Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

Глава 37.

Достижения последних лет

В этой главе приводятся данные литературы последних лет как дополнение к соответствующим главам.

Системы АВО и Hh

Новые сведения, появившиеся в последние годы, касаются в основном молекулярно-генетических особенностей слабовыраженных вариантов антигенов А и В.

У 3 лиц, имевших генотип А3 / А3 В, выявлены три вида единичных замен нуклеотидов 747>T, 820>Aи 863>T. Индивиды Ах и А3В имели одну и ту же мутацию 863>T. Аллель А х на фенотипическом уровне проявлял себя как подгруппа А3В у лица с генотипом А х / В101 и Ах у гетерозиготного индивида, имевшего генотип А х / О01 (Li и соавт. [41]).

Hosseini-Maaf и соавт. [28] нашли 7 не связанных родством лиц со слабовыраженным антигеном В. Молекулярно-генетическое исследование позволило выявить семь новых аллелей гликозилтрансферазного гена В и единичные аминокислотные замены (М 189 V, I 192 T, F 216 I, D 262 С, A 268 T, V 174 0

иL 232 P). Одна из них (F 216 I) явилась результатом гибридизации аллелей В

иO 1v. Авторы пришли к выводу, что молекулярная основа слабых форм антигена В гетерогенна и обусловлена мутациями в последнем экзоне локуса АВО. Кодируемая такими мутантными аллелями В-гликозилтрансфераза обладает низкой активностью.

Врезультате изучения фукозилтрансферазных генов у жителей Штирии (Австрия) идентифицировано 14 новых аллелей FUT1, FUT2 и FUT3. Они кодируют соответственно антиген H, статус выделительства и антигены Lewis. Выявлено 5 новых вариантов аллеля FUT2, 3 из которых характеризуются как ранее неизвестные. Впервые выявленая мутация G 412 A (Gly 138 Ser) локализована в каталитическом домене фермента. Найден новый, несекреторный, аллель, являющийся результатом нонсенс-мутации G 428. Другой аллель FUT2 может являться результатом внутригенного кроссинговера. Анализ гена FUT3 позволил выявить семь ранее неизвестных аллелей, частично обусловленных новыми мутациями G 41 A (Arg 14 His), 1063>G (Arg 354 Ser), G 735 C (молча-

щая). Мутация G 41Aлокализовалась в цитоплазматическом домене, в то время как мутация 1063>G  − в каталитическом (Matzhold и соавт. [47]).

991

Исследован характер изменений экспрессии антигенов АВО и резус при аллогенной трансплантации костного мозга (Л.П. Порешина и соавт. [1]). Показано исчезновение антигенов А, В и D у реципиентов, которым трансплантировали костный мозг доноров O(I)Rh −. Все реципиенты Rh +, имевшие до трансплантации группу кровиA(II), B(III) иAB(IV), после трансплантации стали O(I)Rh −. У реципиентовA(II) после трансплантации костного мозга от донора A(II) отмечалось восстановление ранее ослабленной экспрессии антигена А. Пересадка костного мозга реципиенту O(I) от донора А2В(IV) изменила группу крови реципиента сначала на B(III), а затем на А2В(IV). Таким образом, в процессе приживления костного мозга у реципиентов меняется не только группа крови, но и степень экспрессии групповых антигенов.

Л.Н. Тарасова и С.Г. Владимирова [2] показали, что у лиц, имеющих группу крови O(I), существенно снижен уровень фактора Виллебранда по сравнению с уровнем этого фактора у лиц, имеющих группу кровиA(II), B(III) иAB(IV).

Система MN

Система MN пополнилась еще одним часто встречающимся антигеном – ENDA (MNS44). Антитела IgM, открывающие его, были найдены в сыворотке крови англичанки, имевшей фенотип M +s + Mur + DANE + M(g −). С помощью молекулярно-генетических методов исследования у женщины выявлен новый гибридный гликофориновый аллель GYP(A-B-A), кодирующий антиген DANE. Вторая хромосома несла аллель M k . Авторы пришли к заключению, что аминокислотная замена Ile 46 на гликофорине А наAsn 45 на гликофорине GP.Dane не является обязательным условием для экспрессии антигена DANE (Velliquette и

соавт. [72]).

Системы Р и GLOB

Описано 20 индивидов с редким фенотипом р, у всех найдена нонсенсмутация 2911 > T в гене галактозилтрансферазы – A4GALT. Тем самым установлен еще один вариант генетических нарушений, приводящих к появлению редкого фенотипа р (Hellberg и соавт. [27]).

