Материалы и реактивы: крупнодробленый ячменный солод, агар, раствор йода, бульонные мясные кубики, пептон, молоко, хлорид натрия, желчь, глюкоза, кристаллический фиолетовый.
Порядок выполнения работы: 1. Приготовление затора.
Приготовить раствор йода: для этого растворить 1 г йодистого калия в 5 мл воды. К полученному раствору добавить 1 г йода и довести объем смеси дистиллированной водой до 300 мл.
В заторный стакан насыпать одну часть солода, добавить четыре части теплой воды и перемешать. Температура смеси должна быть 50 °С. Поставить стакан на водяную баню при 50 °С и выдерживать в течение 30 мин. Первые 5 мин смесь интенсивно помешивать стеклянной палочкой. Затем подогреть баню, чтобы температура смеси повысилась до 63–65 °С, и выдерживать при этой температуре до прекращения окрашивания раствора с добавлением йодного раствора (йодная проба на содержание крахмала).
2. Приготовление сусла.
Подготовленный затор профильтровать через полотно. Полученный фильтрат нагреть до кипения и кипятить 5–10 мин. Выпавший при кипячении осадок отфильтровать.
Сусло развести водой до плотности 8–10 % по сахарометру, разлить в колбы и простерилизовать в автоклаве при 0,05 МПа в течение 30 мин.
3.Приготовление сусла-агара.
Кготовому суслу добавить 2 % агара и нагреть смесь до расплавления агара. Затем разлить в пробирки и колбы и простерилизовать.
4.Приготовление мясопептонного агара.
20 г бульонных мясных кубиков растворить в 1 л воды, добавить 100 г пептона и 2 % расплавленного агара. Среду кипятить в течение 30 мин. После кипячения смесь профильтровать через марлю и вату и затем простерилизовать в течение 10 мин.
5. Приготовление обезжиренного молока.
Молоко процентрифугировать. Удалить сливки. Затем разлить в пробирки по 5 и 10 мл. И стерилизовать при температуре 121 °С в течение 10 мин в автоклаве или стерилизаторе.
6. Приготовление соленых бульонов.
6
Отмерить 100 мл мясопептонного бульона и добавить к нему 6 или 9,5 % хлорида натрия. Разлить в пробирки по 5 мл, стерилизовать при температуре 121 °С в течение 20 мин.
7. Приготовление молочно-солевого агара.
Мерным цилиндром отмерить 100 мл 2 %-го стерильного агара, содержащего 6,5 % хлорида натрия. Добавить к нему 10 мл обезжиренного стерильного молока.
8. Приготовление мясомолочного агара.
Мерным цилиндром отмерить 100 мл стерильного мясопептонного агара, добавить 10 мл обезжиренного стерильного молока.
9. Приготовление физиологического раствора.
Отмерить 1 л водопроводной воды. Взять навеску массой 8,5 г хлорида натрия и растворить в воде. Раствор объемом 10 мл разлить в чистые пробирки диаметром от 8 до 20 мм или в колбы вместимостью 93 мл. Стерилизовать в течение 20 мин.
После стерилизации в пробирках остается около 9 мл физиологического раствора, а в колбах – около 90 мл, т. е. такое количество, которое необходимо для приготовления разведений из посевного материала.
10. Приготовление среды Кесслера.
Отмерить 1 л водопроводной воды, добавить 10 г пептона и 50 мл желчи. Смесь прокипятить при помешивании в течение 20 – 30 мин на водяной бане. Затем профильтровать через слой ваты. В полученном фильтрате растворить 2,5 г глюкозы и довести объем до 1 л. рН среды довести до значения 7,4–7,6. Добавить 2 мл 1 %-го водного раствора кристаллического фиолетового.
Среду разлить в пробирки с поплавками и стерилизовать при давлении 0,01 МПа в течение 10 мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.
11. Приготовление стерильной воды.
В колбу налить водопроводную воду. Стерилизовать при давлении 0,01 МПа в течение 10 мин.
12. Написать отчет о проделанной работе.
7
РАБОТА 3 ПОЛУЧЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР
Чистая культура – это микроорганизмы одного вида, полученные из одной или нескольких клеток в результате размножения на искусственной питательной среде.
Цель работы. Научиться получать чистую культуру микроорганизмов.
Приборы и посуда: термостат, микроскоп, пробирки, чашки Петри, бактериологическая петля, пипетка.
Материалы и реактивы: агар, исследуемый материал.
Порядок выполнения работы:
1. Получение изолированных колоний.
Небольшое количество исследуемого материала внести бактериологической петлей в пробирку с расплавленным и охлажденным до 43 °С агаром. Тщательно перемешать смесь и вылить в чашку Петри. Чашку Петри поместить в термостат. Через определенное время на поверхности агара развиваются изолированные колонии микроорганизмов.
