Автореферат: Влияние вакцины Гриппол на радиорезистентность организма

Согласно нашим данным, максимальные титры б - ИФН в группе добровольцев отмечаются на 7 сутки (732 пг/мл) и на второй месяц (886 пг/мл) после вакцинации (рис 5в). Титры г - ИФН у привитых добровольцев демонстрируют иную динамику. Постепенно снижаясь, титры г - ИФН достигают минимальных значений на 7 сутки (427 пг/мл), затем плавно нарастают до 783 пг/мл во втором месяце наблюдений (рис 6в).

Рисунок (а) - Эксперименты на мышах

* - 7 сутки, значение статистически достоверно, p=0,023,t=-2,739

Рисунок (б) - Эксперименты на собаках

* - 14 сутки, значение статистически достоверно p=0,047,t=-2,350

Рисунок (в) - Наблюдения за добровольцами

* - 7 сутки, значение статистически достоверно p=0,01,t=-2,817

** - 2-ой месяц, значение статистически достоверно p=0,00,t=-4,511

Рисунок 5 (а, б, в) - Интерферон-б синтезирующая активность клеток периферической крови после иммунизации вакциной Гриппол.

среднее значение титра ИФН; - - - - границы доверительного интервала значений у неиммунизированных животных и человека

Рисунок (а) - Эксперименты на мышах

* - 28 сутки, значение статистически достоверно p=0,03,t=-2,566

Рисунок (б) - Эксперименты на собаках

* - 14 сутки, значение статистически достоверно p=0,038,t=-2,475

** - 21 сутки, значение статистически достоверно p=0,011,t=-3,267

Рисунок (в) - Наблюдения за добровольцами

* - 7 сутки, значение статистически достоверно p=0,015,t=2,642

** - 14 сутки, значение статистически достоверно p=0,041,t=2,167

Рисунок 6(а, б, в) - Интерферон-г синтезирующая активность клеток периферической крови после иммунизации вакциной Гриппол

среднее значение титра ИФН; - - - - границы доверительного интервала значений у неиммунизированных животных и человека

Как следует из представленных данных, максимальные титры б- ИФН у мышей отмечаются на 7 сутки, у собак - на 14 сутки, что подтверждается литературными источниками (Иванов А.А. и соавт.,1995). Известно, что б- ИФН, усиливающий специфический иммунный ответ, относится к цитокинам, определяющим ранние цитокиновые реакции организма на введение антигенов, а г - ИФН, как один из регуляторных цитокинов иммунной системы, может служить показателем сдвига иммунных реакций в сторону Т-клеточного ответа, активации макрофагов и NK-клеток. Титры г - ИФН, по нашим данным, достигают максимальных значений у мышей на 28 сутки, у собак на 21 сутки. Отличие во времени обнаружения максимальных титров интерферона у мышей и собак наиболее вероятно объясняется видовыми физиологическими особенностями подопытных животных. В наблюдениях за динамикой титров б- ИФН у вакцинированных Грипполом добровольцев наибольшие значения титров отмечается на 7 и 60-е сутки, титры г - ИФН не повышены.

Таким образом, вакцина Гриппол помимо усиления выработки специфических противогриппозных антител обладает неспецифическим эффектом, а именно стимулирует процессы интерфероногенеза. Поскольку реакция системы ИФН опережает развитие специфического иммунного ответа, вероятно именно стимуляция интерфероногенеза обуславливает развитие первой ранней неспецифической фазы повышения резистентности, развивающейся до формирования иммунного ответа.

Учитывая литературные данные, описанное влияние вакцины Гриппол на продукцию б - и г - ИФН, можно объяснить двумя составляющими: непосредственно биологическими свойствами гриппозных антигенов и наличием в составе вакцины иммуномодулятора полиоксидония.

Как известно, моноциты/макрофаги, нейтрофилы и лимфоциты являются источниками цитокинов. Активация функциональной активности клеток моноцитарно-макрофагальной системы лежит в основе выраженного клинического эффекта полиоксидония при разных по этиологии патологических процессах. В частности, показано, что полиоксидоний обладает способностью активировать продукцию цитокинов лейкоцитами периферической крови (Петров Р.В. и соавт.,1999). Полиоксидоний усиливает продукцию ИЛ-1в, ИЛ-6, ФНО-б, т.е. цитокинов, продуцируемых преимущественно клетками моноцитарно-макрофагальной системы. Под влиянием полиоксидония активируются практически все звенья иммунной система организма.

