Материал: 2593

26

расстоянии около 28 мм от центра чашки 6 луночек тонкослойной стерильной трубкой с внешним диаметром 10 мм. В зависимости от того, какой антибиотик определяют, испытуемую пробу разводят соответствующим буфером в соотношении 1:5 и прогревают на водяной бане при 60 оС в течение 10 мин для устранения антибактериальных свойств мѐда. После остывания содержимое пробирок вносят по 0,1 мл в 2 луночки от каждой навески (для исследования одной пробы используют одну чашку). Чашки переносят в термостат, где выдерживают 18 – 20 ч при 37 оС. По истечении указанного времени чашки просматривают. Наличие зоны угнетения вокруг луночек указывает на присутствие в мѐде антибиотиков. Такой мѐд не допускается к реализации, а используются в кондитерской промышленности, где его обрабатывают в течение 1,5 ч температурами от 60 до 100 оС, которые разрушают антибиотики.

Приготовление тест-культур. Ампулу с высушенным штаммом вскрывают и в неѐ стерильно добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. После полного растворения содержимое переносят пастеровской пипеткой в чашки Петри с 2 %-ным мясо-пептонным агаром с pH 7,8 – 8,0 и выращивают 18 – 20 ч в термостате при температуре 37 оС Берут колонии с характерными признаками для необходимой культуры, высевают на скошенный 2 %-ный мясопептонный агар и инкубируют 10 – 20 ч. Выращенную культуру смывают с поверхности агара и высевают в матрицы со средой, состоящей из 2,5 % агара, приготовленного на бульѐне Хоттингера, содержащего 33 мг % аминного азота. Споры выращивают 10 – 12 сут при температуре 37 оС. После обнаружения в мазках в поле зрения микроскопа 90 – 95 % спор проводят смыв дистиллированной водой. Взвесь спор прогревают при температуре 65 – 70 оС в течение 30 мин и центрифугируют. Отмывание спор с последующим прогреванием проводят не менее 3 раз. Из основной взвеси готовят рабочую взвесь по стандарту мутности 10.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ ПЧЁЛ

При реализации мѐда внутри страны и при вывозе его на экспорт за рубеж ветеринарные лаборатории обязаны исследовать мѐд на наличие в нѐм инфекционных болезней пчѐл и человека. Контаминирование мѐда микроорганизмами может происходить во время выработки его пчѐлами, при откачивании его из сотов и в процессе реализации. В мѐд могут попадать сальмонеллы, стафилококки, туберкулѐзная палочка, микробы, патогенные для пчѐл и расплода, микробы и грибы, вызывающие порчу мѐда вследствие их ферментативной деятельности.

Пчѐлы в поисках корма посещают любой источник углеводов, в том числе и пищевые отбросы. Мѐд может быть сильно контаминирован туберкулѐзной палочкой, если пасека расположена вблизи животноводческих ферм, где содержатся больные животные. Микобактерии туберкулѐза сохраняют свою патогенность в мѐде при хранении его в комнатных условиях (20 – 22 оС) в течение

27

6 – 20 дней, а при температуре 4 – 5 оС в течение 43 – 61 дней. Кишечные и дизентерийные палочки тоже могут заноситься пчѐлами в мѐд, где сохраняются до 2 суток.

Бактериологический метод исследования. При непосредственном высе-

ве растворов мѐда на питательные среды рост микроорганизмов наблюдается не всегда из-за малой концентрации их в мѐде. Поэтому проводится концентрация микробов. Для этого 15 – 20 г мѐда растворяют в стерильной водопроводной воде и 2 раза центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об/мин. В результате этого происходит концентрация микробов во взятой пробе и отмывание их от сахаров мѐда. Полученный осадок высевают на питательные среды. Для выделения возбудителей американского гнильца используют среду Томашеца (МПСА) и мясо - пептонный сывороточный бульон (МПСБ) с добавлением 10 % свежей лошадиной сыворотки; европейского гнильца – обычные МПА и МПБ, для Strept. pluton – среду Бейли или Черепова и картофельный бульон; парагнильца (Bac. paraalvei) – мясо - пептонный сывороточный агар с добавлением экстракта эритроцитов (среда Тошкова) и мясо - пептонный сывороточный бульон; септицемии (Pseudomonas apisepticum), гафниоза и сальмонеллеза

–МПА и МПБ; аспергиллѐза (Aspergillus flavus)и аскосфероза (Ascosphera apis)

–агар Сабуро или Чапека.

