Материал: Физиология методички

крапля сама втягується в покривне скло і запов-

(16,7 %, що прийнято за 100 % гемоглобіну), лег-

нює камеру. Надлишок розчину крові стікає в

ко обчислити його вміст у досліджуваному роз-

жолобок. Якщо на сітку потрапило повітря або

чині у відносних відсотках. Гемометр Салі — це

на бічних площинах виявився надлишок розчи-

штатив, задня стінка якого зроблена з матового

ну, камеру слід промити дистильованою водою,

скла. У штатив вставлено три пробірки однако-

висушити і заповнити знову. Заповнену камеру

вого діаметра, з яких дві крайні зверху запаяні і

ставлять під мікроскоп і якщо формені елементи

містять розчин солянокислого гематину, середня

розташовані рівномірно (що є показником доб-

— градуйована і відкрита (вона призначена для

рого перемішування крові), розпочинають

досліджуваної крові). У середню пробірку гемо-

підрахунок. Рахувати Ер краще під малим об’-

метра наливають 0,1 Н розчин HCl до нижньої

єктивом (×8), використовуючи при цьому окуляр

циркулярної мітки. Потім з пальця вищеописа-

×15. Підраховують кількість Ер в п’яти великих

ним способом набирають кров у капіляр до

квадратах (розділених на 16 маленьких), розта-

мітки, видаляючи надлишок шляхом накладан-

шованих діагонально від верхнього лівого квад-

ня фільтрувального паперу до кінчика капіляра.

рата вниз направо. Підрахунок ведуть у межах

Видувають кров на дно середньої пробірки так,

маленького квадрата рядами (від верхнього до

щоб верхній шар соляної кислоти залишався не-

нижнього). Щоб уникнути двократного підра-

забарвленим. Не виймаючи піпетки, ополіскують

хунку клітин, що лежать на межі між малими

її соляною кислотою з верхнього шару. Після цьо-

квадратами, застосовують правило Єгорова:

го вміст пробірки перемішують, ударяючи паль-

«До даного квадрата належать Ер, які знахо-

цем по її дну, і залишають стояти 5–10 хв. Цей час

дяться як усередині квадрата, так і на його лівій

необхідний для повного перетворення Hb на со-

і верхній межах; Ер, які знаходяться на правій і

лянокислий гематин. Потім до розчину додають

нижній межах, до даного квадрата не нале-

краплями дистильовану воду до тих пір, поки

жать». Підрахувавши суму Ер в п’яти великих

колір отриманого розчину не стане однаковим із

квадратах (що становить 80 маленьких), знахо-

кольором стандартного (додають воду, розчин

дять середню арифметичну кількість Ер в одному

перемішують скляною паличкою). Цифра, що

маленькому квадраті. Знаючи, що об’єм просто-

стоїть на рівні нижнього меніска отриманого роз-

ру камери над одним маленьким квадратом до-

чину, показує вміст Hb у досліджуваній крові в

рівнює 1/4000 мм3, помножують отримане число

грам-відсотках. Можна обчислити відносний

на 4000. Отримують кількість Ер в 1 мм3 розведе-

вміст Hb у досліджуваній крові, наприклад, та-

ної крові. Помноживши її на величину розведен-

ким чином. Припустимо, в крові 14 г% Hb, тоді

ня (200), отримують кількість Ер в 1 мм3 суціль-

16,7 г% становить 100 %, а 14,0 г% — х. Отже,

ної крові. Таким чином, формула для обчислен-

х = 83,9 %, що є показником відносного вмісту Hb.

ня кількості Ер така: Х = (Е × 4000 × 200) : 80, де

Оформлення результатів та їх оцінка. Отри-

Х — шукане число Ер в 1 мм3 суцільної крові; Е

мані результати заносять до протоколу дослі-

— сума Ер у 80 маленьких квадратах; 80 — кіль-

дження і порівнюють із загальноприйнятими нор-

кість маленьких квадратів, в яких зроблено

мальними значеннями Hb.

підрахунок; 200 — розведення крові. Потім от-

Методика обчислення кольорового

риману кількість Ер записують у перерахунку

на 1 л крові, тобто кількість Ер, знайдених в 1 мм3,

показника крові

множать на 1012.

Для роботи необхідні: отримані раніше показ-

Оформлення результатів та їх оцінка. Запи-

ники рівня Hb і кількості Ер зразка аналізу крові.

сати, скільки Ер міститься в 1 л досліджуваної

Об’єкт дослідження — людина.

крові. Порівняти отримані результати з нормою.

