Материал: Preparaty_-_proizvodnye_tsiklopentanpergidrofenantrena__1

НД на субстанцию метандриола. Это связано с тем, что из-за отсутствия в молекуле метандриола хромофорной системы, возникающей вследствие сопряжения карбонильной группы при С3 и двойных связей кольца А, для него неприменимы унифицированные методики спектрофотометрии в УФ- и видимой областях спектра.

5.2.4.Хроматографические методы

Внормативной документации на субстанции и лекарственные формы стероидных гормонов, разработанной за последнее десятилетие, внедряются методики количественного определения с использованием ВЭЖХ. Этот метод введен в ФС 42-3464-97 «Таблетки метиландростендиола по 0,01 и 0,025 г» для определения примесей посторонних стероидов, однородности дозирования и количественного определения. Метандриол не имеет выраженного максимума поглощения в УФ-спектре, поэтому спектрофотометрическое определение для него невозможно, ранее в ГФ X использовался метод гравиметрии. Расчет количественного содержания проводится путем сравнения площадей пиков стандартного и анализируемого образца метиландростендиола.

Предложены методики количественного определения глюкокортикоидов в мазях (гидрокортизон и его ацетат, преднизолон, флюоцинолона ацетонид) методом ВЭЖХ в обращено-фазном режиме на колонках с сепа-

роном С18. В качестве элюента используется этанол. В сравнении с фармакопейными методами – спектрофотометрии в УФ- и видимой области спектра – относительная ошибка данного метода не превышает ± 4 %.

5.2.5. Полярография

Этот метод довольно распространен в фармацевтическом и биофармацевтическом анализе стероидных гормонов. Из всех функциональных групп стероидов только кетогруппа способна восстанавливаться на капельном ртутном электроде, поэтому основной класс стероидов, определяемый данным методом, это α,β-ненасыщенные кетостероиды – андрогены, анаболики, гестагены и кортикостероиды. Из-за разности потенциалов полуволн 4-3-кето- и 1,4-3-кетостероидов можно проводить их раздельное определение в одной пробе.

Полярографическое восстановление α,β-ненасыщенных 3-кетонов протекает с участием одного электрона и приводит к образованию пинакона:

51

Полярографическое определение 3-кетостероидов проводят в растворе хлорида или гидроксида лития при различных величинах pH, а также в водно-спиртовых растворах на фоне буферного раствора Бриттона – Робинсона.

Для определения отдельных 4-3-кетостероидов (метилтестостерон, прогестерон) используется реакция с 3,5-динитробензоилхлоридом, а также процесс конденсации с раствором диметилглицилгидразида (реактив Жирара) с образованием полярографически активных диметилглицилгидразонов, которые в водно-спиртовых растворах на фоне буферного раствора Бриттона – Робинсона дают четкие полярографические волны.

17-кетостероиды (эстрон, андростерон и др.) не восстанавливаются на ртутном капельном электроде, но их гидразоновые производные обладают этой способностью, что делает возможным полярографическое определение этих соединений в биологических пробах и в культуральной жидкости при постадийном контроле получения эстрогенов, андрогенов и анаболиков.

Описан полярографический метод количественного определения гидрокортизона в мазях, содержащих тетрациклин и полимиксин. Метод основан на экстрагировании мази петролейным эфиром и 0,1 М раствором НСl с последующим полярографированием полученного экстракта гидрокортизона в смеси диметилформамида и (C2H5)4NBr с добавлением буферного раствора Бриттона – Робинсона до pH = 9,5.

Во ВНИИХФИ с помощью полярографического метода контролируют микробиологические реакции получения в полузаводских условиях преднизона из кортизона, преднизолона из гидрокортизона и дианобола из метилтестостерона, а также оптимальные условия экстракции получаемых стероидов из культуральных жидкостей.

Достоинства полярографического определения стероидных гормонов заключаются в следующем:

–высокая чувствительность метода (5–40 мкг/мл), что позволяет анализировать низкодозированные препараты с высокой степенью точности;

–при анализе лекарственных форм (мази, кремы, таблетки) не нужно отделять основу или экстрагировать препарат;

–в минимальных затратах труда.

