Образовавшийся двунитевой стартовый участок воспроизводится с помощью фермента Taq-полимеразы, входящей в набор для ПЦР. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат матрицей для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации и т.д. Это и ест цепная реакция.
В течение нескольких часов происходит 30-40 циклов амплификации и синтезируется кол-во ДНК, достаточное для визуального учета.
Преимущества:
- Высокая специфичность и чувствительность. Позволяет обнаруживать в исследуемом материале единичные клетки возбудителя.
2. Серодиагностика
Серодиагностика - это метод диагностики, целью которого является обнаружение в сыворотке обследуемого антител и нарастания их титра (количества).
Для его реализации используют различные реакции иммунитета - как простые (агглютинация и ее разновидности), так и сложные (РСК, ИФА и др.).
Этот тип реакций можно представить в виде следующего равенства - АГ+хАТ=результат.
Нарастание титра антител, т.е. их инфекционная природа, устанавливается при исследовании парных сывороток. Так называют сыворотки, взятые от одного больного в разные сроки болезни с интервалом 5-7 дней.
При исследовании сыворотки любого человека в ней можно обнаружить антитела различного происхождения - инфекционные, постинфекционные, нормальные, поствакцинальные. Концентрации трех последних различны, но на протяжении достаточно длительных промежутков времени титр их находится на одном и том же уровне или постепенно снижается.
При инфекционных заболеваниях в связи с размножением возбудителей нарастает антигенное раздражение. В ответ на это в сыворотке возрастает количество инфекционных, связанных с заболеванием, антител. Таким образом, титр инфекционных антител нарастает в динамике заболевания, при этом абсолютно не важно, в каком количестве обнаруживаются специфические антитела при первом исследовании.
Серологический метод диагностики применяют с конца первой, начала второй недели заболевания.
Для осуществления серологических реакций, т.е. взаимодействия антител с антигеном, при серодиагностике для обнаружения искомого антитела к сыворотке прибавляют известный антиген - или микроорганизмы, вызвавшие их образование, или их компоненты, обладающие иммуногенностью. В качестве известного антигена для серодиагностики используются разнообразные антигенные диагностикумы. Они могут быть обычными диагностикумами, представляющими собой взвесь убитых микроорганизмов или их отдельных антигенов, или эритроцитарными диагностикумами - взвесью эритроцитов, на которых адсорбированы микроорганизмы или их антигены.
Также для диагностики можно использовать реакции иммунитета с меченными компонентами.
3. Аллергическая диагностика
При многих инфекционных заболеваниях развивается состояние повышенной чувствительности к повторному введению возбудителя или продуктов его жизнедеятельности - инфекционная аллергия (характерно для туберкулеза, туляремии, сифилиса, сапа, сибирской язвы, токсоплазмоза, паротита, простого герпеса и др).
Для выявления инфекционной аллергии применяют аллергические диагностические пробы - строго внутрикожно вводят соответствующий аллерген.
Аллергические диагностические пробы:
Туберкулез - реакция Манту
Бруцеллез - проба Бюрне
Туляремия - проба с тулярином
Сибирская язва - проба с антраксином
Мягкий шанкр - реакция Дюкрея
Проказа - реакция Мицуды
Положительная кожная аллергическая проба - индивидуум в прошлом имел контакт с микробным агентом. Однако проба может быть положительной не только у инфицированных, но и у привитых против этих болезней, а также у лиц, переболевших много лет назад, в том числе и у носителей.
Иными словами, положительный тест у здоровых лиц указывает только на контакт с микробным АГ.
При определении природы заболевания истинное диагностическое значение имеет только переход от отрицательной кожной пробы к положительной, что наблюдается в течение болезни. Кроме того, витраж реакции - увеличение выраженности ее проявления при повторном исследовании - также служит основанием для более детального обследования на инфицированность данным возбудителем.
61. Острые кишечные заболевания. Характеристика острых кишечных инфекций, пищевых токсикоинфекций, пищевых токсикозов, антибиотикоассоциированных диарей
Острые кишечные инфекции
Представители, вызывающие ОКИ включают большую группу условно - патогенных, патогенных и сапрофитных микроорганизмов, которые объединены рядом свойств и в первую очередь - средой обитания для большинства из них является кишечник человека и животных. ОКИ широко распространены в мире - это группа этиологически полиморфных заболеваний, возбудители их принадлежат к различным группам микроорганизмов.