Культуры выращивают в термостате при 37 оС в аэробных условиях в течение 5 – 8 дней. Идентификацию выросших культур проводят в соответствии с бактериологическими и серологическими методами.

Экспресс – методы обнаружения возбудителей гнильцовых болезней в мѐде. Для исследования проб на наличие возбудителей необходимы следующие материалы и аппаратура:

люминесцентный микроскоп МЛ–2 с набором прилагаемых к нему фильтров или обычный биологический микроскоп (МБИ-1, МБИ-3, МБИ-4), оборудованный люминесцентным устройством;

осветитель для возбуждения люминесценции препарата (ртутная лампа СВД-250);

светофильтры (СС-4,СС-8); опак – иллюминатор (ОИ – 17 или ОИ – 18);

предметные и покровные обезжиренные стѐкла; флуоресцирующие антиларвейные и антиальвейные сыворотки и кон-

трольная кроличья люминесцирующая сыворотка; спирт этиловый или метиловый;

забуферѐнный физиологический раствор (фосфатный буфер); забуферѐнный глицериновый раствор (глицериновый буфер); нефлуоресцирующее иммерсионное масло; иммерсионные жидкости – для работы с иммерсионными объективами

используют специальные нефлуоресцирующие жидкости, которые прилагаются к микроскопу. При отсутствии их используют диметилфталат;

Глицериновый буфер готовят смешиванием девяти частей нейтрального глицерина и одной части фосфатного буфера (pH 8,0). Препараты фиксируют

28

метиловым или этиловым спиртом. Промывают препараты фосфатным буфером (pH 7,4), который готовят путѐм смешивания 30 мл 1/15 М раствора однозамещѐнного фосфорнокислого натрия или калия, 120 мл 1/15 М раствора двузамещѐнного фосфорно – кислого натрия и 8,78 г хлористого натрия с 1 л дистиллированной воды.

Жидкий мѐд предварительно тщательно перемешивают и берут нужное количество. Пробы из закристаллизованного мѐда берут щупом с разной глубины. Сотовый мѐд берут в количестве 30 г и, удалив забрус, погружают в 15 – 20 мл стерильного физраствора для полного растворения мѐда в ячейках сотов.

Навеску мѐда 15 – 20 г помещают в стерильную колбочку и добавляют 25

– 30 мл физраствора (температура 35 – 40 оС). Растворѐнный мѐд центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об /мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, к центрифугату снова добавляют 25 – 30 мл физраствора, взбалтывают и ещѐ раз центрифугируют. Из полученного центрифугата параллельно делают два мазка, один из которых окрашивают по Грамму, другой , на споры, - 2 %-ным раствором карболового фуксина и производят посевы на питательные среды. Выросшую культуру возбудителя идентифицируют.

В тех случаях, когда из-за низкой плотности идентифицирования мѐда бактериологическим методом выделить возбудителей нельзя, применяется метод флуоресцирующих антител с использованием антиларвейной и антиальвейной сывороток. Для этой цели 15 – 20 г мѐда растворяют в 25 – 30 мл физраствора и центрифугируют. Из центрифугатов делают мазки, фиксируют этиловым спиртом в течение 15 мин, высушивают на воздухе, затем увлажняют фосфатным буфером (pH 7,4) и опять высушивают. Препараты окрашивают прямым способом. Наносят на мазок каплю соответствующей фиксирующей сыворотки, помещают в чашку Петри с влажным тампоном ваты и выдерживают при температуре 37 оС в течение 35 – 45 мин. Окрашенные мазки промывают тем же буферным раствором, дважды сменяя раствор через 20 мин, и ополаскивают дистиллированной водой. На высушенные мазки помещают каплю буферного глицерина, покрывают тонким покровным стеклом, на которое наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло, и просматривают под люминесцентным микроскопом МЛ – 2 по общепринятой методике.

Степень свечения микробных клеток оценивают по четырѐхбалльной системе:

++++ сияющее золотисто – зеленоватое свечение палочек и спор Bac. larvae с ярко выраженными контурами микробных клеток;

+++ яркое зеленоватое свечение палочек и спор с чѐтко выраженными контурами;

++ умеренное зеленовато – желтоватое свечение клеток и спор с отчѐтливыми контурами;

+ слабое сероватое свечение микробных клеток и спор с неясными конту-

рами;

― клетки незаметны или в виде серых теней.

