют фрагменты антигена на своей поверхности в иммуногенной форме (эпитопы). Т-лимфоциты распознают представленные макрофагом антигены и активизируют В-лимфоциты, которые превращаются в клетки, продуцирующие антитела.
При избытке продукции AT в процесс включаются Т-супрессоры, кроме того на IgG могут вырабатываться антиидио-типические AT, что прерывает процесс выработки AT.
92. Комбинированные вакцины – это препараты, которые обеспечивают иммунитет сразу от нескольких болезней. Когда-то все вакцины вводили отдельно друг от друга. В те времена за один визит к врачу дети могли получить сразу 5 уколов. Но около 50 лет назад стали применять комбинированные вакцины. Благодаря долгим исследованиям, количество антигенов, которые можно ввести сразу, за один раз, увеличилось.
Сейчас во всем мире используются:
АКДС-вакцина;
комплексные вакцины из условно патогенных микроорганизмов;
гриппозная вакцина из трех циркулирующих штаммов вируса гриппа;
менингококковая вакцина из антигенов 4-х серотипов менингококка;
пневмококковая вакцина: конъюгированная или поливалентная включающая 23 серотипа пневмококка. В последние годы полисахаридную вакцину используют для экстренной профилактики, а конъюгированную для плановой;
трехвалентная полиомиелитная (живая, инактивированная) вакцина;
живая комплексная вакцина для профилактики кори, паротита и краснухи.
Количество побочных действий при комплексной вакцинации не намного превышает показатели моновакцинации (когда вводится вакцина лишь против одного заболевания). Наибольшее количество побочных эффектов вызывает АКДС-вакцина, но они незначительны: повышение температуры на несколько дней, небольшие высыпания на коже.
93. Анатоксины – препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные своих токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Получение: токсигенные бактерии выращивают на жидких средах, фильтруют с помощью бактериальных фильтров для удаления микробных тел, к фильтрату добавляют 0,4% формалина и выдерживают в термостате при 30-40t на 4 недели до полного исчезновения токсических свойств, проверяют на стерильность, токсигенность и иммуногенность. Эти препараты называются нативными анатоксинам, в настоящее время почти не используются, т. к. содержат большое количество балластных веществ, неблагоприятно влияющих на организм. Анатоксины подвергаю физической и химической очистке, адсорбируют на адъювантах. Такие препараты называются адсорбированными высокоочищенными концентрированными анатоксинами.
Анатоксины применяются для профилактики и реже, для лечения токсинемических инфекций дифтерия, газовая гангрена, ботулизм, столбняк). Так же анатоксины применяются для получения антитоксических сывороток путем гипериммунизации животных.
Примеры препаратов: АКДС, АДС, адсорбированный стафилококковый анатоксин, ботулинистический анатоксин, анатоксины из экзотоксинов возбудителей газовых инфекций.
№ 94 Живые вакцины. получение, применение. Достоинства и недостатки.
Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий.
Аттенуация (ослабление) возможна путём воздействия на штамм химических (мутагены) и физических (температура) факторов или посредством длительных пассажей через невосприимчивый организм. Так же в качестве живых вакцин используются дивергентные штаммы (непатогенные для человека), имеющие общие протективные антигены с патогенными для человека микробами. Примером такой вакцины является БЦЖ и вакцина против натуральной оспы.
Возможно получение живых вакцин генно-инженерным способом. Принцип получения таких вакцин сводится к созданию непатогенных для человека рекмбинантных штаммов, несущих протективные антигены патогенных микробов и способных при введении в орг. человека размножаться и создавать иммунитет. Такие вакцины называют векторными.
Вне зависимости от того, какие штаммы включены в вакцины, бактерии получают путём выращивания на искусственных питательных средах, культурах клеток или куриных эмбрионах. В живую вакцину, как правило, добавляют стабилизатор, после чего подвергают лиофильному высушиванию.
В связи с тем, что живые вакцины способны вызывать вакцинную инфекцию (живые аттенуированные микробы размножаются в организме, вызывая воспалительный процесс проходящий без клинических проявлений), они всегда вызывают перестройку иммунобиологического статуса организма и образование специфических антител. Это так же может являться недостатком, т. к. живые вакцины чаще вызывают аллергические реакции.
Вакцины данного типа, как правило, вводятся однократно.
Примеры: сибиреязвенная вакцина, чумная вакцина, бруцеллёзная вакцина, БЦЖ вакцина, оспенная дермальная вакцина.
№ 95 Инактивированные (корпускулярные) вакцины. Применение. Недостатки.
