Патогенез и симптомы болезни. Хотя эти вопросы у рыб изучены недостаточно, можно предположить, что при интенсивном проникновении церкариев через кожу рыб и внедрении их в толщу мышечной ткани возникают травматические повреждения тканей и соответственно возникают воспалительные процессы. При сильной интенсивности инвазии дегенерация мышечной ткани не может не отразиться на общем состоянии зараженных рыб. Однако симптомы болезни у рыб практически не проявляются.
Патологоанатомические изменения. При вскрытии погибших и убитых рыб, интенсивно зараженных метацеркариями О. felineus, обнаруживают в межмышечной соединительной ткани светло-серые цисты размером (0,23...0,43) х (1,17...1,21) мм. Цисты локализуются в подкожном слое мышц на глубине 2-4 мм, преимущественно на спинной стороне (выше боковой линии). Значительно реже метацеркарии обнаруживаются в плавниках, жабрах, чешуе.
Цисты имеют двойную оболочку -- наружную соединительнотканную, образованную тканями хозяина, и внутреннюю -- тонкую, образованную секретом цитогенных клеток паразита. Внутри цисты находится в согнутом состоянии метацеркарий. Живая личинка периодически совершает маятникообразные или «переливающиеся» движения. Мертвые личинки неподвижны, с нечеткой внутренней структурой, экскреторный пузырь разрушен, депигментирован, целостность оболочек цисты нарушена.
Диагностика. Диагноз на описторхоз у дефинитивных хозяев ставят общепринятыми гельминтологическим и копроскопическим методами: методом флотации с применением насыщенного раствора натрия тиосульфата (1750 г на 1 л кипящей воды) по Щербовичу, нитрата натрия (1 кг на 1 л кипящей воды) по Калантаряну или хлорида цинка (2 кг на 1 л горячей воды) по Котельникову.
Для обнаружения метацеркариев в мышцах рыб используют один из двух методов: компрессионный или переваривания мышц. В обоих случаях удаляют чешую и снимают кожу полностью или частично в дорсальной части тела. Если на коже остаются кусочки подкожных мышц, их снимают скальпелем и используют для исследования.
При применении компрессионного метода делают общий срез мышц толщиной 2--4 мм, который помещают на стекло или компрессорий для трихинеллоскопии полностью или вырезают кусочки небольшого размера. Пробы мышц раздавливают в компрессории, а на стекле размером 8 х 15 см -- вторым предметным стеклом. Микроскопирование проводят при увеличении 16-20 раз под микроскопом (МБС-10 или обычным). При исследовании вяленой, соленой или копченой рыбы рекомендуется вымачивать ее в воде не менее 1 сут. Метод переваривания более трудоемкий, но он дает лучшие результаты по полноте выявления личинок. Для этого мышечную ткань тщательно измельчают ножом или в мясорубке. Затем ее заливают естественным или искусственным желудочным соком (11 мл концентрированной соляной кислоты, 7 г пепсина, 9 г хлорида натрия на 1 л дистиллированной воды) в соотношении 1:10. Пробу помещают в термостат на 3 ч при температуре 37°С, после чего содержимое фильтруют через металлический фильтр с размером ячеек 1 х 1 мм. Через 15-20 мин. верхний слой фильтрата с переваренной мышечной тканью сливают, а осадок переносят в чашку Петри, где метацеркариев подсчитывают. При этом они сохраняют свою структуру и жизнеспособность.
Кроме обнаружения личинок необходимо определять их жизнеспособность, особенно в мороженой рыбе и рыбопродуктах.
При морфологическом исследовании обращают внимание на подвижность личинок в цистах и изменения их структуры. Для активизации движения личинок препараты подогревают до 36°С любым способом. Наличие даже слабых самостоятельных движений свидетельствует о жизнеспособности метацеркариев, в то время как их отсутствие не доказывает гибель личинок. Для провокации двигательной активности личинок применяют химические раздражители, которые наслаивают на выделенных личинок или их цисты. При воздействии 0,5%-ного раствора трипсина, приготовленного на физиологическом растворе, через 10--15 с. начинается выход личинок и их активное движение, которое сохраняется до нескольких часов. Воздействие желчью или дуоденальным соком приводит к эксцистированию примерно 85 % личинок.
Отсутствие в течение 15 мин наблюдения всякой двигательной активности, пожелтение метацеркариев и нарушение их структуры свидетельствуют о нежизнеспособности личинок.
Меры борьбы и профилактика. Лечение рыб при описторхозе не разработано. Поэтому для предупреждения распространения описторхоза и защиты населения от заражения инвазией применяют комплексные профилактические мероприятия (ветеринарно-санитарные и противоэпидемические), которые включают:
- систематический контроль эпизоотической обстановки в неблагополучных водоемах путем проведения паразитологических исследований карповых рыб через каждые 2--3 года;
- проведение ветеринарно-санитарной экспертизы вылавливаемой в них рыбы и приготовленной рыбопродукции;
- обеззараживание пораженной рыбы и рыбопродуктов соответствующими методами;
- недопущение скармливания сырой рыбы плотоядным животным;
- проведение пропаганды правил профилактики описторхоза среди населения, а также среди работников, связанных с добычей и переработкой рыбы.
