редким антигенам системы Kell. Ему был присвоен номер K25 (Daniels и со-
авт. [143]).
Lee и соавт. [235] нашли, что антиген VLAN обусловлен мутацией G 863 A, приводящей к аминокислотной заменеArg 248 Gln.
TOU (K26)
Антиген TOU, имеющий частоту встречаемости более 99,99 %, обнаружен и изучен Jonesисоавт.[213].
Первый образец TOU-антител найден в сыворотке крови мужчины 47 лет (коренного американца), обследованного в связи с операцией на бедре. Пациент до обследования трансфузий крови не получал.
Сыворотка анти-TOU реагировала с эритроцитами всех общих фенотипов системы Kell, слабо реагировала с эритроцитами фенотипа McLeod, Kellnull, Kp(a +b −) и K13 −, имеющими подавленную экспрессию антигенов Kell, но не реагировала с эритроцитами гомозигот Kо и нормальными эритроцитами, обработанными дитиотрейтолом, разрушающим антигены Kell.
С помощью метода MAIEA(метод конкурентного связывания антител) авторы установили, что антиген TOU локализован на гликопротеине Kell.
Второй образец TOU-антител (обозначенный сначала анти-IAN) были найден в сыворотке крови женщины (испанки по происхождению), госпитализированной на предмет удаления придатков. Сыворотка IAN не реагировала с эритроцитами TOU, а сыворотка TOU не реагировала с эритроцитами IAN.
Пациентка,какивслучаеупомянутомвыше, неполучалатрансфузий,ноимела 2 беременности. Ее сыворотка реагировала с эритроцитами сына и 3 сибсов.
Несмотря на то что наследование антигенаTOU (IAN) не было прослежено в семьях в виде сцепленного комплекса с антигенами Kell, принадлежность его к этой системе была очевидна, и ему был присвоен номер K26.
Эксперименты с моноцитарным монослоем позволили Jonesисоавт.[213] заключить, что анти-TOU-антитела не имеют клинического значения.
У 3 TOU-отрицательных лиц из 2 семей наблюдали одинаковую транзицию
G 1337Aв экзоне 11, кодирующуюArg 406 Gln (Lee [231]).
RAZ (K27)
В 1994 г. Daniels и соавт. [148] обнаружили еще 1 общий антиген эритроцитов – RAZ,которыйполучилномерK27.Анти-RAZ-антителаприсутствоваливсыворот- ке женщины кенийско-индийского происхождения, родители которой были двоюродным братом и сестрой. Тридцатью годами ранее женщина перенесла операцию на сердце, и в связи с этим ей могли перелить кровь. Срок выживания эритроцитов RAZ +,меченныхCr51,вкровяномруслепациенткибылсущественносокращен:через3часапослеинъекциимеченыхклетокполовинаихразрушилась,ачерезсутки после инъекции они в кровотоке отсутствовали. Для оказания трансфузионной помощиубольнойбыловзятоиприоперацииперелито5дозаутокрови.
361
Других RAZ-отрицательных лиц, кроме указанной женщины – носительницы RAZ-антител, не обнаружено. Таким образом, все люди являются RAZ-положительными.
Несмотря на то что антиген RAZ присутствовал на эритроцитах всех исследованных, ряд признаков позволил авторам причислить его к системе Kell.
1.Антиген RAZ отсутствовал на эритроцитах Ko, а также на эритроцитах, обработанных АЕТ, т. е. нормальных эритроцитах, которые с помощью АЕТ искусственно превращены в Kо.
2.На эритроцитах лиц с фенотипами McLeod и Kellmod, для которых характерна низкая экспрессия антигенов Kell, антиген RAZ выражен так же слабо.
3.Обработка эритроцитов моноклональными антителами против эпитопов Kell блокировала связывание RAZ-антител, равно как обработка эритроцитов RAZ-антителами блокировала связывание моноклональных эпитопспецифических Kell-антител. Указанное обстоятельство свидетельствовало о том, что антиген RAZ располагается на том же гликопротеине, что и Kell-антигены.
Lee и соавт. [235] показали, что описанная Daniels и соавт. RAZотрицательная женщина была гомозиготна по замещению G 865 A, которое кодировало замену Glu 249 Lys.
