Охлаждают, фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерную колбу вместимостью 500 см3 и доводят до метки дистиллированной водой.
Раствор углекислого натрия годен в течение 1 мес.
6.9.3.5 Приготовление основного раствора галловой кислоты с массовой концентрацией 5 мг/см3
В мерной колбе вместимостью 100 см3 растворяют навеску галловой кислоты массой (0.500 ± 0.001) г в 10 см3 этилового спирта. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.
Основной раствор хранят при температуре 4 *С в течение 14 с.
6.9.3.6 Приготовление рабочих растворов галловой кислоты В пять мерных колб вместимостью 100 см3 каждая пилеткой последовательно добавляют 1.2. 3.
5.10 см3 основного раствора галловой кислоты, приготовленного по 6.9.3.5. Объем растворов в колбах
5.11 доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают. Массовая концентрация галловой кислоты
5.12 составляет 0.05; 0.1; 0,15; 0.25; 0.5 мг/см3 соответственно.
Рабочие растворы используют в день приготовления.
6.9.3.7 Построение градуировочного графика В шесть мерных колб вместимостью 50 см3 каждая пипеткой вносят по 1 см3 рабочих растворов галловой кислоты, приготовленных no 6.9.3.6. и 10 см3 дистиллированной воды. В каждую колбу пипеткой добавляют 4 см3 реактива Фолина-Чокальтеу или приготовленного по 6.9.3.3. 6 см3 раствора углекислого натрия, приготовленного по 6.9.3.4. перемешивают и доводят до метки дистиллированной едой. В шестую колбу - контрольный раствор добавляют пипеткой 1 см3 дистиллированной воды. Через 2 ч измеряют оптическую плотность растворов на спектрофотометре (фотоколориметре) при длине волны 765 нм по отношению к контрольному раствору.
Пипеткой вносят в кювету раствор, полученный по 6.9.3.7. Кювету помещают в кюветодержатель спектрофотометра (фотоколориметра) и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 765 нм. В качестве контроля используют дистиллированную воду.
Выполняют два параллельных определения.
Для построения градуировочного графика берут среднеарифметическое значение результатов трех измерений оптической плотности каждого рабочего раствора галловой кислоты. Строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значение массовой концентрации галловой кислоты, а на оси абсцисс - оптическую плотность.
Градуировочный график должен быть линейным.
Градуировочный график строят каждый раз перед проведением измерений.
6.9.4 Проведение испытаний
6.9.4.1 В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 5 см3 водно-спиртового экстракта прополиса, приготовленного по 6.9.3.2. объем раствора в колбе доводят до метки этиловым спиртом.
6.9.4.2 В мерную колбу вместимостью 50 см3 пипеткой вносят 1 см3 пробы, приготовленной по 6.9.4.1. и далее проводят испытания по 6.9.3.7.
Измерение проводят в двух повторностях.
6.9.5 Обработка и представление результатов испытаний
6.9.5.1 По градуировочному графику находят значение массовой концентрации галловой кислоты в растворе прополиса С (мг/см3).
6.9.5.2 За окончательный результат измерений массовой концентрации полифенольных соединений принимают среднеарифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.14). если расхождение между ними не превышает предел повторяемости г - 0.10Х4, мг/г (при Р - 0.95).
6.9.5.3 Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.16). не должно превышать предела воспроизводимости R - 0.19Х4, мг/г (при Р - 0.95). по ГОСТ ИСО 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата измерения, и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение.
6.9.5.4 Границы абсолютной погрешности (±Л) результатов измерений массовой концентрации полифенольных соединений - ±0,04Х4. мг/г (при Р - 0,95).
6.9.5.5 Окончательный результат измерений количества оолифенольных соединений округляют до первого десятичного знака и представляют в виде
Х4 ± д. при Р - 0.95,
где Х4 - среднеарифметическое значение результатов измерений количества полифенольных соединений по 6.9.5.3, мг/г;
±Д - границы абсолютной погрешности результатов измерений по 6.9.S.5. мг/г.
