Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии
Рис. 4.11. Наследование регуляторного типа Rhnull по Hrubisko и соавт. [353]. Родители пробанда, повидимому, гетерозиготы – X 1r/X Or. Пробанд Rhnull передал детям нормальные гаплотипы cde и CDe.
Рис. 4.12. Наследование аморфного типа Rhnull (Oestgaard, цит. по [544]). Родители пробандов, по-видимому, гетерозиготы по молчащему гену r=.
других детей имели генотипы cDe / r=, CDe / r= и CDe / cDe. В приведенном примере недостает представителей третьего поколения, фенотипы которых могли бы подтвердить, что от родителей с аморфным типом Rhnul возможно рождение детей с таким же аморфным типом.
Обследование малого числа поколений в семьях не позволяет идентифицировать аморфный тип Rhnull, поскольку трудно получить убедительные доказательства того, что конкретный обследуемый человек генетически r=/r=, а не X Or / XOr. Генотип X 1r / XOr также может приводить к уменьшению экспрессии антигенов Rh. Однако совокупность фактов, полученных при обследовании большого количества семей, позволила исследователям сделать вывод, что наследование Rhnull через молчащий ген r= вполне возможно.
Из 14 обладателей фенотипа Rhnull (см. табл. 4.24) у 9 был обнаружен регуля-
торный тип Rhnull, у 3 – аморфный, у 2 – тип Rhnull не установлен.
Среди упомянутых выше 33 обследованных лиц Rhnull 20 имели регуляторный тип, 3 – аморфный тип, у остальных 10 человек генетическую основу нулевого фенотипа установить не удалось. Последующие многочисленные исследования подтвердили, что оба типа, регуляторный и аморфный, встречаются крайне редко, причем один из них, регуляторный, преобладает [151, 153, 331, 353, 532]. В некоторых случаях семейные исследования не могли выявить генетическую основу фенотипа Rhnull [501, 647].
251
Определенную роль в происхождении Rhnull, как и других фенотипов делеций,играют браки между родственниками, способствующие накоплению гомозигот по депрессивным и молчащим аллелям. Как видно из приведенных выше данных, родители лиц Rhnull более чем в половине случаев являлись кровными родственниками.
Молекулярно-генетические исследования, проведенные Сherif-Zahar и соавт. [210] и Huang и соавт. [357], выявили делецию гена RHD и 2 мутации, обусловливающие Rhnull аморфного типа. Выявлена делеция 2 нуклеотидов в кодонах 322 и 323 экзона 7 гена RHCE с нуклеотидной заменой TCA→ C. Такой ген производит укороченный протеин – 10 трансмембранных доменов из 398 аминокислот вместо 12 доменов из 417 аминокислот. Авторы полагают, что указанные изменения мешают взаимодействию Rh-протеина с Rh-ассоциированным гликопротеином (RhAG), в результате чего полноценный Rh-комплекс на поверхности мембраны эритроцита не образуется.
В одном случае Rhnull Huang и соавт. [358] нашли 2 перемещения G → A в экзоне 6 гена RHAG (ассоциированного гликопротеина), которые приводили к замене Val 270 → Ile и Gly 280 → Arg. Другой случай Rhnull характеризовался трансверсией G → T в экзоне 9, которая вызывала замещение Gly 380 → Val в трансмембранном сегменте 12.
Антитела, образующиеся у лиц Rhnull
Из 22 носителей Rhnull (пробандов и их родственников) 7 (30,2 %) содержали антиэритроцитарные антитела (см. табл. 4.24), что свидетельствует о весьма высокой частоте аллоиммунизации лиц, лишенных антигенов резус. Антитела имели аллоиммунный характер (беременности, трансфузии), за исключением одного случая спонтанных антител у мужчины – донора крови.
У1 пробанда имелись антитела анти-С и анти-е, у 2 антитела были слабыми
ине идентифицировались.
Важная деталь: 4 из 7 сывороток (пробанды 4, 8, 10 и 1 из 2 сестер 9-го) содержали антитела, реагирующие с эритроцитами всех фенотипов Rh, в том числе −D −/ −D − и других Rh-делеций, за исключением эритроцитов Rhnull. Эти антитела, подробно изученные Haber и соавт. [331] и Bar-Shany и соавт. [153], получили название anti-total-Rh, а выявляемый ими широко распространенный антиген был обозначен как Rh total (Rh29).
У родильниц Rhnull отмечены случаи умеренной и тяжелой ГБН, вызванной анти-Rh29-антителами. Тяжелый случай успешно купирован обменными трансфузиями крови cde в течение первых 24 ч после рождения ребенка (Lubenko и соавт. [451]). В одном случае ГБН была связана с анти-Hro-антителами (PerezPerez и соавт. [Am. J. Hematol., 1992, V. 40, P. 306]).