52

5.2.6.Гравиметрия

Всвязи с трудоемкостью гравиметрического анализа и необходимостью использовать большую массу пробы данный метод редко используется

вколичественном анализе стероидов. ГФ X рекомендовала использовать гравиметрию для определения количественного содержания прогестерона в субстанции и сложных эфиров тестостерона в лекарственных формах.

Воснове определения прогестерона лежит реакция с 2,4-динитро- фенил гидразином в кислой среде, приводящая к образованию 3,20-биди- нитрофенилгидразона, малорастворимого в смеси этанола с водой.

Для надежного определения эфиров тестостерона (главным образом в масляных растворах для инъекций) служит реакция образования семикарбазона по 3-кетогруппе.

6.ОСОБЕННОСТИ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

Как правило, стероидные гормоны применяют в виде масляных растворов, суспензий или эмульсий для инъекций, таблеток, капсул, мазей и кремов. Основная сложность при проведении контроля качества этих лекарственных форм заключается в предварительной подготовке пробы.

Первым этапом пробоподготовки служит экстракция стероидных гормонов, которые являются, как правило, неполярными веществами. Экстракция гормонов из таблеток не вызывает затруднений, для этого используют метанол, этанол или водно-хлороформные смеси. Из водных суспензий гормоны извлекают хлороформом или дихлорэтаном, из масляных растворов гормоны отделяют с помощью этанола или метанола, для эстрогенов пользуются водными или спиртовыми растворами едкого натра.

При извлечении кортикостероидов из мазей и кремов применяют менее трудоемкую процедуру распределения лекарственной формы между полярным и умеренно полярным органическим растворителем. В первый растворитель переходит наполнитель, а во второй – лекарственное вещество. Чаще всего для экстракции глюкокортикоидов из мазей используют хлороформ, смесь гексан – ацетонитрил. Ацетонитрильную фазу можно непосредственно вводить в жидкостной хроматограф или анализировать спектральными или электрохимическими методами.

На втором этапе проводят идентификацию и количественное определение действующего вещества лекарственной формы. В последнем случае пользуются наиболее чувствительными и точными физикохимическими методами – спектрофотометрией в УФ- и видимой областях, а также ВЭЖХ на нормальных и обращенных фазах. Особые требования к точности и избирательности метода предъявляются при анализе низкодозированных комбинированных таблетированных форм – эстроген – гестаген, андроген – гестаген и др.

53

7. ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

Выберите правильный вариант ответа.

1.Гидрокортизона ацетат является производным

1)эстрана;

2)прегнана;

3)андростана;

4)холестана.

2.Этистерон (прегнин) является производным

1)эстрана;

2)прегнана;

3)андростана;

4)холестана.

3.Химическое название лекарственного вещества

1)17α-гидроксиандростен-1,4-диол-3β, 11α;

2)прегнен-4-диол-17α, 21-дион-3,20;

3)прегнадиен-1,4-диол-17α, 21-дион-3,20;

4)прегнадиен-1,4-триол-17α, 11β, 21-дион-3,20;

5)прегнадиен-1,4-диол-17α, 21-трион-3,11,20.

4.К производным андростана относится:

54

5.Сочленение колец стеранового цикла стероидных гормонов:

1)АВ-транс, ВС-цис, СД-транс;

2)АВ-цис, ВС-транс, СД-транс;

3)все – цис;

4)все – транс.

6.5α-стероиды обладают специфической гормональной активностью:

1)верно;

2)неверно.

7.Циклогексановый скелет АВС природных стероидов имеет конформацию:

1)ванны;

2)кресла;

3)полукресла;

4)конверта.

8.Введение этинильной группы в 17α-положение тестостерона:

1)усиливает андрогенную активность;

2)приводит к появлению антиандрогенной активности;

3)приводит к появлению гестагенной активности;

4)усиливает анаболическую активность;

5)приводит к появлению пролонгированного эффекта действия.

9.Образование ацетонидов глюкокортикоидов:

1)повышает глюкокортикоидную активность;

2)снижает резорбтивное действие при местном применении;

3)приводит к получению водорастворимого соединения;

55