Методические указания:

1. Обратить внимание на плотность и размеры приготовленных пробок. Периодически проверять диаметр скручиваемой пробки по характерному звуку, возникающему при извлечении пробки из горлышка колбы или пробирки.

2. При подготовке посуды исключить повреждения оберточной бумаги и проверять плотность ее прилегания к поверхности посуды. Указать способы и режимы стерилизации посуды и водопроводной воды.

3. Внимательно ознакомиться с прописью приготовления среды Эндо, указанной на упаковке с сухой средой. Для приготовления среды пользоваться только стерильной колбой и разливать только в стерильные чашки Петри.

4. При розливе стерильного мясопептонного агара в стерильные чашки Петри все операции необходимо проводить у пламени горелки.

5. При определении массы навески для посева в жидкую накопительную среду необходимо руководствоваться действующими нормативами безопасности пищевых продуктов - СанПиН 2.3.2.1078-01. Следует придерживаться соотношения между массой исследуемой навески и объемом среды накопления, в которую навеска вносится, определяемого приблизительно как 1:10.

Оборудование и материалы: Весы технические электронные (или механические с разновесом), рН-метр, водяная баня, электроплитка, термостат с температурой 30ºС, термостат с температурой 37ºС, колбы вместимостью 500, 250, 100 см³, пробирки бактериологические и химические, цилиндры мерные разные, стакан химический, пипетки на 1-2 см³ и 10 см³ , шпатель металлический, сухая среда Эндо, 10%-ные растворы кислоты и щелочи, вата, марля, нитки хлопчатобумажные белые, ватно-марлевае пробки к колбам и пробиркам, бумага оберточная, шпагат, ножницы, спирт этиловый, горелка газовая или спиртовка, дезинфицирующий раствор; стерильные: чашки Петри, металлические шпатели, часовые стекла или фольга, колбы со 100 см³ и пробирки с 10 см³ водопроводной воды (для приготовления разведений исследуемого материала), пипетки на 1, 2 и 10 см³ , колбы со стерильной накопительной средой Кесслер.

Лабораторная работа № 7. Анализ накопительной культуры и выделение чистой культуры. Седиментационный посев воздуха.

Задания:

1. Визуально отметить наличие или отсутствие признаков роста микроорганизмов в накопительной среде.

2. Приготовить препарат «раздавленная капля» из накопительной культуры, препарат промикроскопировать и зарисовать.

3. Провести рассев полученной накопительной культуры на среду Эндо в чашки Петри для получения изолированных колоний. Чашки с посевами поместить в термостат при температуре 37ºС, перевернув их вверх дном.

4. Провести в выбранном помещении седиментационный посев воздуха на мясопептонный агар в чашку Петри. Чашки с посевами поместить в термостат при температуре 30ºС, перевернув их вверх дном.

Методические указания:

1. Рост микроорганизмов в среде накопления после термостатирования отмечают по появлению мути, осадка, пленки на поверхности среды, газовыделению, изменению цвета среды.

2. Перед приготовлением препарата для микроскопирования содержимое колбы с накопительной культурой тщательно перемешивают. Препарат микроскопируют с сухими системами и зарисовывают с соблюдением относительных пропорций наблюдаемых объектов.

3. При рассеве накопительной культуры на дифференциально-диагностическую среду Эндо следует с одной стороны, тщательно соблюдать условия асептики, а с другой – не допускать ее инактивации вследствие перегрева.

4. При проведении в помещении седиментационного анализа воздуха чашки Петри со средой следует располагать на уровне рабочих поверхностей или на уровне пола. Во время экспозиции чашек Петри необходимо исключить появление турбулентных воздушных потоков в местах их размещения.

Оборудование и материалы: Микроскоп лабораторный, предметные и покровные стекла, бактериологические петли, термостат с температурой 30ºС, термостат с температурой 37ºС, вата, салфетки марлевые, полоски фильтровальной бумаги, спирт этиловый, горелка газовая или спиртовка, универсальный маркер, дезинфицирующий раствор; стерильные: чашки Петри со средой Эндо и мясопептонным агаром, шпатели Дригальского, пипетки на 1-2 см³ .

Лабораторная работа № 8. Анализ микробиологической загрязненности воздуха по Омелянскому. Изучение некоторых культуральных и морфологических особенностей выделенных микроорганизмов.

Задания:

1. Визуально отметить наличие или отсутствие роста микроорганизмов на среде Эндо. При наличии роста описать характер колоний, выбрать наиболее характерные для БГКП колонии, окрасить материал из этих колоний по Граму. Сделать заключение о возможном присутствии БГКП в пробе взятого на исследование материала.

2. Провести подсчет числа выросших на МПА колоний в чашках Петри с посевом воздуха, сделать расчет загрязненности воздуха по правилу Омелянского и дать заключение о его чистоте.

3. Описать и зарисовать 2-4 изолированные колонии бактерий и мицелиальных грибов из числа выросших на МПА.

4. Приготовить из материала выбранных бактериальных колоний фиксированные препараты, окрасить по Граму, промикроскопировать. Выявить форму и взаимное расположение клеток, принадлежность к окраске по Грамму, наличие спор, капсул. Зарисовать. Приготовить из материала колоний препарат «раздавленная капля» и определить подвижность бактерий.

5. Приготовить из материала выбранных колоний мицелиальных грибов препарат «раздавленная капля», промикроскопировать. Выявить наличие или отсутствие септ, описать органы бесполого размножения. Зарисовать.

Методические указания:

1. Для окраски по Грамму следует брать материал из колоний, окрашенных в малиновый цвет с металлическим блеском и без него, бледно розовых, прозрачных с ровными краями, блестящих и слегка выпуклых. Параллельно следует приготовить препараты из тест-культур и окрасить их по Граму.

2. При большом числе выросших на МПА в чашках Петри колоний следует пользоваться счетчиком колоний. При отсутствии счетчика допустимо проводить подсчет колоний в отдельном секторе с последующим пересчетом на всю площадь поверхности среды.

3. При описании поверхностных колоний отмечают их форму (округлая, неправильная, ризоидная, амебовидная и др.), профиль (плоский, выпуклый, кратерообразный, конусовидный и др.), структуру (однородная, мелкозернистая, волокнистая, струйчатая и др.), поверхность (гладкая, шероховатая, складчатая, с концентрическими кругами и др.), блеск, прозрачность, цвет, размер, консистенцию.

4. Для изучения морфологических признаков бактерий можно ограничиться приготовлением 2-х препаратов: окрашенного простым способом и окрашенного по Грамму.

5. Для приготовления препарата «раздавленная капля» из культуры гриба материал следует брать на границе окрашенного и неокрашенного мицелия. Для лучшего наблюдения органов бесполого размножения с конидиеносцев предварительно отбивают конидии легким постукиванием по покровному стеклу препарата «раздавленная капля». Препарат в этом случае готовят в водном растворе этанола (1:1).

Оборудование и материалы: Микроскоп лабораторный, предметные и покровные стекла, бактериологические петли, препаровальные иглы, малый кристаллизатор (или пластиковый лоток), стеклянные рельсы, промывалки с водопроводной водой, капельницы с водой, карболовым фуксином, карболовым генциан-виолетом, с раствором Люголя, с 96º этиловым спиртом, иммерсионным маслом; вата, салфетки марлевые, полоски фильтровальной бумаги, спирт этиловый, горелка газовая или спиртовка, универсальный маркер, дезинфицирующий раствор.

Итоговый контроль.

После выполнения всех лабораторных работ и успешных ответов на контрольные вопросы студент получает зачет по практической части дисциплины «Микробиология».