По-видимому, иммунный ответ у лиц Rhnull ограничивается образованием антител к общим антигенам – Rh29 и Hro. Антитела к частным антигенам (С, е и др.) вырабатываются реже.
252
При искусственной иммунизации добровольцев эритроцитами Rhnull антител к веществу Rhnull получить не удалось. Известна лишь одно сообщение, свидетельствующее о возможности существования таких антител. McGinnis и соавт. [471, 472] нашли у 4 больных анемией антитела IgM и IgG, которые они назвали антипрекурсорными. Сыворотки реагировали только с эритроцитами Rhnull. Со стандартными эритроцитами (не Rhnull) агглютинации не наблюдали, однако после обработки стандартных эритроцитов трипсином реакция все же происходила.
Повреждение других антигенов на эритроцитах Rhnull
В табл. 4.25 суммированы имеющиеся в литературе данные относительно изменения статуса некоторых групповых антигенов эритроцитов у людей с фе-
нотипом Rhnull. В основном это касается антигенов S, s, U, LW, Fy и i. Экспрессия антигенов S, s и, особенно, U на эритроцитах Rhnull существен-
но снижена. Как показали Schmidt и соавт. [598], почти половина сывороток
анти-S, анти-s и анти-U не реагировали с эритроцитами Rhnull S, Rhnull s и Rhnull U в антиглобулиновой пробе. В реакции солевой агглютинации эти образцы эри-
троцитов реагировали хорошо.
Таблица 4.25
Изменение экспрессии некоторых антигенов на эритроцитах Rhnull
Фенотип |
|
|
|
Экспрессия антигенов |
|
||||
S |
s |
U |
LW |
Fy5 |
i |
Rh29 total |
D |
||
|
|||||||||
Rhnull |
↓ |
↓ |
↓↓ |
0 |
0 |
↑ |
0 |
0 |
|
Rhmod |
н |
н |
н |
н |
н |
н |
н |
cледы |
|
Примечание. ↓ – экспрессия снижена, ↑ – повышена, н – не изменена.
Race и Sanger [544] пришли к выводу, что связывание антител с указанными антигенами при фенотипе Rhnull слабее, чем в норме. Слабофиксированные антитела легко удаляются с поверхности эритроцитов в процессе их отмывания при постановке антиглобулиновой пробы. Этим и объясняются разные результаты, получаемые в антиглобулиновой пробе и реакции солевой агглютинации.
Антигены LW a, LW b, LW ab и Fy5 в эритроцитах Rhnull отсутствуют, так же как и антигены Rh-Hr. Гены LW и Fy расположены на хромосоме 1 рядом
с локусом RН и, по-видимому, претерпевают те же изменения, что и гены резус. Отсутствие указанных антигенов наблюдали независимо от регуляторного
(XOr / XOr) или аморфного (r=/r=) типа Rhnull.
Schmidt и соавт. [598] отметили повышенную экспрессию антигена i у женщины Rhnull, больной анемией. Sturgeon [638] констатировал некоторое повышение экспрессии антигенов M и N при фенотипе Rhnull.
Race и Sanger [544] исследовали эритроциты 5 лиц Rhnull двумя сериями сывороток анти-En a и установили, что эритроциты Rhnull En(a + ) реагируют значительно
253
сильнее, чем эритроциты En(a + ) обычных людей. Указанные авторы отметили такжеповышениеэкспрессииантигеновKiddиDombrockнаклеткахRhnull.
Природа дефицита некоторых антигенов на эритроцитах Rhnull понемногу проясняется. Установлено (Dahr и соавт. [241]), что эритроциты Rhnull обоих генетических типов содержат 30–40 % гликофорина В (структура, которая несет на себе детерминанты S, s и U), т. е. в 2–3 раза меньше, чем эритроциты U + с нормальным фенотипом Rh. Дефицит антигенов LW на эритроцитах Rhnull обусловлен отсутствием в их мембране соответствующего LW-гликопротеина (Bloy
и соавт. [173]).
Rhmod
В отличие от фенотипа Rhnull, при котором все антигены Rh отсутствуют, фенотип Rhmod (модифицированный) содержит небольшое, иногда исчезающее количество Rh-антигенов. Некоторые образцы эритроцитов, идентифицированные вначале как Rhnull, при более детальном исследовании оказывались Rhmod. Как показали Stevenson и соавт. [629], Rhnull – не всегда нуль.
Фенотип Rhmod появляется в результате воздействия на локус RH регуляторного (супрессорного) гена XQ. Этот ген, как полагают Chown и соавт. [225, 226], является аллелем гена Xor или самостоятельным геном, расположенным в ином, чем Xor, локусе, регулирующем количество Rh-субстанции.
