Материал: 2098

26

плавленную и затем охлаждённую до 45 – 48 оС среду вносят взвесь спор той культуры, на какой антибиотик исследуют мёд, из расчёта 20 – 30 млн. микробных тел на 1 мл среды. Среду со взвесью спор разливают по 10 мл в каждую чашку. После застывания засеянного агара вырезают на его поверхности на расстоянии около 28 мм от центра чашки 6 луночек тонкослойной стерильной трубкой с внешним диаметром 10 мм. В зависимости от того, какой антибиотик определяют, испытуемую пробу разводят соответствующим буфером в соотношении 1:5 и прогревают на водяной бане при 60 оС в течение 10 мин для устранения антибактериальных свойств мёда. После остывания содержимое пробирок вносят по 0,1 мл в 2 луночки от каждой навески (для исследования одной пробы используют одну чашку). Чашки переносят в термостат, где выдерживают 18 – 20 ч при 37 оС. По истечении указанного времени чашки просматривают. Наличие зоны угнетения вокруг луночек указывает на присутствие в мёде антибиотиков. Такой мёд не допускается к реализации, а используются в кондитерской промышленности, где его обрабатывают в течение 1,5 ч температурами от 60 до 100 оС, которые разрушают антибиотики.

Приготовление тест-культур. Ампулу с высушенным штаммом вскрывают и в неё стерильно добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. После полного растворения содержимое переносят пастеровской пипеткой в чашки Петри с 2 %-ным мясо-пептонным агаром с pH 7,8 – 8,0 и выращивают 18 – 20 ч в термостате при температуре 37 оС Берут колонии с характерными признаками для необходимой культуры, высевают на скошенный 2 %-ный мясопептонный агар и инкубируют 10 – 20 ч. Выращенную культуру смывают с поверхности агара и высевают в матрицы со средой, состоящей из 2,5 % агара, приготовленного на бульёне Хоттингера, содержащего 33 мг % аминного азота. Споры выращивают 10 – 12 сут при температуре 37 оС. После обнаружения в мазках в поле зрения микроскопа 90 – 95 % спор проводят смыв дистиллированной водой. Взвесь спор прогревают при температуре 65 – 70 оС в течение 30 мин и центрифугируют. Отмывание спор с последующим прогреванием проводят не менее 3 раз. Из основной взвеси готовят рабочую взвесь по стандарту мутности 10.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ ПЧЁЛ

При реализации мёда внутри страны и при вывозе его на экспорт за рубеж ветеринарные лаборатории обязаны исследовать мёд на наличие в нём инфекционных болезней пчёл и человека. Контаминирование мёда микроорганизмами может происходить во время выработки его пчёлами, при откачивании его из сотов и в процессе реализации. В мёд могут попадать сальмонеллы, стафилококки, туберкулёзная палочка, микробы, патогенные для пчёл и расплода, микробы и грибы, вызывающие порчу мёда вследствие их ферментативной деятельности.

27

Пчёлы в поисках корма посещают любой источник углеводов, в том числе и пищевые отбросы. Мёд может быть сильно контаминирован туберкулёзной палочкой, если пасека расположена вблизи животноводческих ферм, где содержатся больные животные. Микобактерии туберкулёза сохраняют свою патогенность в мёде при хранении его в комнатных условиях (20 – 22 оС) в течение 6 – 20 дней, а при температуре 4 – 5 оС в течение 43 – 61 дней. Кишечные и дизентерийные палочки тоже могут заноситься пчёлами в мёд, где сохраняются до 2 суток.

Бактериологический метод исследования. При непосредственном высе-

ве растворов мёда на питательные среды рост микроорганизмов наблюдается не всегда из-за малой концентрации их в мёде. Поэтому проводится концентрация микробов. Для этого 15 – 20 г мёда растворяют в стерильной водопроводной воде и 2 раза центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об/мин. В результате этого происходит концентрация микробов во взятой пробе и отмывание их от сахаров мёда. Полученный осадок высевают на питательные среды. Для выделения возбудителей американского гнильца используют среду Томашеца (МПСА) и мясо - пептонный сывороточный бульон (МПСБ) с добавлением 10 % свежей лошадиной сыворотки; европейского гнильца – обычные МПА и МПБ, для Strept. pluton – среду Бейли или Черепова и картофельный бульон; парагнильца (Bac. paraalvei) – мясо - пептонный сывороточный агар с добавлением экстракта эритроцитов (среда Тошкова) и мясо - пептонный сывороточный бульон; септицемии (Pseudomonas apisepticum), гафниоза и сальмонеллеза

–МПА и МПБ; аспергиллёза (Aspergillus flavus)и аскосфероза (Ascosphera apis)

–агар Сабуро или Чапека.