Проведення роботи. Знаючи кількість Ер і

У дорослих цей показник становить 5,0·1012 у чо-

рівень Hb в 1 мкл зразка крові, обчислюють КП,

ловіків, (3,9–4,5)·1012 у жінок, (4,0–4,5)·1012 у

використовуючи формулу: КП = рівень Hb (г%)·3 :

дітей шкільного віку, (5,5–7,0)·1012 у новонаро-

: перші дві цифри кількості Ер в 1 мкл. Наприклад,

джених у перші дні життя.

якщо рівень Hb 14 г%, Ер — 4 200 000, то КП =

Методика визначення кількості гемоглобіну

= 14·3 : 42 = 1. Якщо рівень Hb розрахований в

за методом Салі

грамах на літр, то в знаменник формули підстав-

Для роботи необхідні: скарифікатори, бавов-

ляють три перші цифри кількості Ер в 1 мкл крові.

няні кульки, спирт, ефір, 4%-й розчин цитрату

Оформлення результатів та їх оцінка. Запи-

сати розрахований кольоровий показник і по-

натрію, гемометр Салі, капіляр (з міткою 20 мм3),

скляна паличка і піпетка.

рівняти його з нормальною величиною; КП ха-

рактеризує міру насичення гемоглобіном еритро-

Об’єкт дослідження — людина.

цитів і в нормі дорівнює 0,86–1,05.

Проведення роботи. Визначення кількості Hb

за методом Салі проводять колориметричним спо-

Методика визначення швидкості осідання

собом, що грунтується на такому принципі:

еритроцитів

якщо досліджуваний розчин шляхом розведення

Для роботи необхідні: скарифікатори, бавов-

довести до забарвлення, однакового зі стандар-

тним розчином, то концентрація розчинених ре-

няні кульки, спирт, 5%-й розчин цитрату натрію,

човин в обох розчинах буде однаковою, а кіль-

капіляр Панченкова, штатив Панченкова, го-

кості речовин співвідноситимуться, як їх об’єми.

динникове скло або пробірка Відаля.

Знаючи кількості речовин у стандартному розчині

Об’єкт дослідження — людина.

Проведення роботи. Капіляром з приладу

чають (у процентній концентрації хлориду на-

Панченкова, заздалегідь промитого 5%-м цитра-

трію) мінімальну стійкість Ер за появою ознак ге-

том натрію (який перешкоджає згортанню крові,

молізу і максимальну — за виникненням повно-

зв’язуючи іони Са2+ — IV плазмовий фактор

го гемолізу. У нормі коливання стійкості Ер ле-

згортання), набирають із флакона розчин лимон-

жать у межах 0,48–0,44 % (мінімум) і 0,34–0,32 %

нокислого натрію до мітки 50 (Р — реактив) і ви-

(максимум).

пускають його на годинникове скло (або на дно

Методика визначення середнього

пробірки Відаля). Першу краплю крові, що висту-

вмісту гемоглобіну в одному еритроциті

пила, знімають бавовняним тампоном, оскільки

Для роботи необхідні: отримані раніше показ-

вона містить випадкові домішки і лімфу. У дру-

гу краплю занурюють кінчик капіляра Панчен-

ники рівня Hb і кількості Ер зразка аналізу крові.

кова і, нахиляючи його, набирають (без бульба-

Об’єкт дослідження — людина.

шок повітря) кров до мітки 0 (К-кров). Отрима-

Проведення роботи. Знаючи кількість Ер в 1 л і

ну кров випускають на годинникове скло (або

рівні Hb в грамах на літр зразка крові, обчислюють

дно пробірки Відаля), де вже знаходиться розчин

середній вміст Hb в Ер (СГЕ), використовуючи фор-

цитрату натрію. Одразу ж вдруге набирають з

мулу: СГЕ = рівень Hb (г/л) : кількість мільйонів Ер

пальця кров до мітки (К) і цю порцію теж випус-

в 1 л. Наприклад, якщо рівень Hb 12 г% (120 г/л), Ер

кають на годинникове скло. Швидко і ретельно

— 4 000 000, то СГЕ = 120 : 4 = 30 пг.

перемішують кров з 5%-м розчином цитрату на-

Оформлення результатів та їх оцінка. Записа-

трію на годинниковому склі (співвідношення

ти розрахований показник середнього вмісту Hb і

Р : К = 50 мкл: 200 мкл = 1 : 4), аби не встигли

виразити його в пікограмах. Порівняти з нормаль-

утворитися згустки. Після цього, нахиляючи ка-

ною величиною. У нормі СГЕ дорівнює 26–36 пг

піляр, набирають у нього суміш до мітки (К) і,

(нормохромні Ер). Зниження або підвищення цьо-

закриваючи пальцем верхній кінець капіляра,

го показника властиве різним типам анемій.