Парциальные K-антигены и парциальные анти-K-антитела
Описано несколько пробандов с парциальной формой антигена K [276, 348]. Приведенные McDowell и соавт. [276] наблюдения убеждает в том, что лица K +, так же как K −, могут вырабатывать анти-K-антитела, реагирующие со всеми образцами эритроцитов K +, за исключением собственных. Другие случаи [348] свидетельствуют о том, что большинство сывороток анти-K содержат парциаль-
ные анти-K-антитела, не реагирующие с некоторыми эпитопами антигена K. Skradski и соавт. [348] описали белого мужчину, эритроциты которого
K +k + реагировали с 8 из 72 использованных анти-K-реагентов. С помощью адсорбции – элюции авторы показали, что эритроциты обследуемого адсорбировали анти-K-антитела, с которыми давали видимую агглютинацию и которые затем обнаруживали в элюате. Анти-K-реагенты, с которыми не было видимой реакции, на эритроцитах не адсорбировались и в элюатах отсутствова-
ли. Антигены k, Kp b, Js b, Ku, K11, K12, K13, K14, K18, K19 и К22 на эритро-
цитах обследуемого были выражены нормально, антигены Kp a, Kp c, Js a, UI a, Wk a и K23 отсутствовали. Три сестры обследуемого имели эритроциты K +, которые также несли на себе вариантную форму K. Парциальный антиген K, обнаруженный в этой семье, был слабее, чем на контрольных эритроцитах K + неродственных доноров.
Из 8 образцов анти-K-антител, которые реагировали с эритроцитами обследуемого, 3 были поликлональные IgG, 4 – моноклональные IgM. Авторы точно не указали, что послужило иммуногенным стимулом для образования реагирующих антител. У 6 лиц они, по-видимому, имели аллоиммунное
362
происхождение, поскольку были выявлены с помощью непрямой пробы Кумбса. У одной женщины титр анти-K-антител значительно повысился при беременности плодом K −.
При исследовании эритроцитов более 50 000 человек одной из 8 реагирующих сывороток не было обнаружено ни одного образца, который подобно эритроцитам пробанда и трех его сестер реагировал с упомянутой сывороткой, но при этом не реагировал с другими сыворотками анти-K.
McDowell и соавт. [276] описали женщину с фенотипом K +k +, у которой имелись антитела, охарактеризованные авторами как K-подобные. Антитела не агглютинировали ни собственные эритроциты, ни эритроциты K +k + ее дочери, но реагировали с эритроцитами K +k + ее сына и мужа. Элюат, снятый с эритроцитов сына после адсорбции ими сыворотки матери, содержал анти-K- антитела, которые по-прежнему не реагировали с эритроцитами самой женщины и эритроцитами дочери. Выраженность антигена K на эритроцитах матери и дочери была существенно слабее, чем сына и мужа. Каких-либо аномалий других антигенов системы Kell на эритроцитах женщины, ее мужа и детей указанные авторы не отметили.
Исходя из представленных данных, можно сделать 2 основных вывода. Во-первых, парциальные антигены K, не выявляющиеся обычными сыво-
ротками анти-K, крайне редки. Напротив, парциальные анти-K-антитела встречаются часто. Исходя из данных Skradski и соавт. [348], 88 % сывороток анти-K (64 из 72) не содержат фракции антител, направленных к определенным эпитопам K-антигена. В то же время практически все поли- и моноклональные анти- K-реагенты содержат антитела к иммуногенному, трансфузионно опасному эпитопу K, который содержится, за редчайшим исключением, во всех эритроцитах K +, и выявляют его даже при слабой экспрессии.
Во-вторых, парциальные антигены K обусловлены редким вариантным аллелем KEL, который, будучи в гомозиготной форме, кодирует продукцию некоторых, но не всех эпитопов нормального антигена K. Парциальные антигены K отличаются от нормального K не только качественно, но и количественно.
И последнее, носителей парциальных K-антигенов следует рассматривать как K-отрицательных реципиентов, но как K-положительных доноров.
Другие варианты K
Некоторые варианты антигена K не являются парциальными, но, несомненно, имеют отношение к этой категории антигенов как переходные формы от K-дефицитных фенотипов, лишенных многих эпитопов Kell, к нормальным Kell-фенотипам и далее к Kell-фенотипам, включающим качественно новые Kell-антигены. Очевидно существуют гены KEL, кодирующие продукцию уменьшенного количества копий нормального антигена K. Они не относятся к вариантным, а скорее к K-дефицитным формам, поскольку антиген K количественно, а не качественно отличается от нормального K.
363
Hawley и соавт. [194] при попытке подобрать совместимую кровь больному, имеющему анти-K-антитела, выявили донора, эритроциты которого не агглютинировались сывороткой пациента, но адсорбировали анти-K-антитела, содержащиеся в его сыворотке. Исследование элюата подтвердило, что антитела имели специфичность анти-K. Эритроциты донора не давали видимой положительной реакции с другими сыворотками анти-K.
Kline и соавт. [226] описали ослабленную экспрессию антигена K, ассоциированную с нормальной экспрессией других антигенов Kell, у представителей 4 поколений одной семьи. Авторы выявили женщину, на эритроцитах которой антиген K был выражен очень слабо. Другие антигены (k, Kp b, Js b и Kx) имели нормальный уровень активности. У матери упомянутой женщины, дочери и внука также обнаруживали слабый K. Эритроциты со слабо экспрессированным антигеном K адсорбировали анти-K-антитела из всех использованных анти-K-сывороток. Адсорбированные антитела присутствавали в элюатах.