6.10 Определение йодного числа
6.10.1 Сущность метода
Йодное число показывает наличие и количество ненасыщенных соединений в основном ненасыщенных жирных кислот, способных образовывать с йодом комплексы с переносом заряда.
6.10.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы
6.10.3 Весы с пределами допускаемой погрешности взвешивания не более ±0.2 мг.
Колбы конические Кн-1 (2.3) - 100 (250) - 29/32 (34) по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1-50 (100.150.1000) - 2 - по ГОСТ 1770.
Пипетки исполнений 1-1-1-5 (10), 2-1-1-25 по ГОСТ 29227.
Цилиндры мерные 1-25 (50.100.1000) - 1 поГОСТ 1770.
Стакан В-1-50 по ГОСТ 25336.
Склянка из темного стекла со шлифом по ГОСТ 21400.
Микробюретки исполнений 1-1-2-5-0.02 или 1-2-2-10-0,05 по ГОСТ 29251.
Капельница 2-25 ХС по ГОСТ 25336.
Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61.
Йод кристаллический по ГОСТ 4159. ч. д. а.
Хлороформ по ГОСТ 20015, ч.
Бром в ампулах по ГОСТ 4109.
Толуол по ГОСТ 5789.
Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия) по ГОСТ 27068.
Крахмал растворимый по ГОСТ 10163. ч. д. а., раствор с массовой долей 0.5%.
Натрий углекислый безводный (карбонат натрия) по ГОСТ 83.
Калий йодистый по ГОСТ 4232. раствор с массовой долей 10%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Шкафы вытяжные радиохимические по ГОСТ 23308.
Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники по ГОСТ 27752.
Термометры жидкостные стеклянные по ГОСТ 28498.
Баня водяная лабораторная с электрическим подогревом диапазоном поддержания температуры до 100 *С и с погрешностью 10,5 «С.
6.10.4 Подготовка к выполнению измерений
6.10.4.1 Приготовление раствора йодистого калия с массовой долей 10%
В мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают примерно 70 см3 дистиллированной воды, вносят (10.0 ± 0,001) г йодистого калия, перемешивают и доводят объем до метки дистиллированной водой.
6.10.4.2 Приготовление раствора тиосульфата натрия концентрации 0.1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят навески тиосульфата натрия массой (25,010,001) г и безводного карбоната натрия массой (0.1 ± 0.001) г. Мерным цилиндром вместимостью 1000 см3 добавляют 700 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем доводят до метки дистиллированной водой, переносят в темную склянку и выдерживают 10 сут.
Раствор тиосульфата натрия годен в течение 1 года.
6.10.4.3 Приготовление раствора крахмала с массовой долей 0,5%
Навеску растворимого крахмала массой (0.4 ± 0,001) г растирают в небольшом количестве дистиллированной воды в химическом стакане вместимостью 50 см3 и полученную массу вливают в колбу вместимостью 150 см3, содержащую 100 см3 кипящей дистиллированной воды. Раствору дают отстояться и используют верхнюю часть отстоя. Для консервирования к полученному раствору добавляют капельницей две-три капли толуола.
Раствор крахмала годен в течение 1 мес.
6.10.4.4 Приготовление смеси бром-йод В мерную колбу с притертой пробкой вместимостью 1000 см3 помещают навеску кристаллического йода массой (13.2 ± 0.0001) г. порциями добавляют ледяную уксусную кислоту и растворяют на водяной бане при температуре 60 вС-70 «С. Раствор охлаждают, пипеткой добавляют 3 см3 брома, затем полученный объем доводят ледяной уксусной кислотой до метки.
Смесь бром-йод хранят в темной склянке с притертой пробкой в течение 1 мес.
Примечание - Рабогу проводят в вытяжном шкафу.
6.10.5 Проведение испытания В коническую колбу вместимостью 250 см3 берут навеску прополиса массой (0,050 ± 0,0001) г, пилеткой приливают 2.50 см3 хлороформа и 6.25 см3 смеси брома-йода по 6.10.3.4. Колбу закрывают пробкой, смоченной раствором йодистого калия по 6.10.3.1. раствор перемешивают и выдерживают в темном месте 1 ч. В колбу добавляют пипеткой 5 см3 раствора йодистого калия с массовой долей 10% по 6.10.3.1. мерным цилиндром вместимостью 100 см3 добавляют 50 см3 дистиллированной воды, капельницей вносят 4-7 капель раствора крахмала по 6.10.3.3; перемешивают и титруют из бюретки раствором тиосульфата натрия концентрации 0.1 моль/дм3 по 6.10.3.2 до обесцвечивания раствора.