аби кров не витекла, упирають нижній кінець ка-

піляра у гумове кільце штатива Панченкова і

Тестові завдання до самоконтролю

вставляють верхній кінець у гумове кільце звер-

рівня знань

ху. Відмічають час і рівно за годину спостеріга-

1. Негативний заряд Ер зумовлений:

ють, що кров розділилася на верхній прозорий

A. Білками Ер мембран

шар плазми і нижній червоний шар формених

B. Сіаловою кислотою Ер мембран

елементів, переважно еритроцитів. Відзначають

C. Спектрином і анкерином

висоту верхнього прозорого стовпчика плазми в

D. Натрій-калій залежною АТФазою

міліметрах.

E. Карбоангідразою

Оформлення результатів та їх оцінка. Запи-

сати розрахований показник ШОЕ і порівняти

2. Перераховані фактори зумовлюють величи-

його з нормальною величиною. У нормі ШОЕ у

ну ШОЕ, за винятком:

чоловіків — 1–10 мм/год, у жінок 2–15 мм/год, у

новонароджених — 1–2 мм/год, у вагітних —

A. Кількості лейкоцитів

B. Кількості альбуміну

40–50 мм/год.

C. Кількості глобулінів

Методика визначення осмотичної стійкості

D. Кількості фібриногену

еритроцитів

E. Кількості Ер

Для роботи необхідні: штатив з 18 пробірка-

3. Як оцінити зрушення кривої Прайс-Джон-

ми, розчини хлориду натрію з концентрацією 0,9,

са вліво?

0,85, 0,8 % і так далі до 0,1%-го розчину), про-

бірка з дистильованою водою, пробірка з цит-

A. Сфероцитоз

B. Макроцитоз

ратною кров’ю, узятою не пізніше ніж за 3 год до

C. Мікроцитоз

досліду, дві піпетки.

D. Пойкілоцитоз

Об’єкт дослідження — людина.

Е. Анізоцитоз

Проведення роботи. Пробірки послідовно ну-

мерують і ставлять в штатив. Піпеткою налива-

4. Кількість Ер у новонародженого близько:

ють в кожну пробірку по 3 мл розчину Na+, кож-

A. 4,0 Т/л

ного разу з меншою концентрацією, а в остан-

B. 5,0 Т/л

ню — 3 мл дистильованої води. Потім другою

C. 3,7 Т/л

піпеткою в кожну пробірку додають по дві краплі

D. 4,5 Т/л

цитратної крові. Через 5 хв перевіряють резуль-

E. 5,9 Т/л

тати — наявність або відсутність гемолізу.

Оформлення результатів та їх оцінка. При

5. Вкажіть стани організму, що характеризу-

повному гемолізі рідина в пробірці прозора і яс-

ються виходом Ер з депо, за винятком таких:

краво забарвлена. При частковому гемолізі роз-

A. Сон

чин забарвлений слабкіше, в нижній частині про-

B. Біль

бірки рідина каламутна. За відсутності гемолізу

C. Фізичне навантаження

рідина забарвлена слабо, каламутна, за винят-

D. Гіпоксія

ком верхнього обідка. На підставі цього визна-

E. Крововтрата

в 1 л крові 6·1012 Ер, то в циркулюючій крові да-

сполуки — MetHb, що призводить до кисневого

ної людини їх 27·1012.

голодування. Допомогти в підтвердженні перед-

3. Ер венозної крові більші, оскільки в процесі

бачуваного діагнозу може спектральний аналіз

газообміну усередині них виявляється відносно

крові. MetHb має додаткову смугу поглинання

більше солей, услід за якими за законами осмосу

в червоній частині спектра.

надходить в клітину вода.

16. Довести, що плями на підлозі залишені

4. 1) В експерименті було відмічено порушен-

кров’ю, допоможе спектроскопія: змивання або

ня транспортної (дихальної) функції крові, а

виявлення кристалів солянокислого геміну в

саме: порушення транспорту кисню до органів і

зскрібку (реакція Тейхмана).

тканин організму. Це було викликано знижен-

17. В обох випадках КП однаковий і відпові-

ням вмісту Hb в Ер крові.

дає нормі. Гематологічні ж показники другого

2) За умов гіпоксії як компенсаторної реакції

зразка свідчать про наявність крововтрати (нор-

у тварини було відмічено збільшення ЧСС і зро-

мохромна анемія).

стання ЧД.

18. Приблизно на 200 мл.

3) Від рівня вмісту Hb в крові залежатиме кис-

19. Близько 1000 мл.