Система Rh

Новые публикации, касающиеся системы Rh, посвящены двум аспектам. Все больше сведений о новых вариантах гена RHD, обусловливающих фенотипическую мозаику этой системы. К настоящему времени общее число вариантов приближается к 170. Носители парциального или слабовыраженного антигена D подвержены анти-D-аллоиммунизации. В серии других сообщений приводятся случаи необычной сенсибилизации реципиентов к часто встречающимся антигенам Rh.

992

Marechal и соавт. [46] исследовали нуклеотидные последовательности гена RHD, кодирующего вещество D, у 333 французских доноров и выявили 12 новых вариантов аллеля D, при которых определение резус-принадлежности серологическими методами было затруднено. Носители мутации Leu 214 Phe оказались способными продуцировать анти-D-антитела после переливания им D-положительных эритроцитов. Авторы полагают, что молекулярногенетические исследования крови лиц с необычными вариантами антигена D позволят уменьшить риск развития аллоиммунизации при проведении гемотрансфузионной терапии (Marechal и соавт. [46]).

Esteban и соавт. [22] установили, что среди испанцев наиболее частой из парциальных антигенов D является категория D VI. При детальном изучении 20 образов эритроцитов категории D VI обнаружен ранее неописанный гибридный ген RHD-Ce(3-5)-D. Происхождение экзона 2 в этом гене установить не удалось. Гибрид был представлен гаплотипом CDe, продуцирующим редко встречающийся антиген BARC (Rh52).

Flegel и соавт. [25] также нашли новые варианты гена RHD. Антиген, кодируемый аллелем DCS-1, содержал две аминокислотные замены: T 667 G и G 676 C, вызванные мутациями в экзоне 5. Проведено сравнение DCS-1 с вариантами DFV и DCS-2 с соответствующими одиночными аминокислотными заменами: F 223 V и A 226 P. Все указанные варианты сочетались с гаплотипом cDE. Плотность антигенных эпитопов D составила приблизительно 3000 на один эритроцит для категории DCS-1, 800  − для категории DCS-2 и 9300  − для DFV. На эритроцитах DCS-1 и DCS-2 отсутствовали некоторые эпитопы D, выявляемые моноклональными анти-D-антителами. Эритроциты DFV экспрессировали почти нормальный антиген D, в этом образце крови выявлены аллоиммунные антитела anti-LW a системы LW.

Описана 28-летняя женщина из Ливана, группа крови которой при рутинном исследовании определена как A(II)D −. Она имела анти-D-антитела,

ванамнезе – две неразвившиеся беременности из-за внутриутробной гибели плодов. Отец женщины и два ее брата были D −. Солгасно результатам молекулярно-генетического исследования, пациентка и ее упомянутые родственники оказались D +, поскольку содержали значительные фрагменты гена RHD. При последующием анализе с использованием РНК-ПЦР выявлено 5 транскриптов гена RHD, при этом самым длинным оказался транскрипт,

вкотором отсутствовали нуклеотидные последовательности экзона 8, замещенные нуклеотидными цепями из интрона 7. Секвенирование ДНК позволило выявить делецию большого участка величиной 995 пар нуклеотидов, которая затронула часть интрона 7, весь экзон 8, а также интрон 8 гена RHD. Данный аллель RHD (delEx8) кодировал слабый антиген D, выявляемый только адсорбцией – элюцией. Таким образом, пациентка, ее отец и братья имели фенотип Del.

993

Аллель с делецией большого участка гена RHD нашли Richard и соавт. [62]. Lomas-Francis и соавт. [45] описали два случая полиаллоиммунизации у реципиентов негроидов. Негритянка, больная β-талассемией, имела фенотип D +,

всыворотке ее крови ранее были выявлены антитела анти-hr B, анти-E, анти-M, а также тепловые поливалентные аутоантитела. Во время операции ей были перелиты по жизненным показаниям 4 дозы эритроцитов, 2 из которых были серологически несовместимы. Одновременно были предприняты усилия по поиску доноров D +hr B − и  −D −. Когда позднее они были найдены, в пробах с сывороткой крови больной клетки указанных редких фенотипов давали положительные реакции. Дальнейшее детальное изучение специфичности антител показало, что у больной в дополнение к ранее имевшимся образовались анти-D -ан- титела. Другой реципиент, мужчина, больной серповидно-клеточной анемией, был D + и имел антитела анти-hr B, анти-С, анти-Е и анти-K. После трансфузий серологически совместимых эритроцитов в дополнение к перечисленным антителам образовались анти-D-антитела.

