Материал: Возбудитель Холеры
11
Д.К. Заболотный (рисунок 13) внес значительный вклад в изучение эпидемиологии холеры.
Рисунок 13 - Даниил Кириллович Заболотный (1866-1929 гг.)
С 1961 по 1996 г. холерой в 146 странах переболело 3943239 человек. Стойкие эндемичные очаги холеры сформировались в Юго-Восточной Азии и африканских странах. Так, в 2003 г. крупные вспышки холеры были отмечены в Либерии (33604 больных), Конго (22768 больных), Мозамбике (13758 больных), Сомали (4877 больных). В 2010 г. крупная вспышка холеры отмечена на Гаити. По данным ВОЗ, в последние годы в мире ежегодно регистрируется от 3 до 5 млн. случаев заболевания холерой, в том числе 100-130 тысяч летальных случаев. Высокая заболеваемость и смертность отмечаются в основном в развивающихся странах. Возникновение холеры в России связано с реальной возможностью ее завоза из других стран, неблагополучных по этой инфекции. Так, в период 20052010 гг. в России было зарегистрировано 8 случаев завоза холеры из Индии и Таджикистана.
Классификация возбудителя
Вид V. cholerae относится к роду Vibrio семейству Vibrionaceae отделу Cracilicutes. Род Vibrio насчитывает 55 видов, из которых наибольшее значение для человека имеют V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. alginalyticus, V. vulnificus и V. fluvialis. Эти виды вибрионов вызывают у человека различные по клиническим признакам заболевания (холеру, гастроэнтериты, отиты, раневую инфекцию, менингит). В таблице 2 представлены виды рода Vibrio, имеющие медицинское значение.
Таблица 2 - Виды рода Vibrio, имеющие медицинское значение
Вид |
Источник инфекции |
Клинические проявления |
V. cholerae |
Больной человек и |
Холера |
|
бактерионоситель |
|
12
V. parahaemolyticus |
Морская вода, морские |
Гастроэнтерит, раневая |
|
продукты |
инфекция, бактериемия |
V. vulnificus |
Морская вода, морские |
Бактериемия, целлюлиты, |
|
продукты |
кардиоваскулиты, уретриты |
V. alginalyticus |
Морская вода |
Раневая инфекция, отиты |
V. hollisae |
Морская вода, морские |
Гастроэнтерит, раневые |
|
продукты |
инфекции, бактериемия |
V. fluvialis |
Морская вода |
Гастроэнтерит, раневые |
|
|
инфекции, бактериемия |
V. damsela |
Морская вода |
Раневые инфекции |
V. furnissii |
Неизвестен |
Гастроэнтерит |
V. metschnikovii |
Пресная и солоноватая вода, |
Бактериемия, раневые |
|
морские продукты |
инфекции |
V. circinnatiensis |
Неизвестен |
Бактериемия, менингит, |
|
|
энцефалит |
V. mimicus |
Морская вода, морские |
Гастроэнтерит, диарея |
|
продукты |
|
Вид V. cholerae включает 206 серогрупп, которые различаются по структуре соматического О-антигена. Их разделяют на агглютинирующиеся типовой холерной О1-сывороткой (V. cholerae O1) и на неагглютинирующиеся типовой холерной О1сывороткой (V. cholerae non O1). Вибрионы, неагглютинирующиеся О1-сывороткой, называются неагглютинирующимися (НАГ) вибрионами.
“Классическая” холера вызывается холерным вибрионом серогруппы О1 (V. cholerae O1). К этой серогруппе относятся 2 биовара: классический (V. cholerae
биовар cholerae или V. cholerae биовар asiaticae) и Эль-Тор (V. cholerae биовар eltor). Биовары V. cholerae cholerae и V. cholerae eltor включают по 3 биотипа: Инаба
(Inaba), Огава (Ogawa) и Гикосима (Hikojima). Кроме представителей серогруппы О1 холеру вызывает вибрион серогруппы О139 (V. cholerae bengal).
