Материал: спектр и фотометр

ЧАСТЬ 2. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

СИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДОВ СПЕКТРОСКОПИИ

ИХРОМАТОГРАФИИ

Различные этапы исследования потенциальных лекарственных средств в соответствии с современными Правилами организации производства и контроля качества лекарственных средств (GLP или GMP) требуют привлечения определенного набора физических, химических и физико-химических методов.

На этапе синтеза новых соединений и изучения их фармакологической активности с помощью физических и химических методов устанав-

ливают физико-химические константы и степень чистоты.

При переходе к доклиническим и клиническим испытаниям происхо-

дит формирование нормативных документов (НД).

На этом этапе для испытаний подлинности обычно используют качественный функциональный анализ, определение температуры плавления, а также методы УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии.

Для количественного определения биологически активного веще-

ства используют титриметрические методы, УФ-спектрофотометрию,

ГЖХ, ВЭЖХ и другие методы.

Биофармацевтические и фармакокинетические исследования

требуют применения высокочувствительных методов (УФ-спектрофо-

тометрия, флуориметрия, масс-спектро-метрия, радиохимические методы).

Этап перехода к промышленному производству сопровождается адаптацией разработанных методик оценки доброкачественности к условиям фармацевтического предприятия и проверки стабильности основных показателей качества на опытно-промышленных сериях лекарственных средств (ЛС).

Таким образом, аналитические методы широко применяются на всех стадиях разработки новых ЛС, включая синтетические, технологические, биофармацевтические, фармакокине-тические исследования.

Разработка НД на лекарственные вещества (ЛВ) и лекарственные формы (ЛФ) – это итог аналитических исследований, связанных с созданием ЛС.

Руководствуясь НД, провизор-аналитик осуществляет затем систематический контроль за качеством ЛС как в процессе их производства, так и при поступлении на аптечные базы (склады) и в аптеки.

66

В связи с тем, что различные методы спектроскопии подробно рассмотрены в I части данного учебного пособия, а методы хроматографического анализа ЛС широко представлены в ранее изданных нами учебных пособиях (А.З. Абышев, С.Н. Трусов, А.В. Ложкин «Лекарственные препараты антиангинального действия»,Санкт-Петербург, 2010, 140с и А.З. Абышев, С.Н. Трусов, Н.И. Котова, М.П. Блинова «Синтез, свойства и контроль качества витаминных препаратов и витаминоподобных веществ», Санкт-Петербург, 2010, 133с), в настоящем втором издании учебного пособия представляем некоторые варианты методов хроматографии, отсутствующих в вышеуказанных учебных пособиях. В качестве примера рассматриваем результаты анализа различных групп ЛС методами тонкослойной хроматографии (ТСХ), колоночной хроматографии (КХ), гель – хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), газовой жидкостной хроматографии (ГЖХ), вариант сочетания последней с масс-спектрометрией и др.

Ниже представлены некоторые варианты адсорбционной и гель-хро- матографии, отвечающие требованиям, предъявляемым GLP или GMP при разработке новых ЛС в лабораторных и промышленных условиях

(см. рис. 1, 2).

67

Рис. 3. Гель-хроматография в промышленных условиях

68

Рис. 4. Комбинированная гель-хроматография в промышленных условиях

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) отлича-

ется от ГЖХ тем, что подвижной фазой служит не газ, а жидкость, причем она проходит через колонку наполненную сорбентом, с большой скоростью за счет значительного давления.

Поэтому ВЭЖХ позволяет разделять многокомпонентные смеси на индивидуальные вещества высокой степени чистоты. ВЭЖХ отличается высокой чувствительностью (до 10-6 г).

На разделение 10-15 компонентов затрачивается 20-30 мин.

Жидкостный хроматограф включает такие узлы, как дозатор, насос

высокого давления, высокоэффективную колонку, детектор с регистрирующим устройством.

Колонки изготавливают из нержавеющей стали, они имеют длину

10-25см, внутренний диаметр0,3-0,8сми плотно набиваются адсорбентом с размером частиц 5-10 мкм.

69

Вкачестве элюента используют различные углеводороды в сочетании

сэтанолом.

Детектором обычно служит спектрофотометр с переменной длиной волны (190-900 нм), но существуют также флуориметрические, элек-

трохимические и другие детекторы.

Подлинность испытуемых ЛВ подтверждают по времени выхода каждого компонента смеси из колонки, которое будет лабильно при одинаковых условиях проведения эксперимента.

Количественное содержание рассчитывается по площади пика,ко-

торая пропорциональна количеству ЛВ в пробе.

В настоящее время метод ВЭЖХ широко применяется при изучении фармакокинетики различных лекарственных веществ и их лекарственных форм.

Не давно данная методика была успешно апробирована в исследованиях клинической фармакокинетики антиангинального препарата амло-

дипина.

Хроматограмма реального образца плазмы крови человека на 10 день через 5 ч после приема препарата (1 таблетка, содержащая 5 мг активного вещества) и современный ВЭЖХ приведены на рисунках 5 и 6.

Рис. 5. Хроматограмм субстанции амлодипина

Далее представляем конкретные примеры ЛВ и их лекарственные формы, в контроле качества которых были использованы современные методы спектроскопии и хроматографии по следующим показателям:

1.Синтез (если он не описан в учебниках по фармацевтической химии или в других источниках) и определение чистоту и строения ЛВ;

2.Определение подлинности (идентификации) ЛВ;

3.Количественное определение;

4.Применение.

70