2. Получение чистой культуры.
Для получения чистой культуры бактериологической петлей берут отдельную колонию микроорганизмов с агара в чашке Петри и, тщательно соблюдая условия стерильности, переносят в пробирку со стерильной водой. Взболтать и затем стерильной пипеткой взять несколько капель суспензии и перенести их на новую чашку Петри со стерильным агаром.
На этой стадии необходимо тщательно соблюдать условия стерильности, поскольку при попадании посторонних видов микроорганизмов чистой культуры не получится. Капли распределяют по всей чашке с помощью бактериологической петли. Чашку Петри помещают в термостат на 16–20 ч. На агаре развивается чистая культура микроорганизмов.
3. Написать отчет о проделанной работе.
8
РАБОТА 4 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО КОЛИЧЕСТВА
МИКРООРГАНИЗМОВ В МУКЕ
Содержание микроорганизмов в муке зависит от их исходного количества в зерновой массе, способов очистки зерна, выхода и сорта муки. Муку хранят в мешках, в бункерах в сухих, хорошо вентилируемых помещениях при температуре не более 15 °С и относительной влажности воздуха не более 75 %. При длительном хранении муки в нормальных условиях происходит постоянное снижение количества микроорганизмов.
Каждую партию муки, поступившую на предприятие, исследуют органолептически. Если в муке имеется посторонний запах плесени, прогорклый или кислый вкус, то производят посев разведений муки для определения общего количества микроорганизмов.
Цель работы: приобрести навыки в определении общего количества микроорганизмов в муке.
Приборы и посуда: термостат, микроскоп, пробирки, чашки Петри, бактериологическая петля, пипетка.
Материалы и реактивы: агар, мука. Порядок выполнения работы:
1.Из партии муки отбирают среднюю пробу. Из средней пробы отвешивают навеску 10 г и смешивают с 90 мл стерильной воды. Суспензию тщательно встряхивают вручную в течение 5 мин. Из полученного разведения муки готовят следующие десятикратные разведения.
Разведение муки 1:100 используют для определения мицелиальных грибов, разведение 1:104 – для определения бактерий. Из каждого разведения параллельно засевают не менее двух чашек Петри.
2.Высев производят поверхностным способом. Вначале стерильные чашки Петри заливают расплавленным питательным агаром
идают ему застыть. Далее на поверхность остывшего агара наносят 0,2 или 0,5 мл необходимого разведения и равномерно распределяют шпателем Дригальского это количество по всей поверхности. Для учета мицелиальных грибов используют сусловый агар или среду Сабуро.
3.Написать отчет о проделанной работе.
9
РАБОТА 5 ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ ЗАРАЖЕННОСТИ
МУКИ СПОРЫНЬЕЙ
Микроорганизмы зерна подразделяются на сапрофитные, фитопатогенные и патогенные. Содержание микроорганизмов в зерне достигает 2∙107 КОЕ/г. Микроорганизмы попадают на поверхность растений, а затем и на зерно из почвы. Они также заносятся ветром, осадками, птицами и насекомыми.
К фитопатогенной группе относятся паразитические виды грибов, живущие за счет растения-хозяина. В период роста и созревания они вызывают заболевания – микозы. Заболевание выражается в появлении пятнистости и почернения колосковых чешуек, стержня колоса
иверхней части стебля. Среди грибных заболеваний наиболее распространенными являются: спорынья, твердая головня, фузариоз и др.
Спорынья (Claviceps purpurea) – представитель класса высших грибов аскомицетов. Гриб поражает в основном рожь, реже пшеницу
иячмень в период цветения. Спорынья снижает урожай зерна. Примесь рожков спорыньи в зерне не должна превышать 0,05 %.
Употребление в пищу хлеба из муки, содержащей рожки спорыньи, вызывает слабость, головокружение, судороги, отравление (под названием «эрготизм»).
Цель работы: приобрести навыки в определении общего количества спорыньи в муке.
Приборы и посуда: термостат, микроскоп, пробирки, чашки
Петри, бактериологическая петля, пипетка.
Материалы и реактивы: мука, серный эфир, 1 %-й раствор Н2SO4, 0,1 %-й раствор Na2CO3.
Порядок выполнения работы:
1.К 10 г муки добавляют 20 мл серного эфира и 1 мл 1 %-й серной кислоты. Колбу осторожно взбалтывают и оставляют на 6–12 ч. Когда пройдет время, содержимое колбы перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 2 мл 0,1 %-го рас-
твора Na2CO3 и дают отстояться. Если мука содержит спорынью, раствор соды приобретает фиолетовую окраску, которая начинает проявляться при содержании спорыньи от 0,05 %.
2.Написать отчет о проделанной работе.
10