Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

Другая группа немецких авторов (Bugert и соавт. [10]) также провели исследования в этом направлении. Генотипирование и секвенирование 10 экзонов гена RHCE у 43 лиц с ослабленной экспрессией антигенов С, с, Е и е позволили выявить 22 аллеля, 10 из которых ранее не были известны. Преобладали одиночные аминокислотные замены, выявлены также гибридные аллели RHCE-D-CE с участием различных сегментов экзона 5 гена RHCE. Установлено, что указанные варианты встречаются в Северной Германии с ча-

стотой 0,012 – 0,2 %.

На молекулярном уровне исследована регуляция функции генов RH (Denomme и соавт. [20]). Так, в проксимальных участках генов RHD и RHCE идентифицированы промоторные 5ʹ-фланкирующие регионы величиной 1246 пар нуклеотидов. Последние регулируют экспрессию пептидов RhD и RhCE в цис-положении. В указанном регионе промоторную функцию выполняют участок величиной 105 пар нуклеотидов и мотив (55 пар), участвующий в транскрипции.

Отмечен полиморфизм локуса RHCE у жителей Карибского бассейна (Noizat-Pirenne и соавт. [50]). Обнаружены парциальные антигены hr′ (с), а также редкий аллель RHCE*ceAR, свойственный негроидам, который кодирует парциальный антиген hrʺ (е). На эритроцитах лиц, гомозиготных по этому редкому аллелю, отсутствует часто встречающийся антиген Hr S (Rh18).

Peyrard и соавт. [54] описали 21-летнюю женщину, больную талассемией, с фенотипом B(III)CcDeekk. В сыворотке ее крови выявлены антитела анти-с, анти-се, анти-Fy b, анти-Jk a и анти-S. Антитела анти-с + се, выделенные путем адсорбции – элюции, реагировали с эритроцитами лиц ceAR / ceEK, ceEK / ceEK

и ceAR / ceBI. С эритроцитами лиц ceAR / ceAR, ceMO / ceMO и ce s(340)/ ce s(340) эти антитела не реагировали. Известно, что эритроциты лиц, имеющих какой-либо из 6 перечисленных генотипов, содержат парциальные антигены hr′ (с). Таким образом, установлено, что редкий аллель RHCE*ceAR наряду с парциальным антигеном hrʺ (е) кодирует парциальный антиген hr′ (с). Авторы высказали предположение, что на эритроцитах лиц, имеющих геноти-

пы ceAR / Ce, ceAR / ceAR, ceMO / ceMO и ce s(340)/ce s(340), отсутствует эпитоп,

свойственный нормальному антигену hr′ (с) и некоторым парциальным антигенам hr′ (с).

Описан 40-летний негроид с серповидно-клеточной анемией, которому многократно производили гемотрансфузии (Pham и соавт. [55, 56]). Больной имел фенотип DСcee, при этом антигены С, с, е и се на его эритроцитах были нормально выражены и выявлялись как с использованием поликлональных, так и моноклональных антител. На основании серологических и генетических исследований установлен генотип больного – (С)ce s / DCe. Сыворотка его крови содержала антитела к антигенам D, c, E, e, V, Js a и S. Фракция со специфичностью анти-с была выделена адсорбцией – элюцией. Антитела

996

реагировали интенсивнее с эритроцитами с +се +, чем с +се–. Отрицательные реакции были получены с эритроцитами лиц, гомозиготных по гену (С)ce s. Таким образом, было показано, что упомянутый аллель (С)ce s, свойственный негроидам, кодирует парциальный антиген hr' (с) и другие слабовыраженные антигены системы резус у негроидов. Авторами выявлены два варианта аллеля (С)ce s, кодирующих слабые варианты антигена hrʺ (е) и других антигенов.

Среди негроидов часто встречался парциальный антиген rh′ (С) (Tournamille и соавт. [70]), кодируемый аллелями (С)ce s и R N. Среди 177 случайно отобранных лиц у 49 выявлены необычные варианты антигена С. Среди больных серповидно-клеточной анемией, имеющих парциальный антиген С, 30 % содержали анти-С-антитела, появившиеся после повторных гемотрансфузий. Авторы указывают на необходимость идентификации парциального антигена С у больных серповидно-клеточной анемией и переливания им С-отрицательных эритроцитов во избежание развития аллоиммунизации к этому антигену.

Получены убедительные доказательства качественных различий антигенов Hr B и hr B (Pham и соавт. [57]). В частности, у Hr B-отрицательных лиц выявлены антитела анти-hr B, а у hr B-отрицательных – анти-Hr B. Среди сенсибилизированных были как гомозиготы, так и гетерозиготы по редкому алле-

лю (С)ce s.