Наблюдаемые в данном исследовании изменения интерферонового статуса на фоне нарастания титра специфических антител являются отражением целого ряда метаболических процессов в ходе ответа на вакцинацию. Полученные данные позволяют предполагать, что вакцина Гриппол, помимо усиления выработки специфических противогриппозных антител, обладает широким спектром неспецифических эффектов, обеспечивающих повышение резистентности при различных видах иммунозависимых патологий.

Экспериментальные данные, приведенные выше, позволяют перейти к оценке взаимосвязи между уровнем радиорезистентности и интерфероновым статусом организма.

Анализ взаимоотношений уровня радиорезистентности и интерферонового статуса животных.

После облучения животных разделили на две группы согласно исходным значениям сывороточного ИФН: титр ИФН ? 8 и титр ИФН < 8. Затем провели сопоставление показателей смертности облученных собак с исходным уровнем сывороточного ИФН. При оценке статистической значимости различий по выживаемости из выборки были исключены 2 животных с неопределяемыми титрами сывороточного ИФН (титр =0)

Таблица 5. Влияние исходного уровня сывороточного интерферона в сыворотке крови на выживаемость собак после облучения в дозе 2,5 Гр.

Полученные и приведенные в таблице 5 данные свидетельствуют о том, что в группе собак с исходно высокими титрами сывороточного ИФН до облучения (ИФН ? 8 ед/мл) выжило 7 из 10 животных. В то же время в группе животных с исходно низкими титрами сывороточного ИФН до облучения (ИФН < 8 ед/мл) пали все 3 собаки.

Влияние исходного уровня ИФН сыворотки крови на смертность облученных в дозе 2,5 Гр собак представлена на рисунке 7.

Рисунок 7. Смертность собак, облученных в дозе 2,5 Гр с высоким и низким исходным (до облучения) содержанием интерферона в сыворотке крови.

Из рисунка 7 следует, что смертность собак с высоким исходным уровнем ИФН в сыворотке была равна 30%, с исходно низким ? 100%. Исходя из малого количества наблюдаемых животных (N=13), оценку статистической значимости проводили с использованием критерия Фишера (при 2-х стороннем распределении P = 0,07).

На основании этих данных можно построить прогноз выживаемости облученных собак в зависимости от исходного содержания сывороточного интерферона в периферической крови.

Расчет точности прогноза исхода ОЛБ по Т-тесту Шеллинга ? Вольфейля (Малета Ю.С., Тарасов В.В., 1982) показал, что с вероятностью 95,9% можно говорить о более высокой возможности выживания облученных собак с высоким исходным уровнем содержания ИФН в сыворотке (титр 1:8 и выше) и гибели животных с низким его содержанием (титр 0-1:4).

Результаты определения содержания лейкоцитов периферической крови облученных собак, разделенных на группы в зависимости от исходного уровня сывороточного ИФН, представлены на рисунке 8.

Рисунок 8. Количество лейкоцитов в периферической крови собак с высоким и низким содержанием ИФН в сыворотке перед облучением (2,5 Гр) в период разгара ОЛБ (7-14 сут).

Из представленных на рисунке данных видно, что темпы падения содержания лейкоцитов периферической крови собак в разгар ОЛБ в группе с высоким исходным до облучения содержанием ИФН в сыворотке ниже, по сравнению с аналогичными показателями в группе собак с исходно низким содержанием ИФН в сыворотке. Полученные данные статистически достоверны на 14 сутки наблюдения (уровень значимость по критерию Стьюдента p=0,028) Приведенные результаты исследования позволяют сделать вывод, что повышенное содержание сывороточного ИФН в сыворотке крови собак перед облучением способствует ослаблению скорости опустошения клеточного состава периферической крови в период разгара ОЛБ.

Основываясь на приведенных выше экспериментальных данных, можно предполагать, что наличие повышенного содержания ИФН в сыворотке крови перед облучением повышает выживаемость облученных собак и отражает состояние, обеспечивающее замедление темпов падения содержания лейкоцитов периферической крови, что, в свою очередь, способствует лучшему перенесению ОЛБ.