Инактивированные (убитые, корпускулярные или молекулярные) вакцины – препараты, в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины).
Для выделения из бактерий и вирусов антигенных комплексов (гликопротеинов, ЛПС, белков) применяют трихлоруксусную кислоту, фенол, ферменты, изоэлектрическое осаждение.
Их получают путем выращивания патогенных бактерий и вирусов на искусственных питательных средах, инактивируют, выделяют антигенные комплексы, очищают, конструируют в виде жидкого или лиофильного препарата.
Преимуществом данного типа вакцин является относительная простота получения (не требуется длительного изучения и выделения штаммов). К недостаткам же относятся низкая иммуногенность, потребность в трехкратном применении и высокая реактогенность формализированных вакцин. Так же, по сравнению с живыми вакцинами, иммунитет, вызываемый ими, непродолжителен.
В настоящее время применяются следующие убитые вакцины: брюшнотифозная, обогащенная Vi антигеном; холерная вакцина, коклюшная вакцина
97.Принципы рациональной антибиотирапии.
• Микробиологический принцип, заключается в том, что: перед назначением антибиотика необходимо установить возбудителя инфекции и определить его индивидуальную чувствительность к антибиотикам. • Фармакологический принцип заключается в том, что: необходимо учитывать особенности препарата — его фармакокинетику и фармакодинамику, распределение в организме, кратность введения, возможность сочетания нескольких препаратов. • Клинический принцип заключается в том, что: при назначении препарата учитывают, безопасность данного антибиотика для пациента, что зависит от индивидуальных особенностей состояния больного, наличия сопутствующей патологии и т.д.. • Эпидемиологический принцип заключается в том, что: при выборе препарата, учитывается состояние устойчивости микробных штаммов, циркулирующих в данном отделении, стационаре и даже регионе. • Принцип доступности антибиотика в очаг воспаления заключается в том, что: необходимо проводить мероприятия по устранению причин, препятствующих эффективной антибиотикотерапии - дренирование локального очага инфекции, удаление инородного тела и т.д.. • Принцип оптимальной длительности терапии: заключается в том, что срок лечения антибиотиком, как правило, индивидуален, и зависит от вида возбудителя, но в целом лечение проводится до достижения «клинически явного выздоровления», и еще 3 суток во избежании рецидива инфекции. • Принцип проведения фармакокинетического мониторинга за уровнем концентрации препарата в крови или в очаге микробного воспаления, что позволит проводить коррекцию схем лечения, увеличить эффект и снизить вероятность побочных эффектов. • Принцип обязательного проведения микробиологического контроля – сдача контрольных анализов после лечения.
98. Различают два варианта выдачи иммунного ответа в форме биосинтеза антител: первичный ответ — после первой встречи организма с данным антигеном, и вторичный ответ — при повторном контакте его с одним и тем же антигеном спустя 2—3 недели. Внешне первичный и вторичный иммунный ответ различаются по следующим признакам: продолжительность латентного периода, скорость нарастания титра антител, общее количество синтезируемых антител, последовательность синтеза иммуноглобулинов различных классов. Клеточные механизмы первичного и вторичного иммунного ответа, как будет показано ниже, также отличаются.
Первичный иммунный ответ. 1) Биосинтез антител начинается не сразу после контакта с антигеном, а после некоторого латентного периода, продолжающегося 3—5 дней. В течение этого периода происходит процесс распознавания антигена и формирования клеток, которые способны синтезировать антитела к нему; 2) скорость синтеза антител относительно невелика; 3) титры синтезируемых антител не достигают максимальных значений; 4) первыми синтезируются антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса IgM, затем IgG. Позже всех появляются, да и то не во всех случаях, IgA и IgE.
Вторичный иммунный ответ. 1) Латентный период очень непродолжитель¬ный, в пределах нескольких часов; 2) кривая, характеризующая скорость накопления антител, идет значительно круче вверх, чем при первичном ответе, и имеет логариф-мический характер; 3) титры антител достигают максимальных значений; 4) синте-зируются сразу антитела, относящиеся к классу IgG.
Вторичный иммунный ответ обусловлен формированием клеток иммунной памяти.
Далее иммунный ответ возможен в виде по одного из трех вариантов:
1) клеточный иммунный ответ;
2) гуморальный иммунный ответ;
3) иммунологическая толерантность.
Клеточный иммунный ответ – это функция T-лимфоцитов. Происходит образование эффекторных клеток – T-киллеров, способных уничтожать клетки, имеющие антигенную структуру путем прямой цитотоксичности и путем синтеза лимфокинов, которые участвуют в процессах взаимодействия клеток (макрофагов, T-клеток, B-клеток) при иммунном ответе.