Hue-Roye и соавт. [29] уточнили молекулярную основу антигена Be a (Berrens, Rh36). В середине 1950-х годов этот антиген был включен в систему Rh из-за его связи с ослабленной экспрессией антигенов с, е и f. Молекулярногенетическое обследование 4 Be a-положительных членов одной семьи со слабовыраженным антигеном hr′ (с) выявило мутацию F 668 G в экзоне 5 гена RHCE*ce. Последняя приводила к замене пролина на аргинин в положении 221 протеина Rhce. Авторы высказали предположение, что такая замена оказывает влияние на пространственную структуру и электрическй заряд данного участка протеина Rhce, что ослабляет экспрессию антигенов c, e и f (ce) у

лиц Be(a + ).

Убедительно показана принадлежность антигена Crawford к системе Rh (Flegel и соавт. [24]). Этот антиген обусловлен аллелем ceCF, кодирующим полипептид RHce с аминокислотными заменами Trp 17 Сys, Gln 233 Glu и Leu 245 Val. Авторы считают его одним из вариантов гена ce s, свойственного негроидам. Фенотип ceCF встречается у них с частотой 0,056 % .

Вариант гена ce, кодирующий выработку некоторого количества D-эпитопов, найден Chen и соавт. [11] в Швейцарии у 11 доноров и 1 больного с фенотипом cde. Эритроциты этих лиц, обработанные бромелином, давали положительные реакции с некоторыми моноклональными анти-D-антителами. Фенотип, получивший обозначение ceSL(по аллелю ceSL), встречался с частотой 1 : 675 среди

997

жителей окрестностей г. Берна. У жителей других районов Швейцарии, а также в Южной Германии он не выявлен.

Описан вариант аллеля ce, получивший обозначение ceRA (Noizat-Pirenne

исоавт. [50, 52]). Этот генный комплекс кодирует слабый антиген hrʺ (е), при этом отсутствует ассоциированный с ним антиген hr S (Rh19). При молекулярно-генетических исследованиях выявлены мутации G 50 и G 540 в экзонах 1 и 4 гена RHСЕ. Последние приводят к аминокислотным заменам Trp 16 Cys и Gly 180 Arg во внутримембранном домене RHCE-полипептида

свыраженными изменениями экспрессии антигенов, которые на нем расположены. Антиген hrʺ (е) не выявлялся на эритроцитах пробанда многими образцами анти-е-антител даже при проточной цитофлюориметрии. Авторы полагают, что именно аминокислотная замена Gly 180 Arg обусловливает повышенный риск аллоиммунизации антигеном hrʺ (е). Они рекомендуют учитывать это при подборе эритроцитов реципиентам, особенно негроидам с серповидно-клеточной анемией.

Группой исследователей из Аргентины (Cotorruelo и соавт. [14]) проведены молекулярно-генетические исследования у 148 лиц, унаследовавших гаплотип Dce. С помощью ПЦР исследованы экзоны 1 и 5, а также интрон 2 гена RHCE. Установлено присутствие нуклеотидов С 48 в экзоне 1 и G 733 в экзоне 5 RHCE. Авторы считают важным присутствие определенных нуклеотидов в положении 48 в экзоне 1. Ими идентифицированы варианты алле-

ля RHce в виде гаплотипов Dce (C 48), Dce s (G 48), Dce (G 48) и Dce s (C 48).

Присутствие G в позиции 733 экзона 5 коррелировало с появлением антигена VS (Rh20), свойственного негроидам. Авторы объясняют присутствие аллелей Dcе s (G48) и Dce s (C 48) среди жителей Аргентины метисацией с негроидами.

Продолжены молекулярно-генетические исследования редкого антигена JAL (Rh48), открытого более 30 лет назад. Последний найден как среди европеоидов, так и среди негроидов. Позднее JAL-положительные индивиды обнаружены среди жителей Карибского бассейна. Hustinx и соавт. [31], Westhoff

исоавт. [78] провели молекулярно-генетические исследования крови 17 JAL-положительных лиц. Оказалось, что у европеоидов антиген JAL является продуктом гена Се, тогда как у представителей других рас – продуктом локуса се. У всех обследованных в экзоне 3 имелась мутация 374>T, ведущая к аминокислотной замене Arg 114 Trp в RhCE-полипептиде. У африканцев в гене се обнаружена точковая мутация 735>G, обусловливающая аминокислотную замену Leu 245 Val. Этот аллель оказался сцепленным с нормальным геном RHD и парциальным вариантом RHD*DAU. Авторы высказали предположение, что в результате аминокислотной замены Arg 114 Trp участок полипептидной цепи протеина RHCE утрачивает пространственную жесткость в области аминокислот, определяющих С- и с-специфичность.

998

Изменения затрагивают аминокислоты в позиции 226, определяющей Е- и е-специфичность. В результате изменяется экспрессия антигенов С, с, е,

а также V и VS (Westhoff и соавт. [78]).

Из 17 упомянутых лиц JAL + 3 оказались аллоиммунизированными в результате гемотрансфузий. В сыворотке их крови определялись антитела, напоминающие анти-с + анти-е. Детальное изучение антител позволило установить их специфичность. Они были направлены к новому часто встречающемуся антигену, антитетичному JAL (Daniels и соавт. [19], Lomas-Francis и соавт. [43, 44]). Антиген получил обозначение CEST и был включен в систему Rh как RH57. Таким образом, система Rh пополнилась еще одним антигеном.