Семейные исследования подтвердили, что лица с фенотипом Rhmod имеют нормальные гены RH [225, 226]. Таким образом, генетическая основа Rhmod всегда регуляторного типа, в отличие от Rhnull, который может быть обусловлен аморфным типом наследования.
Количество антигенов Rh на эритроцитах лиц Rhmod значительно варьирует. В однихслучаяхRh-антигенывыявляютпрямойреакциейагглютинации,вдругих– только с помощью высокочувствительного метода адсорбции – элюции. Mallory и соавт. [Vox. Sang., 1976, V. 30, P. 430] нашли, что исследованные ими образцы эритроцитов Rhmod содержат только 1,2 % ожидаемого количества D-антигена.
СодержаниегликофоринаВнаэритроцитахRhmod уменьшенодо70 %отнормы.
Локализация генов Xor и XQ
При исследовании нескольких семей установлено, что модифицирующие гены Xor и XQ, обусловливающие фенотипы Rhnull и Rhmod, не связаны с локусом RH [225, 226, 244]. Далее была установлена локализация генов Xor и XQ.
Эксперименты Ridgwell и соавт. [565] c гибридизацией соматических клеток показали, что гены RHAG, кодирующие продукцию Rh-ассоциированного гликопротеина, расположены на хромосоме 6 и не связаны с генами RH, которые находятся на хромосоме 1. Однако Rh-полипептиды и Rh-гликопротеины представляют собой Rh-антигенную субстанцию только в совокупности. При отсутствии гликопротеинов, связанных с Rh-полипептидами, антигены Rh не экспрессированы, как, например, при регуляторном (Xor / Xor) типе Rhnull.
254
Генетическая независимость локусов RHAG (Rh50) и RH, а также влияние первого на функцию второго позволили Cherif-Zahar и соавт. [213] высказать предположение: не являются ли гены Xor и XQ мутантными формами гена Rh50, расположенного на хромосоме 6?
|
Примечание. Мутантные формы гена Rh50 обозначены символом Rh с цифрой 50, |
|
|
|
которая показывает мол. массу кодируемого Rh-гликопротеина. В данном случае |
|
|
|
Rh50 не следует отождествлять с Rh50, обозначающим антиген FPTT. |
|
|
|
Указанные авторы [213] обследовали 5 человек Rhnull |
и одного Rhmod. Из |
|
5 |
Rhnull 4 были X or / Xor, 5-й был r=/r=. Rhmod имел тип |
X Q / XQ. У 4 Rhnull |
и |
1 |
Rhmod, имевших регуляторный тип Xor / Xor и XQ / XQ соответственно, обна- |
||
ружены мутантные формы Rh50, включавшие различные нуклеотидные замещения. Только у человека r=/r= (Rhnull аморфного типа) транскрипт гена Rh50 был нормальным. При исследовании кДНК Rh50 в экспериментах с гибридизацией in situ было показано, что ген Rh50 расположен на хромосоме 6
в области р11–р21.1 [213].
Таким образом, имеются все основания полагать, что регуляторные по происхождению фенотипы Rhnull и Rhmod обусловлены мутациями в локусе RHAG (Rh-ассоциированного гликопротеина).
Синдром дефицита Rh-антигенов
В 1967 г. появилось сообщение Schmidt и соавт. [598], а вскоре и других ав-
торов [151, 153, 338, 353, 404, 501, 638] о том, что эритроциты Rhnull имеют не только серологические, но и морфологические, а также функциональные на-
рушения.
Клинические проявления в виде умеренной компенсированной анемии с характерными лабораторными показателями у лиц Rhnull, Rhmod, −D − и других фенотипов делеций получили название синдрома дефицита Rh-антигенов, или
синдрома Rhnull.
При синдроме Rhnull эритроциты не двояковогнуты, как в норме, а имеют чашкообразную форму [638]. При этом наблюдают ретикулоцитоз [371, 492, 599] и повышенный уровень антигена i [599], свойственный эритроцитам новорожденных, что свидетельствует о выбросе в кровяное русло незрелых эритроцитов.
Cиндром дефицита Rh-антигенов сопровождается также снижением концентрации гемоглобина, сывороточного гаптоглобина и гематокрита, увеличением концентрации сывороточного билирубина и фетального гемоглобина.
Осмотическая резистентность эритроцитов в пределах нормы или несколько снижена. Лизис эритроцитов Rhnull in vitro предотвращается добавлением к тест-системе глюкозы. Электрофоретическая подвижность эритроцитов Rhnull не изменена [601].
Степень анемии широко варьирует у разных людей с дефицитом Rh, даже среди сибсов, унаследовавших одни и те же гены [492].
255