Вибрионы, относящиеся к другим серологическим группам (О2-О138, О140О206), могут вызывать у людей спорадические или групповые случаи диарейных заболеваний, не склонных к эпидемическому распространению.
Морфологические и тинкториальные свойства
V. cholerae представляет собой изогнутые короткие подвижные палочки. Размеры клеток холерного вибриона составляют 1,5-4,0х0,2-0,6 мкм. Для холерных вибрионов характерен полиморфизм – в клиническом материале обнаруживаются типичные изогнутые формы, а в препаратах с питательных сред преобладают прямые палочковидные формы (рисунок 14).
13
Рисунок 14 – Холерный вибрион под электронным микроскопом.
Холерный вибрион является монотрихом, так как имеет один длинный жгутик, расположенный на конце клетки. Жгутик в 2-3 раза длиннее тела клетки (рисунок 15).
Рисунок 15 – Жгутик у холерного вибриона, электронная микрофотография.
Жгутик снабжён чехликом и продольным выростом, напоминающим ундулирующую мембрану. Жгутики хорошо выявляются при окраске препаратов по методу Лейфсона (рисунок 16).
Рисунок 16 – Жгутики V. cholerae. Окраска по методу Лейфсона.
Подвижность холерных вибрионов является одним из диагностических признаков возбудителя.
Пили (фимбрии) представляют собой тонкие гибкие нитевидные образования на поверхности бактериальной клетки (рисунок 17).
14
Рисунок 17 – Пили на поверхности клеток холерного вибриона, компьютерное изображение.
Пили являются рецепторами для фага СТХφ. Они необходимы для колонизации микроворсинок тонкого кишечника и принимают участие в образовании биопленки на поверхности тела гидробионтов.
Клетки холерного вибриона хорошо окрашиваются основными анилиновыми красителями, грамотрицательные (рисунок 18).
Рисунок 18 – Холерный вибрион, окраска по Граму.
Широко используется окраска препаратов разведенным карболовым фуксином Циля. При этом вибрионы приобретают интенсивный розовый цвет (рисунок 19).
Рисунок 19 – Холерный вибрион, окраска карболовым фуксином Циля.
15
Холерный вибрион не образует спор. Клетки V. cholerae серогруппы О1 не образуют капсулы, а клетки V. cholerae серогруппы О139 имеют полисахаридную капсулу.
Культуральные свойства
Холерные вибрионы являются факультативными анаэробами, но предпочитают аэробные условия выращивания. Оптимальная температура культивирования составляет 37°С. Холерные вибрионы относятся к группе щелочелюбивых микроорганизмов. Они хорошо растут на простых питательных средах с высоким значением рН (7,6-8,2). Это свойство используется при подборе питательных сред для выращивания холерного микроба. Элективными питательными средами для культивирования холерного вибриона являются щелочной МПА, ТСВS-агар (питательный агар с тиосульфатом натрия, цитратом, бромтимоловым синим и сахарозой), среда СЭДХ (сухая элективнодифференциальная среда для выделения холерного вибриона) или СЭДХ-М (модернизированная среда СЭДХ), среда Монсура (таурохолат-теллуритовый агар с желатином). Состав питательных сред, применяемых для выращивания холерного вибриона, представлен в приложении №1.
Чаще всего используют щелочной МПА, на котором холерный вибрион образует круглые гладкие стекловидно-прозрачные с голубоватым оттенком и слабой опалесценцией колонии S-формы вязкой консистенции (рисунок 20). Размер колоний на щелочном агаре культивирования не превышает 1 мм в диаметре, а через 18-24
Рисунок 20 – Рост холерного вибриона на щелочном МПА.
На TCBS-агаре возбудитель холеры образует плоские полупрозрачные желтые колонии размером 2-3 мм в диаметре на сине-зеленом фоне среды (рисунок
21).