Материал: Барам_Курс лекций ВЭЖХ для ВСЕХ [2007]
ВЭЖХ-2006
СКРИНИНГМЕТОДОМ ВЭЖХ•МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ
K.Zahlsen, T.Aamo, J.Zweigenbaum - University Hospital of Trondheim, Norway
August, 2004
Судебно-медицинская экспертиза, наркологическийконтроль, лекарственныймониторинг
анализов |
800 000 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 000 000 |
|
|
|
|
|
|
|
|
сделанных |
600 000 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Количество |
400 000 |
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
200 000 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1996 |
1997 |
1998 |
1999 |
2000 |
2001 |
2002 |
2003 |
2004 |
ВЭЖХ-2006
СКРИНИНГМЕТОДОМ ВЭЖХ•МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ
2003 г. в Лабораториибыло проанализировано:
-800 000 образцов мочи
-30 000 образцовсыворотки крови Оборудование:
-12 LC/MS c ESI (5 амфетаминов и 4 опиата)
-12 LC/MS с APCI (6 бензодиазепинов)
-6 GC/MS (арбитраж)
Agilent 1100 LC-MS
105
ВЭЖХ-2006
СКРИНИНГМЕТОДОМ
ВЭЖХ•УФ-СПЕКТРОСКОПИЯ
Baker J.K., Skelton R.E., Ma C-Y. Identification of Drugs by HPLC with Dual Wavelength Ultraviolet Detection. J.Chromatogr., 1979, v.168, 417.
Jinno K., Hayashida M., Watanabe T. Computer-Assisted Liquid Chromatography for Automated Qualitative and Quantitative Analysis of Toxic Drugs. J.Chromatogr.Sciences, 1990, v. 28, 367.
Bogusz M., Wu M. Standartized HPLC/DAD System, Based on Retention Indices and Library, Applicable for Systematic Toxicological Screening. J.Analyt. Toxicology, 1991, v.15, 188.
Зенкевич И.Г. Формирование базы данных по индексам удерживания лекарственных веществ в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Ж.прикладной химии, 1994, т.67, №11, 1877.
Koves E.M. Use of HPLC-DAD in Forensic Toxicology. J.Chromatogr. A, 1995, v.692, 103. Maier R.D., Bogusz M. Identification Power of Standardized HPLC-DAD System for Systematic Toxicological Analysis. J.Analyt. Toxicology, 1995, v.19, 79.
Gaillard Y., Pepin G. Use of HPLC with Photodiodearray UV Detection for the Creation of a 600 Compound Library. Application to Forensic Toxicology. J.Chromatogr. A, 1997, v.763, 149-163. Elliot S.P., Hale K.A. Applications of an HPLC-DAD Drug-Screening System Based on Retention Indeces and UV Spectra. J.Analyt. Toxicology, 1998, v.22, 279.
Lambert W.E., Van Bocxlaer J.F., De Leenheer A.P. Potential of HPLC-DAD in Forensic Toxicology. J.Chromatogr. B, 1997, v.689, 45.
Herzler M., Herre S., Pragst F. Selectivity of Substance Identification by HPLC–DAD in Toxicological Analysis using a UV Spectra Library of 2682 Compounds. J.Analyt. Toxicology, 2003, v.27, 233-242.
ВЭЖХ-2006 |
|
|
|
||
|
|
МНОГОКАНАЛЬНОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ |
|||
|
|
ВХРОМАТОГРАФИИ |
|
||
|
|
Необходимое условие: |
|
||
|
|
сигнал канала детектора пропорционален |
|||
|
|
концентрации вещества (AN=aN·C) |
|
||
|
|
0 |
|
Для гомогенного пика |
|
|
|
AN = aN = |
SN = R = const |
||
Сигнал детектора |
|
|
|||
Концентрация |
1 |
A0 |
a0 |
S0 |
|
2 |
|
|
|
||
3 |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
4 |
|
|
|
|
|
Объем (время) |
|
|
|
|
|
|
106 |
|
|
ВЭЖХ-2006 |
|
||
|
МНОГОКАНАЛЬНОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ |
||
|
ВХРОМАТОГРАФИИ |
||
|
Параметры идентификации хроматографического пика: |
||
|
|
TR(VR) и R1, R2, ... RN-1 |
|
|
0 |
Количество веществ, разрешаемых |
|
детектора |
|
||
1 |
колонкой, равно ее пиковой |
||
емкости (Z) |
|||
2 |
|
||
Сигнал |
Сколько веществ можно разрешить |
||
|
|||
|
при N-канальном детектировании? |
||
3 |
|
||
|
|
||
|
4 |
|
|
|
TR (VR) |
Объем (время) |
|
ВЭЖХ-2006 |
|
||
|
МНОГОКАНАЛЬНОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ |
||
|
Фотометрическая детекция при 8 λ |
||
|
1.00 |
|
|
|
|
274 |
0.75 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
/А |
|
|
|
|
|
λ |
0.50 |
|
|
|
|
R=А |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0.25 |
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
|
210 |
230 |
250 |
270 |
290 |
|
|
Длина волны, нм |
|||
107
ВЭЖХ-2006
МНОГОКАНАЛЬНОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ
Ограничение: интервал значений R=(0±1)
Погрешность R: |
0.1 |
0.05 |
0.02 |
|
N |
AN/A0 |
Количество разрешенных веществ (D) |
||
2 |
1 |
101 |
2·101 |
5·101 |
3 |
2 |
102 |
4·102 |
2.5·103 |
4 |
3 |
103 |
8·103 |
1.3·105 |
5 |
4 |
104 |
1.6·105 |
6.3·106 |
6 |
5 |
105 |
3.2·104 |
3.1·108 |
7 |
6 |
106 |
6.4·107 |
1.6·1010 |
8 |
7 |
107 |
1.3·109 |
7.8·1011 |
ВЭЖХ-2006
МНОГОКАНАЛЬНОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ
ВХРОМАТОГРАФИИ
Емкость базы данных (Q)- максимальное количество веществ, имеющих отличающиеся наборы идентификационныхпараметров
Q=Z·D
Если Z=100 и D=109, то Q=1011
108
ВЭЖХ-2006
МНОГОКАНАЛЬНОЕДЕТЕКТИРОВАНИЕ
Фотометрическая детекция при 8 λ
Хроматограф "Милихром А-02"
ЗАО "ЭкоНова" (Новосибирск)
ВЭЖХ-2006
ВАЛИДАЦИЯХРОМАТОГРАФА
Оптическая плотность, е.о.п.
15 |
Бромид-ион Уридин |
10 |
5
0
0
Кофеин |
м-Нитроанилин |
о-Нитроанилин |
8 |
16 |
24 |
32 |
40 |
Время, мин
A300
A280
A260
A250
A240
A230
A220
A210
Колонка: 2х75 мм; ProntoSIL-120-5-C18 |
Скорость потока: 100 мкл/мин |
ЭлюентА: 0.2 M LiClO4-0.005 M HClO4 |
Температура: 40°С |
Элюент Б: Ацетонитрил |
λ1-λ8: 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280, 300 нм |
Градиент: 40 мин от 5-100% Б; 10 мин 100% Б Проба: 4 мкл
109