Coghlan и соавт. [13] установили молекулярную основу редкого антигена LOCR (Rh55). У 5 неродственных лиц LOCR + выявлена замена нуклеотидов G 286 A в гене RHCE. Интересен тот факт, что возникновение антигена Rh26 также связано с аминокислотной заменой в этой позиции. Возникло предположение, что антигены LOCR и Rh26 могут быть антитетичны. Однако в серологических реакциях лишь некоторые, но далеко не все эритроциты Rh26– имели фенотип LOCR +.

Система Lutheran

Karamatic Crew и соавт. [33] получили новые данные о генетических механизмах возникновения нулевого фенотипа Lutheran. При обследовании 3 лиц Lunull рецессивного типа авторы выявили четыре вида генетических изменений, способствовавших инактивации гена LU. У одного из обследованных выявлены мутация 691>T в экзоне 6 с образованием стоп-кодона (Arg 231 STOP), а также делеция экзонов 3 и 4 гена LU. Двое других лиц оказались гомозиготными по мутациям 711>A в экзоне 6 (Cys 237 STOP) и 364>T в экзоне 3 (Arg 121 STOP). Таким образом, во всех 3 случаях причиной фенотипа Lunull явились точковые мутации с образованием стоп-кодонов.

Появилось сообщение об успешном выявлении антител анти-Lu b с использованием магнитизированных частиц, предварительно сенсибилизированных рекомбинантным протеином Lu b через стрептавидин (Seltsam и соавт. [65]). Антитела обнаружены во всех 13 использованных сыворотках антиLu b. Последние имели при использовании указанного метода с эритроцитами Lu(a −b + ) более высокий титр, чем в стандартных серологических тестах.

Поскольку антитела анти-Lu b не вызывают ГБН и посттрансфузионных реакций, использование столь чувствительного метода скрининга указанных антител не представляется перспективным. Тем не менее упомянутый метод может оказаться полезным при дифференцировке антител в мультиспецифических сыворотках.

999

Используя новейшие фаговые рекомбинантные технологии, группа французских и канадских исследователей впервые получила моноклональные антитела анти-Lu a IgG1 (Richard и соавт. [63]).

Системы Kell и Kx

Yuan и соавт. [86] описали 12-летнего нигерийского мальчика, которому были произведены множественные гемотрансфузии в связи с серповидноклеточной β-талассемией. Больной имел фенотип Js(a +b −) по системе Kell, в сыворотке его крови содержались антитела анти-Js b. Из-за отсутствия донора Js(a +b −) по жизненным показаниям ему было перелито несколько доз серологически несовместимых эритроцитов. После трансфузий гемолиза in vivo не отмечено. Однако последующее изучение приживаемости меченных Cr51 эритроцитов in vivo и тесты с монослоем моноцитов in vitro показали, что антитела способны снижать продолжительность циркуляции перелитых эритроцитов. Авторы считают антитела anti-Js b клинически значимыми

ирекомендуют избегать трансфузий эритроцитов Js(b + ) больным, имеющим anti-Js b-антитела.

Lee-Stroka и соавт. [40] выявили вариант антигена K. У 53-летнего мужчины с фенотипом K + эритроциты реагировали с тремя образцами поликлональных и двумя образцами моноклональных анти-K-антител. В то же время были получены отрицательные реакции с одним образцом поликлональных

идвумя другими образцами моноклональных анти-K-антител. Молекулярногенетическими исследованиями выявлена точковая мутацияA577 T с заменой треонина на серин в положении 193 Kell-гликопротеина. Авторами даны рекомендации подвергать производимые реагенты анти-K тестированию на их способность выявлять описанный выше вариант антигена K.

Аналогичные данные получены другой группой исследователей (Poole и соавт. [60]), которые установили, что мутация 577>T и расположение серина в позиции 193 ведут к появлению необычного антигена K, выявляемого не всеми образцами как поликлональных, так и моноклональных анти-K-антител. Авторы отметили, что и ген K в данном случае не всегда выявляется в стандартной процедуре генотипирования (идентифицируется мутация 578>Tв гене KEL, ведущая к аминокислотной замене Thr 193 Met), что может привести к ошибочным результатам.

Kormoczi и соавт. [35] исследовали молекулярно-генетический механизм

возникновения фенотипов Ko и Kel у жителей Австралии. Произведено генотипирование лиц с фенотипом Kk и KK. В 14 случаях были выявлены расхождения в результатах серологических и молекулярно-генетических исследований. Так, у лиц с фенотипом KK установлен генотип KEL*1 / KEL*2. Выявлено 8 ранее неизвестных молчащих аллелей K o и два – K el. Проведенные исследования позволили уточнить частоту распределения аллелей K и k у австралийцев.

1000