Возбудители:
· Эукариоты (грибы и простейшие): кандидозы, лямблиозы, амебиаз.
· Прокариоты (бактерии): сем. Enterobacteriaceae, Vibrionaceae, Spirilaceae (род кампилобактер), Bacillaceae (род бациллюс, клостридиум), Staphylococcus (St. aureus).
· Вирусы (внеклеточные формы): энтеровирусы (сем. пикорновирида в том числе вирус гепатита А и гепатита В), вирус Норволка, серовары аденовирусов, коронавирусов.
Эндокластридиозы
Clostridium difficile является ведущим возбудителем нозокомиальных кишечных инфекций - энтеритов, колитов, псевдомембранозных колитов (ПМК), возникновение которых связано с неадекватным приемом антибиотиков. По клинической симптоматике выделяют следующие формы энтероклостридиозов диффициле:
1. Энтеродиффицилезная диарея (ЭДД).
2. Энтеродиффицилезный колит (ЭДК).
3. Псевдомембранозный колит (ПМК).
Пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы
Пищевые отравления
Пищевые отравления бактериальной природы относят к кишечным инфекциям, распространяющимся алиментарным путем, и по патогенетическому принципу подразделяют на пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы (интоксикации), что является достаточно условным.
Пищевые токсикоинфекции обусловлены одновременным попаданием в организм человека и микроорганизмов-возбудителей, и их токсинов, накопившихся в пищевом продукте, поскольку особенностью возбудителей является способность продуцировать экзотоксины и эндотоксины (в результате разрушения микробных клеток) не только в организме человека, но и в пищевых продуктах.
Клинически они характеризуются симптомами гастроэнтерита с достаточно длительным (8-12 часов) инкубационным периодом (необходим для вторичного развития бактерий в желудочно-кишечном тракте) и нарушением водносолевого обмена (выраженный диарейный синдром).
Возбудители пищевых токсикоинфекций:
· Сальмонеллы (Salmonella)
· Довольно встречаются условно-патогенные микроорганизмы - другие энтеробактерии (рода Escherichia, Proteus, Citrobacter,Enterobacter, Klebsiella),а также представители родов Bacillus, Clostridium, Aeromonas. Необходимо иметь в виду, что при выделении в качестве этиологического фактора ПТИ условно-патогенных возбудителей проведение количественного анализа является обязательным
Пищевые токсикозы вызываются экзотоксином микроорганизмов, который образовался и накопился при размножении возбудителя в пищевых продуктах, при этом самих бактерий в них может уже и не быть.
Клинически они характеризуются более коротким (3-4-часа) инкубационным периодом и более выраженным болевым синдромом (боли имеют спастический характер), диарейный синдром менее выражен.
Возбудители пищевых токсикозов:
· S.aureus, продуцирующие экзотоксин - энтеротоксин
· C.botulinum, хотя вызываемое им заболевание описывается как самостоятельная нозологическая форма - ботулизм, относящийся к сапронозным (зоонозным) инфекциям
С клиникой ОКИ протекает дисбактериоз кишечника. При подозрении на это явление необходимо проводить дифференциальную диагностику. Если подтверждается дисбактериоз, то нельзя лечить антибиотиками: они усугубляют его течение. А ОКИ необходимо. Все кишечные инфекции, вызванные бактериями или вирусами, или простейшими характеризуются:
- фекально-оральным или контагиозным путем распространения.
- первичной локализацией возбудителя в кишечнике.
- все кишечные инфекции имеют сходные клинические формы (гастроэнтероколит), но специфика их проявления напрямую связана со свойствами возбудителя.
62. Общая характеристика энтеробактерий. Эшерихиозы, иерсиниозы. Микробиологическая характеристика
Семейство Enterobacteriaceae
В составе семейства насчитывают более 30 родов и более 100 видов.
Основные свойства этого семейства:
1. Единство морфологии - это короткие, не образующие спор палочки с закругленными концами, подвижные или неподвижные не образующие или образующие капсулы, Гр(-).
2. Ферментирующие глюкозу с образованием КГ или только кислоты.
3. Как правило, у них отсутствуют или слабо выражены протеолитические свойства.
4. Факультативные анаэробы или аэробы.
5. Оксидазоотрицательные.
6. Каталазоположительные.
7. Хорошо растут на обычных питательных средах, образуя однотипные колонии. Для выделения кишечных бактерий из патологического материала или внешней среды простые питательные среды не используются, используются ДДС!
8. Место обитания - кишечный тракт.