Культуры выращивают в термостате при 37 оС в аэробных условиях в течение 5 – 8 дней. Идентификацию выросших культур проводят в соответствии с бактериологическими и серологическими методами.

Экспресс – методы обнаружения возбудителей гнильцовых болезней в мёде. Для исследования проб на наличие возбудителей необходимы следующие материалы и аппаратура:

люминесцентный микроскоп МЛ–2 с набором прилагаемых к нему фильтров или обычный биологический микроскоп (МБИ-1, МБИ-3, МБИ-4), оборудованный люминесцентным устройством;

осветитель для возбуждения люминесценции препарата (ртутная лампа СВД-250);

светофильтры (СС-4,СС-8); опак – иллюминатор (ОИ – 17 или ОИ – 18);

предметные и покровные обезжиренные стёкла; флуоресцирующие антиларвейные и антиальвейные сыворотки и кон-

трольная кроличья люминесцирующая сыворотка; спирт этиловый или метиловый;

забуферённый физиологический раствор (фосфатный буфер); забуферённый глицериновый раствор (глицериновый буфер); нефлуоресцирующее иммерсионное масло;

28

иммерсионные жидкости – для работы с иммерсионными объективами используют специальные нефлуоресцирующие жидкости, которые прилагаются к микроскопу. При отсутствии их используют диметилфталат;

Глицериновый буфер готовят смешиванием девяти частей нейтрального глицерина и одной части фосфатного буфера (pH 8,0). Препараты фиксируют метиловым или этиловым спиртом. Промывают препараты фосфатным буфером (pH 7,4), который готовят путём смешивания 30 мл 1/15 М раствора однозамещённого фосфорнокислого натрия или калия, 120 мл 1/15 М раствора двузамещённого фосфорно – кислого натрия и 8,78 г хлористого натрия с 1 л дистиллированной воды.

Жидкий мёд предварительно тщательно перемешивают и берут нужное количество. Пробы из закристаллизованного мёда берут щупом с разной глубины. Сотовый мёд берут в количестве 30 г и, удалив забрус, погружают в 15 – 20 мл стерильного физраствора для полного растворения мёда в ячейках сотов.

Навеску мёда 15 – 20 г помещают в стерильную колбочку и добавляют 25

– 30 мл физраствора (температура 35 – 40 оС). Растворённый мёд центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об /мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, к центрифугату снова добавляют 25 – 30 мл физраствора, взбалтывают и ещё раз центрифугируют. Из полученного центрифугата параллельно делают два мазка, один из которых окрашивают по Грамму, другой , на споры, - 2 %-ным раствором карболового фуксина и производят посевы на питательные среды. Выросшую культуру возбудителя идентифицируют.

В тех случаях, когда из-за низкой плотности идентифицирования мёда бактериологическим методом выделить возбудителей нельзя, применяется метод флуоресцирующих антител с использованием антиларвейной и антиальвейной сывороток. Для этой цели 15 – 20 г мёда растворяют в 25 – 30 мл физраствора и центрифугируют. Из центрифугатов делают мазки, фиксируют этиловым спиртом в течение 15 мин, высушивают на воздухе, затем увлажняют фосфатным буфером (pH 7,4) и опять высушивают. Препараты окрашивают прямым способом. Наносят на мазок каплю соответствующей фиксирующей сыворотки, помещают в чашку Петри с влажным тампоном ваты и выдерживают при температуре 37 оС в течение 35 – 45 мин. Окрашенные мазки промывают тем же буферным раствором, дважды сменяя раствор через 20 мин, и ополаскивают дистиллированной водой. На высушенные мазки помещают каплю буферного глицерина, покрывают тонким покровным стеклом, на которое наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло, и просматривают под люминесцентным микроскопом МЛ – 2 по общепринятой методике.