Гуморальный иммунитет – это функция B-клеток. Т-хелперы, получившие антигенную информацию, передают ее В-лимфоцитам. В-лимфоциты формируют клон антителопродуцирующих клеток. При этом происходит преобразование B-клеток в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины (антитела), которые имеют специфическую активность против внедрившегося антигена.
Образующиеся антитела вступают во взаимодействие с антигеном с образованием комплекса АГ – АТ, который запускает в действие неспецифические механизмы защитной реакции. Эти комплексы активируют систему комплемента. Взаимодействие комплекса АГ – АТ с тучными клетками приводит к дегрануляции и выделению медиаторов воспаления – гистамина и серотонина.
При низкой дозе антигена развивается иммунологическая толерантность. При этом антиген распознается, но в результате этого не происходит ни продукции клеток, ни развития гуморального иммунного ответа.
Иммунный ответ характеризуется:
1) специфичностью (реактивность направлена только на определенный агент, который называется антигеном);
2) потенцированием (способностью производить усиленный ответ при постоянном поступлении в организм одного и того же антигена);
3) иммунологической памятью (способностью распознавать и производить усиленный ответ против того же самого антигена при повторном его попадании в организм, даже если первое и последующие попадания происходят через большие промежутки времени).
99. Моноклональные антитела — антитела, синтезируемые и секретируемые одним клоном антителообразующих клеток, т. е. клеток, генетически идентичных, происходящих из одного и того же зрелого В-лимфоцита. Они распознают только один антиген и взаимодействуют только с ним. В связи с этим значительно повышается и специфичность всех иммунологических реакций, протекающих с участием моноклональных антител.
Процесс получения моноклональных антител был изобретѐн Жоржем Кѐлером и Сезаром Мильштейном в 1975 годах.[1] За это изобретение в 1984 году они получили Нобелевскую премию по физиологии. Идея состояла в том, чтобы взять линию миеломных клеток, которые потеряли способность синтезировать свои собственные антитела и слить такую клетку с нормальным B-лимфоцитом, синтезирующим антитела, с тем, чтобы после слияния отобрать образовавшиеся гибридные клетки, синтезирующие нужное антитело. Эта идея была успешно реализована и уже к началу 1980-х годов началось коммерческое получение различных гибридом и очистка антител против заданных антигенов. Однако, так как лимфоциты были мышиные и синтезировали мышиный иммуноглобулин, введение таких моноклональных антител человеку вызывало иммунную реакцию отторжения.
Моноклональные антитела используют для исследования структуры и функций разных частей молекул, а также различных типов клеток, например деталей строения рецепторов Т- и В-лимфоцитов.
100. Поскольку вирусы не растут на искусственных питательных средах, а размножаются только внутриклеточно, нужно было найти простые и общедоступные методы их культивирования.
Для выделения изолированных, но жизнеспособных клеток из разрушенных тканей использовали обработку их слабым раствором трипсина, разрушающего межклеточные мостики. Для культивирования клеток были предложены различные среды, содержащие все необходимые для размножения клеток питательные вещества (аминокислоты, основания, витамины и др.), минеральные соли, имеющие оптимальную рН и т. д. К питательным средам добавляли индикатор, по изменению цвета которого можно было судить о метаболизме клеток и их размножении. Для подавления возможного роста бактерий вируссодержащий материал перед посевом его в культуры клеток обрабатывают антибиотиками.
Основной недостаток первично-трипсинизированных клеток заключается в том, что после нескольких пересевов они перестают размножаться. Поэтому предпочтением стали пользоваться культуры таких клеток, которые способны размножаться in vitro бесконечно долго. Такие перевиваемые культуры клеток получают из опухолевых тканей или из мутантных клеток с полиплоидным набором хромосом. Однако опухолевые клетки нельзя применять для получения вакцин. Для этих целей используют только культуры таких клеток, которые не содержат никаких контаминантных вирусов и не обладают злокачественностью. Лучше всего этим требованиям отвечают культуры диплоидных клеток. «Штаммом диплоидных клеток называется морфологически однородная культура клеток, стабилизированная в процессе культивирования in vitro, имеющая ограниченный срок жизни, характеризующаяся тремя фазами роста (стабилизации, активного роста и старения), сохраняющая в процессе пассирования кариотип, свойственный исходной ткани, свободная от контаминантов и не обладающая онкогенной активностью. Как оказалось, вирусы могут размножаться не только в культурах клеток, образующих монослой на стекле пробирок, но и в суспензиях живых клеток.