Эритроциты обоих лиц содержали парциальный антиген D категории DIIIa, встречающийся среди негроидов с частотой около 4 %. Эритроциты этой категории дают отчетливо выраженные положительные реакции с реагентами анти-D, поэтому таким пациентам переливают Rh-положительные эритроциты, которые им противопоказаны. У негроидов нередко образуются антитела анти-hr B. После их идентификации гемотрансфузионную терапию обычно продолжают с использованием эритроцитов ccDEE, так как эритроциты этой группы являются одновременно е- и hr B-отрицательными. Это приводит к образованию у некоторых больных антител к другому часто встречающемуся антигену – Hr B (Rh34) в сочетании с анти-Е-антителами или без последних. Реципиентам, имеющим такие антитела, можно пере-

ливать эритроциты только от доноров Rhnull и с некоторыми делециями, поскольку только они не содержат антиген Hr B (Rh34). Авторы публикации указывают на высокую частоту парциальных антигенов D среди негроидов,

всвязи с чем у некоторых D-положительных реципиентов могут образоваться антитела анти-D.

Win и соавт. [80] наблюдали 2 женщин с генотипом DIIIce / Cce S (одна латиноамериканского происхождения, другая – негритянка), у которых после

нескольких родов появились антитела анти-hr B (Rh19) и анти-Hr B (Rh34). У одной из женщин выработались также анти-D-антитела в сочетании с анти-Ce. Эритроциты новорожденных давали положительную прямую реакцию Кумбса, однако клинических проявлений гемолитического заболевания у них не отмечалось. Указанные антитела относятся к клинически значимым, поэтому для женщин были зарезервированы эритроциты чрезвычайно редких доноров − ccddEE и Rhnull, однако трансфузии женщинам не понадобились.

994

Опубликованы данные о распределении вариантов гена RHD у жителей Африки. Так, в Конго (Браззавиль) среди 110 лиц, представителей народности теке, эритроциты которых давали отрицательные реакции с анти-D-антителами, 7 были отнесены к слабому DIV-типу по результатам ПЦР. Среди остальных 103 выявлены лица с делецией RHD, наличием RHD-псевдогена и гибридного аллеля RHD-СЕ-D. Среди лиц D + идентифицированы аберратные RHD, DAU, DIV a, слабый DIV3-тип. Идентифицирован новый, характерный для негроидов, вариант RHD, получивший обозначение DAU-7. Среди D − преобладали лица с делецией RHD (Touinssi и соавт. [69]).

Среди жителей Западной Индии парциальные антигены D встречаются с частотой 0,15 %. Из известных категорий в указанной популяции наиболее часто представлен антиген DFR (Kulkarni и соавт. [37]).

Ye и соавт. [84] провели молекулярно-генетический анализ аллеля RHD у китайцев D– (лица Del из выборки исключены). Выявлено 8 вариантов. Один из них проявлялся точковой мутацией, другой представлял собой гибрид RHD / CE. Чаще присутствовал гибридный аллель RHD(1)-CE(2-9)-D(10) и ранее описан-

ный RHD(711delC).

Другая группа китайских исследователей (Yan и соавт. [82]) провели обширные популяционные исследования. Среди 305 672 обследованных 99,94 % были D +, остальные 0,06 % – D −, 37 человек имели варианты антигена D, среди которых преобладал слабый D, встречались также парциальные антигены D VI3 и D V. Выявлено 3 новых аллеля, обусловленных единичными нуклеотидными заменами. Авторы отметили, что у китайцев по сравнению с европейцами и неграми имеются существенные отличия в отношении как частоты антигена D, так и его химической структуры.

Polin и соавт. [59] исследовали с помощью ПЦР кровь 23 300 лиц, которые по результатам первичного обследования были тестированы как резусотрицательные. У 94 обнаружены RHD-специфические маркеры экзонов 4, 7 и 10, свидетельствующие о том, что эти лица в действительности являются резус-положительными. Слабые антигены D (n=55) и фенотип Del (n = 19) идентифицированы в 74 образцах. Такие лица как реципиенты входят в группу повышенного риска аллоиммунизации антигеном D, а как доноры представляют опасность, если их кровь будет перелита резус-отрицательным реципиентам. Авторы предлагают ввести ПЦР-генотипирование в рутинную практику для всех доноров, эритроциты которых в серологических реакциях оказываются D-отрицательными.

Немецкие исследователи (Duscher и соавт. [21]) нашли, что полиморфизм гена RHCE столь же выражен, как и полиморфизм гена RHD. При ДНКгенотипировании 122 доноров с измененной экспрессией антигенов С, с, Е и е выявлено 34 аллеля гена RHCE. Постоянно определялись три аминокислотные замены: Met 167 Lys, Gly 96 Ser и Leu 12 Аrg.

995