Uchikawa и соавт. [374] обследовали 4 человек с фенотипом Kmod, у которых антиген K можно было выявить только с помощью метода адсорбции – элюции антител. Другие часто встречающиеся антигены Kell были слабо выражены, k-антиген отсутствовал. Все 4 были гомозиготны по KEL-мутации, кодирующей Thr 193 Arg. Авторы указывают, что подобно замене Thr 193 Met, характеризующей специфичность K, замена Thr 193 Arg не сопровождалась N-гликозилированием в позиции Asn 191. Ослабление других K-антигенов явилось результатом уменьшения количества Kell-гликопротеина.
Слабую экспрессию антигена K наблюдали Marsh и соавт. [271] у лиц с фенотипом McLeod, а также Muller и соавт. [292] – у лиц, не имеющих антигена Gerbich, Ge: −2, −3.ЭкспрессияантигеновkиKp a улицGe: −2, −3такжебыласнижена.
По оценке Jaber и соавт. [211], эритроциты K +k + Ge: −2, −3 несут почти в 2 раза меньше участков антигена K, чем эритроциты K +k + Ge:2,3.
Имеются сведения о слабых формах антигена k, наблюдаемых у лиц с депрессией других часто встречающихся Kell-антигенов (McLeod, Kmod и др.), а также у лиц с фенотипом K +k + Kp(a +b + ), у которых гены k и Kpa наследуются с Ge: −2, −3 в цис-позиции.
Слабая экспрессия антигена k обусловлена мутацией C 1388 T в экзоне 11 гена KEL, которая кодирует заменуAla 423 Val [231].
Описано транзиторное ослабление антигена K и других Kell-антигенов у некоторых больных (чаще инфекционных), у которых в период ослабления Kellантигенов появлялись свободно циркулирующие и фиксированные на эритроцитах аутоиммунные анти-K-антитела, выявляемые соответственно с помощью непрямой и прямой антиглобулиновой пробы [101, 192, 208, 308, 344, 380, 397] (см. Аутоантитела к Kell-антигенам).
364
Трансформация K − в K +, K + в K −
McGinniss и соавт. [278] описали пациента, эритроциты которого K −k + вследствие сепсиса приобрели K-подобный антиген и стали определяться как K +k +. Перелитые ему эритроциты K − также становились K +. Сепсис был вызван грамположительными бактериями Streptоcoccus faecium. Авторы обнаружили, что эритроциты K −, инкубированные in vitro с лизатом Streptоcoccus faecium, преобразовывались в K +. Трансформация не происходила, если использовали взвесь неповрежденных бактерий.
При аутоиммунной гемолитической анемии, вызванной анти-K-аутоанти- телами, последние блокируют K-антигенные участки на эритроцитах, делая их недоступными для тестовых реактивов. Одновременно с продукцией аутоантител снижается экспрессия антигена K на поверхности клеток. Оба фактора в совокупности приводят к тому, что пациента K + типируют как K −. В период ремиссии, когдааутоантителаисчезаютиэкспрессияантигенаKвосстанавливается,пациен-
та вновь типируют как K + (см. Аутоантитела к антигенам Kell).
Химические свойства
Kell-гликопротеин хотя и является трансмембранной структурой, большая часть его в противоположность антигенам резус представляет внемембранное образование, далеко выступающее над поверхностью эритроцита. Считается, что он состоит из двух протяженных разветвленных цепей, соединенных между собой дисульфидными мостиками. Экстрацеллюлярная часть Kell-протеина ковалентно присоединена к Kx-протеину мембраны эритроцитов также дисульфидной связью [322, 341].
Kell-гликопротеин имеет 15 цистеиновых остатков в экстрацеллюлярном домене (см. рис. 5.1), и дисульфидные связи между цистеиновыми остатками усиливают несущий каркас полипептида. Разрушение дисульфидных связей сульфгидрильными реагентами приводит к инактивации всех 24 Kell- и пара-Kell- антигенов, в частности антигены Kell разрушаются 6 % АЕТ (2-аминоэтилизо- тиоурониумбромидом) при pH 8 [109, 263, 289, 341], 100–2000 мМ ДТТ (дитиотрейтолом) [109]; меркаптоэтанол менее эффективен.
Обработка эритроцитов глицин-HCl-ЭДТА разрушает антигены Kell и Kell-
антитела IgG (см. Judd [216]).
Антигены Js a и Js b инактивируются при существенно более низкой концентрации дитиотрейтола – 2 мМ (Branch и соавт. [109]), поскольку, как полагают Lee и соавт. [240], 2 цистеиновых остатка, разделяемых ДТТ, расположены непосредственно в участке аминокислотных замен, обусловливающих специфич-
ность Js a и Js b (см. рис. 5.1).
Отщепляя гликопротеин Kell от экзофациальной части мембраны эритроцитов, сульфгидрильные реагенты существенно увеличивают выраженность антигена Kx на поверхности эритроцитов, что может быть использовано для моделирования фенотипа Ko.
365