29

Оценивают степень свечения большинства клеток. В контроле с чистой культурой Bac. Larvae, окрашенной флуоресцирующей антиларвейной сывороткой, свечение должно быть как при четырѐх баллах; при окраске препаратов, приготовленных из центрифугатов мѐда антиальвейной флуоресцирующей сывороткой, свечение должно быть как при двух и одном баллах.

САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА МЁДА

Физико – химические показатели доброкачественного цветочного и падевого мѐда должны соответствовать показателям табл. 9.

Таблица 9 Физико – химические показатели цветочного и падевого мѐда

В реализацию не допускается мѐд: а) находящийся в грязной, ржавой, оцинкованной, медной и крашенной посуде; б) с отстоем и признаками брожения; в) имеющий неудовлетворительные органолептические показатели (ненормальный цвет); г) с наличием посторонних запахов (в том числе лекарственных препаратов, применяемых для лечения пчѐл); д) с неприятным привкусом (горький, кислый и др.); е) с ненормальной консистенцией (слизистая, нетягучая, водянистая и др.); ж) имеющий повышенную влажность; и) перегретый, имеющий карамельный привкус; к) фальсифицированный (свекловичный и искусственно инвертированный сахара, картофельная патока, крахмал, мука, желатин и др. вещества); л) загрязнѐнный механическими примесями (песок, земля, камни и др.). При поверхностном загрязнении мѐда делают зачистку;

30

м) с повышенной общей кислотностью; и) содержащий антибиотики, пестициды, возбудители болезней; о) ядовитый.

ВЕТЕРИНАРНО – САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА ВОСКА И ВОЩИНЫ

Воск – это продукт восковых желѐз рабочих пчѐл. При комнатной температуре он представляет собой твѐрдое, мелкозернистое на изломе вещество, окраска которого колеблется от бесцветной до тѐмно – жѐлтой, светло - коричневой или коричневой.

Воск широко используется в различных отраслях. В большом количестве он требуется для изготовления вощины, применяемой в пчеловодстве.

По составу воск сложное органическое соединение. В его состав входит около 300 различных веществ, в том числе: сложные эфиры – 70 – 75 %, свободные жирные кислоты – 12 – 15 %, углеводороды – 11 – 17 %, вода – до 2,52 %, ароматические, красящие и минеральные вещества, смолы и др.

При температуре 30 оС воск твѐрдый, при 35 оС пластичный, при 60 – 65 оС плавится и становится жидким. Воск кипит при температуре 100 оС, го-

рит при 300 оС. Воск хорошо растворяется при нагревании в сероуглероде, ацетоне, бензоле, бензине, скипидаре, петролейном эфире, четырѐххлористом углероде, ди- и трихлорэтилене, хлороформе и др; плохо растворяется в спирте и совсем не растворяется в воде и глицерине. Плотность воска 0,959 – 0,967.

В зависимости от технологии переработки воскового сырья натуральный пчелиный воск подразделяют на воск пасечный, получаемый на пасеках при перетапливании отбракованных сотов, и воск производственный (технический), изготовляемый на воскозаводах при переработке мервы и пасечных вытопок. Для исследования от каждой единицы упаковки продукции берут пробы воска общей массой 150 г.

ОРГАНОЛЕПТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОСКА

Ц в е т и с т р у к т у р у воска на изломе определяют визуально, з а- п а х органолептически. Воск пасечный должен быть белого, светло – жѐлтого, жѐлтого, тѐмно – жѐлтого или серого цвета, а воск производственный - светло

–коричневый с естественным восковым запахом. Воск с добавлением канифоли, парафина и стеарина издаѐт характерный для них запах.

Необходимо учитывать, что цвет натурального пчелиного воска может изменяться под влиянием металла оборудования, используемого для переработки и ѐмкости для хранения воскосырья, так как в жирных кислотах воска они частично растворяются. При соприкосновении с железом воск приобретает бурую окраску. Оцинкованное железо окрашивает воск в тѐмно – серый, а медь

–в серо – зелѐный или сине – зелѐный цвета. Поэтому оборудование для переработки воскосырья должно быть изготовлено из нержавеющей стали, никеля, алюминия, дерева. При длительном хранении, особенно при минусовых температурах, на воске появляется серый налѐт, который не считается загрязнением. Налѐт легко удалим.