Одновременно в тех же условиях проводят титрование контрольного раствора, содержащего 2.5 см3 хлороформа. 6.25 см3 смеси брома-йода. по 6.10.3.4. 5 см3 раствора йодистого калия с массовой долей 10% по 6.10.3.1. 50 см3 дистиллированной воды и 4-7 капель раствора крахмала по 6.10.3.3.
Измерение проводят в двух повторностях.
6.10.6 Обработка и представление результатов испытаний
6.10.6.1 За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух результатов измерений йодного числа в прополисе, полученными в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.14), если расхождение между ними не превышает предел повторяемости г = 0.10Х5, % (при Р - 0,95).
6.10.6.2 Расхождение между результатами измерений, полученных в двух лабораториях в условиях воспроизводимости_по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.18), не должно превышать предела воспроизводимости R «0.19Х5.% (при Р - 0.95). по ГОСТ ИСО 5725*6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата измерения, и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение.
6.10.6.3 Границы абсолютной погрешности (±Д) результатов измерений йодного числа в прополисе - ±0.04XS.% (при Р - 0,95).
6.10.6.4 Окончательный результат измерений йодного числа в прополисе округляют до первого десятичного знака и представляют в виде
Х5 ± А. при Р = 0,95
где Х5 - среднеарифметическое значение результатов измерений количества полифенольных соединений по 6.10.5.2, %:
±д - границы абсолютной погрешности результатов измерений по 6.10.5.4, %.
6.11 Определение количества окисляемых веществ в 1 см3 раствора окислителя на 1 мг прополиса
6.11.1 Сущность метода
Количество окисляемых веществ в 1 см3 раствора окислителя на 1 мг прополиса определяют титрованием рабочего раствора солью Мора в присутствии бензидина с одновременным титрованием контрольного раствора с дистиллированной водой; количество окисляемых веществ - по разнице в титровании контрольного и опытного растворов прополиса.
6.11.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы
6.11.3 Весы с пределами допускаемой погрешности взвешивания не более ±0.2 мг.
Секундомер механический однострелочный, второго класса точности, с ценой деления шкалы; секундной - 0,2 с, счетчика минут - 1 мин и средней абсолютной погрешностью - ±1.0 с за 30 мин.
Баня водяная лабораторная с электрическим подогревом диапазоном поддержания температуры до 100 *С и с погрешностью ±0.5°C.
Колбы конические Кн-2-100-34 ТХ по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1-100-2. 2-100-1.2-1000-1 по ГОСТ 1770.
Цилиндры мерные 1-50 (100) - 1 ло ГОСТ 1770.
Пипетки 2-1-1-1 (2,10,25). 2-1-2-5 по ГОСТ 29227.
Бюретки исполнения 11-1-2-5-0,02 или 1-2-2-1.0-0,05 ло ГОСТ 29251.
Боронки В-36-60 или В-36-80 по ГОСТ 25336.
Капельница 2-25 ХС ло ГОСТ 25336.
Калий марганцовокислый ло ГОСТ 20490, х. ч. раствор молярной концентрации с (КМлО4) = 0.1 моль/дм3.
Кислота серная по ГОСТ 4204. х. ч.
Натрий углекислый ло ГОСТ 83. х. ч.
Соль Мора по ГОСТ 4208. раствор концентрации 0,01 моль/дм3.
Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61. раствор с массовой долей 10%.
Бензидин солянокислый, раствор с массовой долей 1%.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962. раствор с объемной долей 96%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники по ГОСТ 27752.
Термометры жидкостные стеклянные по ГОСТ 28498.
Бумага фильтровальная до ГОСТ 12026.
6.11.4 Подготовка к выполнению измерений