Для просветительной работы необходимо изготавливать плакаты, листовки, использовать аудио- и видеотехнику и другие способы пропаганды. В них отражать пути распространения и способы заражения людей описторхозом и другими антропозоонозами, виды поражаемых рыб, методы их обеззараживания, а также указывать неблагополучные водоемы и т. п.
Санитарная оценка рыбы. При установлении зараженности личинками описторхиса основных промысловых объектов и наличии в водоеме других потенциальных хозяев этого гельминта вся вылавливаемая из него рыба признается условно годной. В этих случаях реализация необеззараженной рыбы из неблагополучного водоема согласно существующей инструкции запрещается. Ее допускают в пищу при сохранении товарного вида и после обработки, гарантирующей полное обеззараживание от возбудителя болезни (посол, глубокое замораживание или термическую обработку).
Посол рыбы проводят таким способом, чтобы содержание соли в мясе рыбы достигло 14 % (плотность тузлука 1,20 при температуре 1-2°С). При этом продолжительность посола мелкой рыбы (пескарь, уклея, гольян, верховка и др.) составляет 10 сут, средней (плотва, елец, красноперка, жерех, чехонь и др.) -- 21 сут, крупной (язь, лещ, линь и др.) -- 40 сут.
Другим методом обеззараживания рыб от метацеркариев является глубокое замораживание, при котором рыбу выдерживают при температуре минус 40 "С в течение 7 сут, минус 35°С -- 14 сут и минус 32°С -- 32 сут. Если предварительно рыбу замораживают, то можно использовать более слабый или менее длительный посол.
Горячее и холодное копчение, вяление, сушка, а также изготовление консервов, выполняемые в соответствии с технологическими инструкциями, обеззараживают рыбу от личинок описторхисов, за исключением охлажденного язя.
В быту чаще применяют термическую обработку рыбы. С этой целью изделия из частиковых рыб и рыбные котлеты следует жарить в масле в течение 15 мин, крупные куски массой до 100 г -- 20 мин. Мелкую рыбу жарят в течение 15-20 мин. Если процесс обеззараживания включает варку рыбы, то она должна продолжаться не менее 20 мин после закипания воды. Рыбные пельмени варят не менее 5 мин с начала закипания.
Скармливание рыбы пушным зверям и другим плотоядным животным допускается после соответствующего обеззараживания и определения жизнеспособности метацеркариев.
2.6 Меторхоз, псевдамфистомоз, эхинохазмоз, метагонимоз, клонорхоз
Это трематодозы собак, кошек и некоторых пушных зверей, а в отдельных случаях и человека, вызываемые возбудителями из семейств соответственно Opisthorchidae, Echinostoraatidae, Heterophyidae. В личиночной стадии эти гельминты поражают мышцы и различные органы и ткани рыб.
Локализация. Меторхисы и псевдамфистомумы паразитируют в желчных ходах печени (а последний -- и у человека), эхинохазмусы и метагонимусы -- в тонком отделе кишечника плотоядных животных и человека.
Распространение. Все указанные выше возбудители соответствующих заболеваний плотоядных и человека относительно изучены в некоторых районах России: в Смоленской, Воронежской, Ленинградской, Московской, Калининградской областях, в Западной Сибири, на Северном Кавказе, в Казахстане и на Украине.
Возбудители. Возбудитель меторхоза -- Methorchis bilis (ранее albidus), псевдамфистомоза -- Pseudoamphistomum truncatum, эхинохазмоза-- Echinochasmus perfoliatus, метагонимоза -- Metagonimus yokogawai, M. minutus и M. katsuradai, клонорхоза -- Clonorchis sinensis.
Рис. 14 Возбудители меторхоза, псевдамфистомоза, метагонимоза, клонорхоза и эхинохазмоза: А - Methorchis bilis; Б - Pseudoamphistimum truncatum; В - Echinochasmus perfoliatus; Г - Metagonimus yokogawai; Д - Clonorchis sinensis
Меторхисы достигают длины 2,5-3,5 мм, ширины 1,6 мм. Поверхность тела трематоды покрыта мелкими шипиками. Диаметр ротовой присоски 1 0,24-0,32 мм, брюшной 2 -- 0,30 мм.
Два хорошо выраженных ствола кишечника 4 расположены по бокам заднего конца тела. Семенники 9 в задней части тела, расположенные наискосок друг от друга, продолговатой формы, со слабовыраженными лопастями. Матка находится в средней части передней половины тела. Впереди переднего правого семенника расположен яичник 7. Яйца овальные, по форме и строению напоминают яйца описторхисов. Размер яиц (0,027х0,015)мм (см. рис., А).
Псевдамфистомумы достигают длины 1,5-2,5 мм, ширины 0,6-1,0 мм. Диаметр ротовой присоски 0,14-0,18 мм, брюшной -- 0,18-0,21 мм.