9. Путь передачи - фекально-оральный. Иногда воздушно -капельный.
10. Восстанавливают нитраты в нитриты.
11. Хемоорганотрофы.
12. Утилизируют углеводы по ферментативному типу (определяется по ОФ тесту - окисление- ферментация.)
13. Все они генетически связаны друг с другом. О чем свидетельствует молярный индекс % ГЦ (гуанин-цитазиновый индекс - 39 - 51%).
14. Все они легко обмениваются генетической информацией (трансдукция, трансформация, коньюгация, слияние протопластов).
15. Все виды имеют соматический О-АГ. (некоторые имеют жгутиковый антиген (большинство)
- для большинства характерен капсульный АГ( локализован в капсуле снаружи от клеточной стенки).
- есть фимбрии - то есть есть F антиген;
- имеется общий антиген EAC enteric antigens common. Эти антигены используют для идентификации видов.
Идентификацию серологических типов проводят специфической антисывороткой для трех антигенов О, К, Н -EcoliO111, К 55, Н3.
Среди представителей этого семейства есть - сапрофиты, - условно- патогенные (которые входят в состав нормальной микрофлоры толстого кишечника, патогенные). ЗАПОМНИТЕ! - при снижении защитных свойств организма и под влиянием других факторов, они способны вызывать инфекционные болезни.
Среди патогенных бактерий этого семейства выделяют три рода - при попадании возбудителей в организм извне они вызывают инфекционный процесс: шигеллы, сальмонеллы, патогенные серогруппы эшерихий.
Классификация внутри этого семейства основана в первую очередь на биохимических свойствах - это 30 тестов, на основании которых внутри семейства проводят дифференциацию на роды и виды и роды: шигелла, сальмонеллы, клебсиеллы, протей, иерсиния, эшерихия, энтеробактер, эрвиния, гафния, серация, эдвардсиела.
Широко распространена внутривидовая дифференциация - это необходимо для эпидемиологов - можно установить источник распространения и путь распространения:
- ферментовары (биохим. призн.);
- серогруппы и серовары (по АГ);
- фаговары - по чувствительности к типичным фагам;
- колициновары, колициногены.
Патогенность кишечных бактерий
Считают, что она является результатом интегративного воздействия на микро и макро организм.
1. Адгезия - этот этап взаимодействия является обязательным для возникновения любого инфекционного процесса. Он протекает одинаково у всех кишечных бактерий.
Складывается из неспецифической адгезии: бактерии прикрепляются к защитному слою слизи и проходят сквозь него и специфической адгезии - которая обуславливается взаимодействием лиганда бактерий с соответствующими R рецепторами эпителиальных клеток кишечника. Наиболее часто в качестве лигандов - ворсинки или фимбрии. Так как эпителиальные клетки на протяжении кишечника различаются друг от друга, то различные виды бактерий и адсорбируются на определенных клетках - тропность.
2. Колонизация - заселение, эта стадия развита у разных бактерий по-разному.
3. Инвазия - проникновение.
4. Продукция экзо и энтеротоксинов.
ИТОГ - последние три этапа выражены по-разному у разных кишечных бактерий, что и проявляется в патогенезе и клинике.
Род Escherichia
Основной представитель рода ЭШЕРИХИЯ - кишечная палочка.
Был впервые обнаружен в 1885г. Т. Эшерихом, в честь которого этот род бактерий и получил свое название. По биохимическим свойствам делится на 11 видов, из которых наиболее хорошо изучен E. coli.
Морфологические свойства E. coli в основном соответствуют характеристике семейства, однако кишечная палочка капсулу не образует, в большинстве подвижны. Биохимические свойства: большинство штаммов лактозопозитивны, углеводы ферментируют до кислоты и газа.
Антигенное строение. E. coli имеет О-, К- и Н-антигены. По О-антигену E. coli подразделяется на серогруппы (О1, О2 …); их более 160. Если у выделенной культуры определены все антигены, то для культуры определен серовар.
Представители вида E. coli по своим патогенным возможностям подразделяются на условно-патогенные и патогенные (диареегенные). Патогенные E. coli принадлежат только к определенным серогруппам (в настоящее время их 56). Условно-патогенные E. coli входят в состав нормальной микрофлоры организма человека, составляя основную массу аэробной микрофлоры толстого кишечника. Условно-патогенные E. coli как и все энтеробактерии могут вызывать эндогенную коли-инфекцию, которая возникает при снижении иммунологической реактивности.