Таким образом, используя значения титров сывороточного ИФН в сыворотке крови перед облучением, можно прогнозировать выживаемость животных и человека. Так как ИФН, не зависимо от вида млекопитающих играют в организме животных и человека схожую физиологическую роль, то экстраполяция данных, полученных в экспериментах на животных, принципиально возможна и на человека.

Суммируя все вышеизложенное, следует отметить, что иммунизация вакциной Гриппол повышает радиорезистентность экспериментальных животных. Способность Гриппола активировать процессы интерфероногенеза в периферических клетках крови играет ключевую роль в повышении радиорезистентности организма.

Выводы

1. Вакцины Гриппол активирует процессы интерфероногенеза в организме животных и человека. Титры б - интерферона у мышей достигают максимальных значений на 7 сутки, а у собак - на 14 сутки после введения вакцины. У человека наибольшие титры б - интерферона отмечаются на 7 и 56 сутки после введения Гриппола.

2. Вакцина Гриппол, введенная в дозе 0,2 мл за 7 и 14 суток до облучения (7,5 Гр), статистически достоверно повышает выживаемость иммунизированных мышей по сравнению с неиммунизированными на 25% и 60% соответственно и положительно влияет на динамику массы тела и скорость восстановления показателей периферической крови.

3. Введение Гриппола собакам до облучения в количестве 0,5 мл за 16 суток в дозе 2,5 Гр оказывает положительное влияние на скорость восстановления показателей периферической крови.

4. У животных (собак) с исходно высокими титрами сывороточного ИФН перед облучением отмечено увеличение выживаемости и снижение темпов падения лейкоцитов периферической крови по сравнению с животными с исходно низкими титрами сывороточного ИФН перед облучением.

5. Основываясь на совпадении сроков повышения интерферонсинтезирующей способности лейкоцитов крови у животных (7-21 сутки) с периодами повышения радиорезистентности, можно прогнозировать повышение радиорезистентности у человека на 7-56 сутки, что соответствует периоду повышения б - интерферонсинтезирующей активности клеток периферической крови.

Практические рекомендации

1. Иванов А.А., Уланова А.М., Мальцев В.Н., Ставракова Н.М., Рогожин Д.В. Использованию показателей интерферонового статуса для прогнозирования радиорезистентности // Методические рекомендации ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, 2008г.

2. Иванов А.А., Уланова А.М., Мальцев В.Н., Ставракова Н.М., Рогожин Д.В. Применение вакцины "Гриппол" для повышения неспецифической противолучевой резистентности //Методические рекомендации ФГУП ГНЦ Институт биофизики ФМБА России, 2008г.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Рогожин Д.В., Бабаянц А.А., Иванов А.А. Влияние вакцины Гриппол на интерфероновый статус организма // Тез.XIV Российского национального конгресса "Человек и лекарство", 16 - 20 апреля, 2007 года, Москва

2. Иванов А.А., Рогожин Д.В., Бабаянц А.А., Уланова А.М. Расширение показаний к применению вакцины "Гриппол" на основании новых данных ответа организма на иммунизацию. Тез. VI Всероссийского конгресса "Профессия и здоровье", 30 октября - 1 ноября 2007 г., Москва.

3. Рогожин Д.В., Бабаянц А.А., Пинегин Б.В., Иванов А.А. Влияние вакцины Гриппол на интерфероновый статус // Тез. Всероссийской научной конференции "Объединенный иммунологический форум", Санкт-Петербург, 30 июня - 5 июля 2008 г.

4. Иванов А.А., Бабаянц А.А., Дешевой Ю.Б., Ильина Н.И., Мальцев В.Н., Пинегин Б.В., Рогожин Д.В., Уланова А.М. Интерфероногенная активность вакцины Гриппол // Иммунология. - 2008. - Т. 29, № 5. - С. 278-280.

5. Иванов А.А., Иванова А.С., Уланова А.М., Ставракова Н.М., Дешевой Ю.Б., Рогожин Д.В., Андрианова И.Е., Мальцев В.Н. Противолучевое действие вакцины "Гриппол" // Радиационная биология. Радиоэкология. - 2010. - Т. 50, № 1. - С. 52-57.