Материал: Барам_Курс лекций ВЭЖХ для ВСЕХ [2007]
ВЭЖХ - 2006 |
КОСВЕННОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ |
||||
|
ПРЕДКОЛОНОЧНАЯ ДЕРИВАТИЗАЦИЯ |
||||
|
O N |
F |
+ H N CH COOH |
O2N |
NH CH COOH |
|
2 |
|
2 |
|
R |
|
|
|
R |
|
|
|
NO2 |
Фотометрия |
|
NO2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
N C S + H2N CH COOH |
N C NH CH COOH |
|||
|
|
|
R |
|
R |
|
O2N |
F |
+ H2N CH COOH |
O2N |
NH CH COOH |
|
|
|
|
R |
|
|
N O N |
|
R |
N O N |
|
|
|
|
|||
|
N(CH ) |
|
Флуориметрия N(CH ) |
|
|
|
3 |
|
|
3 |
|
|
|
|
+ H2N CH COOH |
|
|
|
|
|
R |
|
|
|
O S O |
|
O S NH CH COOH |
||
|
Cl |
|
|
O |
R |
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
|
|
|
|
КОСВЕННОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ |
||||
|
ПОСТКОЛОНОЧНАЯ ДЕРИВАТИЗАЦИЯ |
||||
Фотометрия
O |
O |
O |
OH |
H2N CH COOH |
N |
+ |
R |
|
OH |
H |
|
|
|
|
O |
O |
O |
Флуориметрия
COH |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
COH |
+ |
H2N |
|
CH |
|
COOH |
|
|
N |
|
|
CH |
|
COOH |
|
|
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
R |
|
|
|
|
R |
||||||||
+ |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
SCH2CH2OH |
|||||||||||||
HSCH2CH2OH |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
70
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
|
|
|
КОСВЕННОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ |
|||
|
Фотометрирование |
|
||
А |
|
|
1 |
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
|
|
3 |
|
А |
1 |
2 |
В |
|
|
|
|
Объем |
|
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
|
|
|
КОСВЕННОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ |
|||
|
Фотометрирование |
|
||
|
C l- |
|
|
|
|
|
|
0.02 A 240 |
|
|
N O 2- |
|
|
|
|
H C O 3- |
|
|
|
|
B r- |
N O 3- |
SO 42- |
|
|
|
|
|
|
H PO 4-
0 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
Время, мин
ХРОМАТОГРАФ: "Милихром А-02"
КОЛОНКА: 2x75 мм с Nucleosil 100-5 C18 (модифицирована бромидом триметилоктадециламмония)
ЭЛЮЕНТ: H2O - CH3CN - 16 мМ фталат натрия, pH 8.9 (80:10:10)
СКОРОСТЬ ПОТОКА: 0.1 мл/мин ТЕМПЕРАТУРА: 35°С
ОБРАЗЕЦ: 10 мкл натриевых солей (по 10 мг/мл каждой в воде)
G.I.Baram, A.L.Vereshchagin, L.P.Golobokova. Zhurnal Analiticheskoy Khimii, 54, No.9 (1999) 962-965
71
Лекция 6
ВЭЖХ и скрининговые задачи. Базы данных "ВЭЖХ-УФ"
Г.И.Барам Курс лекций "ВЭЖХ для ВСЕХ"
Новосибирск, 2007
72
ВЭЖХ - 2006
ФОТОМЕТРИЯ
l
Лампа |
|
|
|
|
|
|
Фотоприемник |
Закон |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Ламберта-Бургера-Бера |
|
|
I0 |
|
|
|
I |
|
|
|
|
|
|
I = I0 10 |
−ελ C l |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
Ячейка с раствором вещества |
|
||||||||||||||
|
с концентрацией C |
|
|
|
|
|
|||||||||
Пропускание света |
|
|
|
Поглощение света |
|||||||||||
(100 0%) |
|
|
|
(0 ∞) |
|
||||||||||
T = |
|
I |
100% |
Aλ |
= −logT = ελ C l |
||||||||||
|
|
||||||||||||||
|
|
I0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Поглощение раствора вещества при длине волны λ прямо пропорционально концентрации вещества
ВЭЖХ - 2006 |
ФОТОМЕТРИЯ |
|
|
||
|
|
Линейность |
Аλ |
|
|
|
A>1-1.5 |
|
0 |
|
C>10-100 мг/л |
|
C |
|
|
Заслонка |
Заслонка |
|
|
|
Измерение темнового тока |
Измерение рассеяного света |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Измерение флуоресценции |
|
|
Измерение поглощения элюента |
|
|
|
|||||||||||
73
ВЭЖХ - 2006
УФ-СПЕКТРОСКОПИЯ
Влияние растворителя
Аотн 1.0 |
CH3CN |
|
|
||
0.8 |
CH3CN:H2O (1:1) |
|
H2O |
||
|
||
0.6 |
|
0.4
0.2
0
220 240 260 280 300 320 нм
Cпектры растворов нитробензола, нормированные относительно спектра водного раствора
ВЭЖХ - 2006
УФ-СПЕКТРОСКОПИЯ |
||||||
|
Влияние растворителя |
|
||||
1.0 |
|
|
рН 2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0.8 |
|
|
|
|
|
|
отн 0.6 |
|
|
|
|
рН 5 |
|
А |
|
|
|
|
|
|
0.4 |
|
|
|
|
|
|
0.2 |
Изобестические |
|
|
|
||
0 |
|
точки |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
220 |
240 |
260 |
280 |
300 |
320 нм |
Спектры растворов 4-нитробензойной кислоты
(рКа 4-нитробензойной кислоты 3.4)
74