нева ємність крові, також необхідно пам’ятати

20. Гіперхромна анемія, КП більше 1.

про буферну функцію Hb — участь у регуляції рН

21. Венозна кров темніша, оскільки відновле-

крові.

ний Hb має темно-коричневий колір. Артеріаль-

5. Концентрація солей менше 0,9 %, але біль-

на кров яскраво-червона через яскраво-червоний

ше 0,5 %. Наявна сферуляція Ер.

колір HbO2.

6. КП = 140·3 : 550 = 0,76. Показник нижчий

22. Підвищеним виділенням еритропоетину з

за норму, в нормі він дорівнює 0,85–1,05.

гіпоксичної нирки.

7. Підставивши цифри, вказані в завданні, у

23. Вміст Нb в одному Ер — 33,25 мк/мкг.

формулу для визначення КП, дістаємо, що у да-

ному зразку міститься 3,5·1012 /л крові. Недо-

крів’я.

8. Кількість крові у даної людини 4,9 л, Hb в

7.3. ДОСЛІДЖЕННЯ ЗАХИСНИХ

ній — 735 г. Враховуючи, що 1 г Нb може зв’я-

ВЛАСТИВОСТЕЙ КРОВІ. ФУНКЦІЇ

зати 1,34 мл кисню, загальна киснева ємність

ЛЕЙКОЦИТІВ. ПОНЯТТЯ

крові (КЄК) — близько 1000 мл, а киснева

ємність 100 мл крові (питома киснева ємність) до-

ПРО ІМУНІТЕТ І ЙОГО ВИДИ

рівнює 20,4 мл.

9. За даних умов вміст Нb у крові (виходячи

Мотиваційна характеристика теми. Знання

з формули для визначення КП) дорівнює 16,6 г%.

У 4,5 л крові за такої концентрації його містить-

захисних властивостей крові, функцій Л необхід-

ся 750 г.

не для розуміння механізмів імунологічних ре-

10. Збільшення кількості ретикулоцитів у пе-

акцій в умовах довкілля, що змінюються, забез-

риферичній крові є ознакою омолоджування її

печують нормальний рівень метаболічних про-

клітинного складу. Молоді Ер стійкіші до гемо-

цесів у тканинах.

літичних дій. Отже, в даному випадку станеться

Мета заняття. Знати:

зрушення кислотної стійкості управо, а осмотич-

1. Властивості та функції Л.

ної — у бік більш гіпотонічних розчинів.

2. Фізіологічні механізми, які лежать в основі

11. Людина переїхала в гори. Оскільки підйом

методів дослідження кількості і функцій Л.

на кожні 1000 м над рівнем моря викликає

Питання до усного і тестового контролю:

збільшення кількості Ер на 700 000 в 1 мм3, то лю-

1. Лейкоцити, їх види, будова.

дина піднялася на 2,5 км.

2. Функції різних видів Л.

12. Реакція еритрону на гіпоксію в нефректо-

3. Кількість Л у крові, її зміни за умов різних

мованих тварин буде менш вираженою, оскіль-

фізіологічних станів організму.

ки стимулятор еритропоезу — еритропоетин —

4. Лейкоцитоз, види. Відмінності фізіологічно-

виробляється нирками.

го лейкоцитозу від патологічного. Лейкопенія.

13. Можна. Необхідно до проби крові додати

який-небудь відновник. Якщо в досліджуваній

5. Лейкоцитарна формула, її можливі зміни.

6. Лейкопоез, регуляція кількості Л у крові.

крові знаходиться HbO2, то він перейде у віднов-

7. Імунітет, його види і значення.

лену форму Нb і спектр поглинання зміниться —

8. Неспецифічний імунітет, його механізми.

замість двох смуг поглинання в жовто-зеленій

9. Роль тимуса, лімфатичних вузлів і селезін-

частині спектра з’явиться одна широка. Якщо

ки у забезпеченні неспецифічного та специфічно-

спектр не зміниться, це означає, що в крові зна-

го імунітету.

ходиться карбоксигемоглобін, отже, людина от-

Питання до письмової відповіді:

руїлася чадним газом.

14. Можна, але необхідно добре провітрити

1. Намалюйте будову різних видів Л.

приміщення, відкривши всі вікна і двері. Якщо є

2. Опишіть структурні та функціональні від-

можливість — краще винести потерпілого з от-

мінності різних видів Л.

руєного приміщення.

3. Опишіть, що таке лейкоцитоз і лейкопенія.

15. Прийом фенацетину, що є сильним окис-

4. Опишіть відмінності між фізіологічним і па-

ником, може викликати утворення в крові стійкої

тологічним лейкоцитозом.