Степень свечения микробных клеток оценивают по четырёхбалльной системе:

++++ сияющее золотисто – зеленоватое свечение палочек и спор Bac. larvae с ярко выраженными контурами микробных клеток;

+++ яркое зеленоватое свечение палочек и спор с чётко выраженными контурами;

29

++ умеренное зеленовато – желтоватое свечение клеток и спор с отчётливыми контурами;

+ слабое сероватое свечение микробных клеток и спор с неясными конту-

рами;

― клетки незаметны или в виде серых теней.

Оценивают степень свечения большинства клеток. В контроле с чистой культурой Bac. Larvae, окрашенной флуоресцирующей антиларвейной сывороткой, свечение должно быть как при четырёх баллах; при окраске препаратов, приготовленных из центрифугатов мёда антиальвейной флуоресцирующей сывороткой, свечение должно быть как при двух и одном баллах.

САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА МЁДА

Физико – химические показатели доброкачественного цветочного и падевого мёда должны соответствовать показателям табл. 9.

Таблица 9 Физико – химические показатели цветочного и падевого мёда

В реализацию не допускается мёд: а) находящийся в грязной, ржавой, оцинкованной, медной и крашенной посуде; б) с отстоем и признаками брожения; в) имеющий неудовлетворительные органолептические показатели (ненормальный цвет); г) с наличием посторонних запахов (в том числе лекарственных препаратов, применяемых для лечения пчёл); д) с неприятным привкусом (горький, кислый и др.); е) с ненормальной консистенцией (слизистая, не-

30

тягучая, водянистая и др.); ж) имеющий повышенную влажность; и) перегретый, имеющий карамельный привкус; к) фальсифицированный (свекловичный и искусственно инвертированный сахара, картофельная патока, крахмал, мука, желатин и др. вещества); л) загрязнённый механическими примесями (песок, земля, камни и др.). При поверхностном загрязнении мёда делают зачистку; м) с повышенной общей кислотностью; и) содержащий антибиотики, пестициды, возбудители болезней; о) ядовитый.

ВЕТЕРИНАРНО – САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА ВОСКА И ВОЩИНЫ

Воск – это продукт восковых желёз рабочих пчёл. При комнатной температуре он представляет собой твёрдое, мелкозернистое на изломе вещество, окраска которого колеблется от бесцветной до тёмно – жёлтой, светло - коричневой или коричневой.

Воск широко используется в различных отраслях. В большом количестве он требуется для изготовления вощины, применяемой в пчеловодстве.

По составу воск сложное органическое соединение. В его состав входит около 300 различных веществ, в том числе: сложные эфиры – 70 – 75 %, свободные жирные кислоты – 12 – 15 %, углеводороды – 11 – 17 %, вода – до 2,52 %, ароматические, красящие и минеральные вещества, смолы и др.

При температуре 30 оС воск твёрдый, при 35 оС пластичный, при 60 – 65 оС плавится и становится жидким. Воск кипит при температуре 100 оС, горит при 300 оС. Воск хорошо растворяется при нагревании в сероуглероде, ацетоне, бензоле, бензине, скипидаре, петролейном эфире, четырёххлористом углероде, ди- и трихлорэтилене, хлороформе и др; плохо растворяется в спирте и совсем не растворяется в воде и глицерине. Плотность воска 0,959 – 0,967.

В зависимости от технологии переработки воскового сырья натуральный пчелиный воск подразделяют на воск пасечный, получаемый на пасеках при перетапливании отбракованных сотов, и воск производственный (технический), изготовляемый на воскозаводах при переработке мервы и пасечных вытопок. Для исследования от каждой единицы упаковки продукции берут пробы воска общей массой 150 г.

ОРГАНОЛЕПТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОСКА

Ц в е т и с т р у к т у р у воска на изломе определяют визуально, з а- п а х органолептически. Воск пасечный должен быть белого, светло – жёлтого, жёлтого, тёмно – жёлтого или серого цвета, а воск производственный - светло

– коричневый с естественным восковым запахом. Воск с добавлением канифоли, парафина и стеарина издаёт характерный для них запах.

Необходимо учитывать, что цвет натурального пчелиного воска может изменяться под влиянием металла оборудования, используемого для переработки и ёмкости для хранения воскосырья, так как в жирных кислотах воска они частично растворяются. При соприкосновении с железом воск приобретает бурую окраску. Оцинкованное железо окрашивает воск в тёмно – серый, а медь