Протокол № 27 Микробиологическая диагностика сифилиса
Вкачестве материала для исследования от больного с подозрением на сифилис на 4 неделе заболевания взяли отделяемое твердого шанкра и сыворотку крови.
Вотделяемом твердого шанкра проводили обнаружение возбудителя сифилиса Т.рallidum (окраска по Романовскому-Гимзе и темно-полевая микроскопия) и его генома (ПЦР).
Для обнаружения Т.рallidum готовили фиксированный мазок окрашивали по Романовскому-Гимзе и рассматривали его с помощью световой микроскопии. В мазках – бледно-розовые извитые спиралевидные
(8-12 завитков) микроорганизмы. Для темно-полевой микроскопии готовили препарат «раздавленная капля». В мазках – подвижные извитые микроорганизмы на темном фоне.
Для обнаружения генома (ДНК) Т.рallidum ставили ПЦР с использованием праймеров, предназначенных для выявления возбудителя сифилиса. Результат ПЦР положителен.
В сыворотке крови больного определяли антитела к специфическим антигенам Т.рallidum. Для этого ставили непрямой ИФА для обнаружения суммарных специфических антител (IgM +IgG) по схеме 1.
Схема 1.
Схема постановки ИФА
|
1 |
2 |
3 |
А |
К+ |
№1 |
|
В |
К+ |
№1 |
|
С |
К- |
|
|
D |
К- |
|
|
E |
КК |
|
|
F |
КК |
|
|
G |
|
|
|
H |
|
|
|
По завершении постановки ИФА реакцию останавливали с помощью стоп-реагента и производили учет (схема 2).
Схема 2.
|
|
Учет ИФА |
|
|
1 |
2 |
|
А |
Коричневый |
Коричневый |
|
|
(положительно) |
(положительно) |
|
В |
Коричневый |
Коричневый |
|
|
(положительно) |
(положительно) |
|
С |
Прозрачно |
|
|
|
(отрицательно) |
|
|
D |
Прозрачно |
|
|
|
(отрицательно) |
|
|
E |
Прозрачно |
|
|
|
(отрицательно) |
|
|
F |
Прозрачно |
|
|
|
(отрицательно) |
|
|
G |
|
|
|
H |
|
|
|
Результат положителен: в сыворотке крови обнаружены суммарные специфические антитела (IgM +IgG) к Т.рallidum.
С целью установления периода заболевания раздельно ставили непрямой ИФА для обнаружения уровня специфического IgM и специфического IgG по схеме 3.
Схема 3.
Схема постановки ИФА
|
1 |
2 |
3 |
|
4 |
5 |
А |
К+ |
№1 |
|
|
К+ |
№1 |
В |
К+ |
№1 |
|
|
К+ |
№1 |
С |
К- |
|
|
|
К- |
|
D |
К- |
|
|
|
К- |
|
E |
КК |
|
|
|
КК |
|
F |
КК |
|
|
|
КК |
|
G |
|
|
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IgM IgG |
|
|
|
По завершении постановки ИФА реакцию останавливали с помощью стоп-реагента и производили учет (схема 4) с использованием мультискана.
|
|
|
|
|
|
Схема 4. |
|
|
|
|
Учет ИФА |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
2 |
|
3 |
4 |
5 |
|
А |
0,205 |
0,207 |
|
|
0,297 |
0,100 |
|
|
(коричневый) |
(кориневый) |
|
(Коричневый) |
(коричневый) |
|
|
В |
0,295 |
0,220 |
|
|
0,280 |
0,135 |
|
|
(коричневый) |
(коричневый) |
|
(коричневый) |
(коричневый) |
|
|
С |
0,150 |
|
|
|
0,121 |
|
|
|
(бесцветный) |
|
|
|
(бесцветный) |
|
|
D |
0,137 |
|
|
|
0,135 |
|
|
|
(бесцветный) |
|
|
|
(бесцветный) |
|
|
E |
0,101 |
|
|
|
0,102 |
|
|
|
(бесцветный) |
|
|
|
(бесцветный) |
|
|
F |
0,105 |
|
|
|
0,100 |
|
|
|
(бесцветный) |
|
|
|
(бесцветный) |
|
|
G |
|
|
|
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IgM IgG |
|
|
|
|
Обнаружены специфические IgM и IgG к Т.рallidum.
Заключение
На основании полученных результатов подтвержден диагноз «сифилис» у обследованного больного.
Протокол № 28
Санитарно-микробиологическая оценка стерильности перевязочного материала
1 этап исследования
В предбокснике биксы с ватными тампонами, простерилизованными паровым методом, протирали снаружи стерильной салфеткой, смоченной 6 % раствором Н2О2 и оставляли на 30 мин, затем перенесли в бокс. С помощью стерильного пинцета полностью погрузили три тампона из партии в три пробирки с тиогликолевой средой и еще три тампона в три пробирки с жидкой средой Сабуро без антибиотиков. Посевы в тиогликолевой среде поместили в термостат при 320С, в среде Сабуро – при 220С; инкубировали 8 суток с ежедневным просмотром.
2 этап исследования
В течение всего срока наблюдения во всех средах не обнаружили видимых признаков роста микроорганизмов, среды остались прозрачными. Из всех пробирок сделали мазки, окрасили по Граму. При просмотре в иммерсионной системе микроскопа в мазках микроорганизмы также не обнаружили.
Заключение: на основании проведенного санитарно-микробиологического исследования выдали ответ «стерильно».
Протокол № 29
Санитарно-бактериологическое исследование предметов окружающей среды в ЛПУ
1 этап исследования
1. Произвели отбор пробы с лабораторного стола в боксе бактериологической лаборатории методом смывов. Для этого тщательно протирали его поверхность площадью 100 см2 увлажненной стерильной марлевой салфеткой размером 5x5см, после чего поместили ее в пробирку 2 мл 0,1% пептонной воды с добавлением 1% тиосульфата натрия (для нейтрализации хлорсодержащих дезинфицирующих растворов).
2.По 0,2 мл смывной жидкости засеяли в следующие питательные среды: для выявления стафилококков — в пробирку с 5 мл 6,5% солевого бульона, условно-патогенных энтеробактерий (УПЭ) - в пробирку с 5 мл среды Кесслера, сальмонелл - в пробирку с 5 мл селенитовой среды; синегнойной палочки - в среду N 8 (5 мл бульона для выделения синегнойной палочки) и на пластинку среды №9 (агар для определения синегнойной палочки по наличию пигмента пиоцианина).
3.Все пробирки поместили в термостат при 370С на сутки.
2 этап исследования
1.Учет роста: в солевом бульоне, среде Кесслера и селенитовой среде рост бактерий отсутствовал; в среде №8 - рост в виде серовато-серебристой пленки, на пластинке среды №9 - колонии с ровными и слегка волнистыми краями, гладкой блестящей поверхностью, с характерным запахом «жасмина» и сине-зеленым пигментом.
2.Из колоний, выросших на среде №9, приготовили мазки по Граму; при микроскопии в них — Грампалочки.
3.Для накопления чистой культуры колонии со среды №9 пересеяли на скошенный МПА и посевы поместили в в термостат при 370С на сутки.
3 этап исследования
1. Учет роста: на скошенном МПА увидели рост бактерий в виде полупрозрачного налета сине-зеленого цвета, сам МПА приобрел такой же оттенок.
2.Для проверки чистоты накопленной культуры сделали мазок по Граму; при микроскопии обнаружили Грампалочки.
3.Для идентификации чистую культуру бактерий по ферментативным свойствам