Материал: Барам_Курс лекций ВЭЖХ для ВСЕХ [2007]
ВЭЖХ - 2006
ТЕМПЕРАТУРАВВЭЖХ
Изменение удерживания вещества
Разделение дезоксиолигонуклеотидов
Колонка: 2х250 мм
Сорбент: YMC ODS-AQ (dp=3 мкм) Элюент: 10 мМ ТЭААв 7% CH3CN
80° Скорость потока: 0.3 мл/мин Детектор: λ=260 нм
Образец: сумма pd(A)12-18 и pd(A)25-30
N.M.Djordjevic, F.Houdiere, P.Fowler, F.Natt. Anal. Chem., 1998, 70,1921-1925
60°
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
|
|
|
|
|
|
ТЕМПЕРАТУРАВВЭЖХ |
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|||
|
Изменение удерживания вещества |
|
|
|
|
|
||
|
|
|
Полимеры (1000-9000 D), |
|
|
Т, °С |
||
|
|
|
содержащиеаминогруппы |
|
|
|
120 |
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
90 |
||
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
60 |
||
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
30 |
||
|
|
|
|
|
||||
Колонка: 0.32 мм х 30 см с Hypersil ODS-100 (3 мкм)
Скорость потока: 5 мкл/мин
Элюент: этилацетат-CH3CN-(C2H5)3N-CH3COOH (45:44.9:10:0.1)
T.Andersen, I.L.Skuland, A.Holm, R.Trones, T.Greibrokk. J.Chromatogr. A, 2004, 1029, 49–56
25
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
|
|
ПИКОВАЯЕМКОСТЬКОЛОНКИ |
||||
Изократическое элюирование |
||||
Z = |
N |
|
1 + km′ |
|
|
ln |
|
− 1 |
|
|
4Rs |
|
1 + k1′ |
|
|
|
|
||
N=5000 Rs=1.2 k'1=0 k'm=5.3 |
||||
|
|
|
|
36 |
Объем |
|
|
|
100 |
|
|
|
Градиентное элюирование |
|
|
N=5000 Rs=1.2 VG=4000 мкл 4σ=60 мкл |
|||
|
|
|
|
64 |
|
|
|
|
[Б],% |
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
Объем |
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
|
|
ПИКОВАЯЕМКОСТЬКОЛОНКИ |
||||
Колонка: 0.05х1500 мм с фазой Phenomenex C18 (30 нм, 3 мкм)
Скорость потока: 0.15 мкл/мин Давление: 115 МПа
Образец: триптический гидролизат 20 мкг белка
M.-S. Kim, W.-S. Choie, Y.S. Shin, M.-H. Yu, S-.W. Lee.
Bull. Korean Chem. Soc. 2004, Vol. 25, No. 12, 1833-1839.
26
ВЭЖХ - 2006
КОЛОНКИВВЭЖХ
Относительный объем
0.1 |
4.6х250 мм |
0.5 |
2х250 мм |
Относительнпя |
концентрация |
0 |
|
0 |
|
0 |
17.6 |
0 |
3.3 |
0.3 |
|
4.6х75 мм |
1.0 |
2х75 мм |
|
0 |
|
0 |
|
0 |
5.3 |
0 |
1 |
ВЭЖХ - 2006
КОЛОНКИВВЭЖХ
Колонка, |
N, |
P, |
|
k'=10 |
|
мм |
т.т. |
отн. |
VR, отн. |
TR, отн. |
h, отн. |
250х4.6 |
20000 |
3 |
17.6 |
3 |
0.1 |
250x2 |
20000 |
3 |
3.3 |
3 |
0.5 |
75x4.6 |
6000 |
1 |
5.3 |
1 |
0.3 |
75x2 |
6000 |
1 |
1 |
1 |
1 |
МИКРОКОЛОНОЧНАЯ И ОБЫЧНАЯ ВЭЖХ
|
МК ВЭЖХ |
ВЭЖХ |
|
|
|
|
|
|
Размеры колонки, мм |
2х60÷80 |
4.6х250 |
Эффективность колонки, т.т. |
5000÷6000 |
15000÷20000 |
Пиковая емкость колонки, пики* |
40÷45 |
70÷85 |
Линейная скорость элюции, мм/сек |
0.5÷1 |
1÷2 |
Объемная скорость элюции, мл/мин |
0.1÷0.2 |
1÷2 |
Рабочее давление, МПа |
2÷4 |
15÷30 |
Расход элюента на 1 анализ, мл** |
2 |
40 |
Время анализа, мин** |
10÷20 |
20÷40 |
27
ВЭЖХ - 2006
КОЛОНКИВВЭЖХ
Классификация ВЭЖХ по диаметру колонок
Тип хроматографии |
внутр, мм |
|
Обычная ВЭЖХ |
3-5 |
|
Conventional HPLC |
||
|
||
ВЭЖХ на узких колонках |
2 |
|
Narrow-bore HPLC |
||
|
||
Микроколоночная ЖХ |
0.5-1 |
|
Micro LC |
||
|
||
Капиллярная ВЭЖХ |
0.1-0.5 |
|
Capillary LC |
||
|
||
Нано ВЭЖХ |
0.01-0.1 |
|
Nano LC |
||
|
||
ВЭЖХ на полом каилляре |
0.005-0.05 |
|
Open tubular LC |
|
Y.Saito, K.Jinno, T.Greibrokk. J. Sep. Sci. 2004, 27, 1379–1390
28
Лекция 3
Механизмы жидкостной хроматографии
Г.И.Барам Курс лекций "ВЭЖХ для ВСЕХ"
Новосибирск, 2007
29