Характерным признаком трематоды является тупо срезанный задний конец, который втянут внутрь в виде большой присоски. Два округлой формы семенника 6 расположены в заднем конце тела и как бы охватывают два толстых ствола кишечника, заканчивающихся тупо. Матка 4 занимает среднюю часть тела; на ее уровне по бокам тела вдоль кишечных стволов находятся желточники (см. рис. Б).
Эхинохазмусы -- это вытянутые в длину трематоды длиной 3-4 мм. Поверхность тела покрыта шипами; брюшная присоска крупнее ротовой; их диаметр соответственно 0,25-0,26 и 0,12-0,14 мм. Адоральный диск 3, расположенный между ротовой присоской и глоткой (по бокам тела), вооружен шипами в виде одинарного ряда, идущего в дорсальном направлении от ротовой присоски (всего 24 шипа). Два крупных округлой формы семенника 9 расположены один позади другого, ближе к задней части тела. Хорошо выраженные желточники от уровня брюшной присоски располагаются по бокам тела до заднего его конца. Между округлым яичником и овальным семяприемником, находящимися впереди семенников и брюшной присоски, разбросаны довольно крупные овальные яйца длиной 0,11 мм, шириной 0,05 мм (см. рис. В).
Метагонимусы -- трематоды длиной 1,0-2,5 мм. Это продолговатые трематоды, у которых бока слегка втянуты внутрь (талии). Поверхность гельминта покрыта шипами. Брюшная присоска отсутствует, но на уровне середины тела с правой стороны находится половая присоска. Диаметр ротовой присоски 0,015--0,017 мм. Два круглых семенника 10 расположены в задней части тела наискосок один к другому. Овальный яичник находится впереди семенников. Матка, заполненная яйцами, занимает всю заднюю часть паразита. Желточники 7 в виде глыбок локализованы сбоку в задней части паразита (см. рис. Г).
Биология развития. Меторхисы и псевдамфистомумы развиваются одинаково с участием пресноводных моллюсков -- промежуточных хозяев и рыб семейства карповых (лещ, вобла, язь, чехонь, красноперка, линь, уклейка и др.) -- дополнительных хозяев. Дефинитивные хозяева -- собаки, кошки, пушные звери, уссурийский енот, выдра, норка, хорек, росомаха, а также человек. Метагонимусы и эхинохазмусы развиваются также с участием пресноводных моллюсков (в частности, из рода Yuga -- промежуточных хозяев, но дополнительные хозяева для метагонимусов -- лососевые и карповые, а эхинохазмусов -- карась, щука, линь, судак, карп, сом и др.).
Для метагонимусов окончательные хозяева -- плотоядные и человек, а также рыбоядные птицы.
У всех трематод в первом промежуточном хозяине -- моллюске -- формируются (как у всех трематод) церкарии, которые выходят в воду, внедряются в подкожную клетчатку и мышцы рыб. У метагонимусов и эхинохазмусов личинки поражают жабры, плавники и чешую рыб, у меторхисов -- жабры и мускулатуру рыб. В местах локализации личинок образуются метацеркарии, которые по истечении 35 сут становятся инвазионными. У последней трематоды диаметр метацеркариев равен примерно 0,18-0,21 мм.
Дефинитивные хозяева заражаются при поедании рыб, зараженных метацеркариями, у которых гельминты достигают половой зрелости примерно за 28-35 сут. Продолжительность жизни гельминтов, вероятно, составляет свыше 4-5 лет.
Клонорхисы паразитируют у язя, ельца, плотвы, леща, сазана, густеры, гольяна, карася, толстолобика и других карповых. Цисты паразита локализуются в мышечной ткани и подкожной клетчатке, почковидные, размером 0,15-0,18 х 0,28-0,3 мм, наружная и внутренняя оболочки плотно прилегают друг к другу. Личинки имеют круглые брюшную 4 и ротовую 1 присоски, причем брюшная больше ротовой, размер личинок 0,4 х 0,2 мм (см. рис. Д).
Биология развития и симптомы болезни совпадают с таковыми при описторхозе и вышеописанных трематодозах.
Диагностика этих трематодозов у дефинитивных хозяев проводится, как при описторхозе. Зараженность рыб метацеркариями определяют путем микроскопирования тонких срезов мышц, как при описторхозе. Но метацеркарии метагонимуса определяют иначе. Кусочки плавников, жабр или чешуйки помещают между предметными стеклами. Для улучшения видимости с нижней стороны чешуек удаляют пленку и препараты просветляют 50%-ным раствором глицерина. При микроскопировании личинки овальной или округлой формы внутри цисты находится личинка слегка подковообразной формы.
Санитарная оценка рыбы. Поскольку все вышеописанные трематодозы широко представлены в центральных районах РФ, где имеются все условия для их распространения (обилие водных ресурсов, плотоядных животных, высокая плотность населения, наличие многих видов рыб и промежуточных хозяев -- моллюсков), то всегда следует помнить о существующей опасности заражения рыб личиночными стадиями этих трематод.
Профилактические мероприятия этих гельминтозов должны быть комплексными, направленными на профилактические дегельминтизации плотоядных и строгую диагностику пораженности мускулатуры и других органов рыб личинками трематод.