Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962. раствор объемной долей 96%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
6.7.2.1 Проведение измерения 8-конической колбе вместимостью 100 см3 взвешивают (1.00 ± 0.01) г прополиса, мерным цилиндром вместимостью 100 см3 прибавляют 50 см3 этилового спирта и нагревают до кипения на водяной бане при частом перемешивании. Работу проводят в вытяжном шкафу. Горячий раствор декантируют в коническую колбу вместимостью 150 см3 через бумажный фильтр, предварительно высушенный в эксикаторе при комнатной температуре. Остаток в колбе обрабатывают один раз горячим этиловым спиртом объемом 30 см3, который декантируют через бумажный фильтр с использованием мерного цилиндра вместимостью 50 см3, затем закрывают часовым стеклом. Осадок на фильтре промывают горячим этиловым спиртом три раза: первый раз - 20 см3, затем - два раза по 10 см3 мерным цилиндром вместимостью 50 см3. Объединенные фильтраты охлаждают до 5 X. при этом и раствора выпадает белый осадок - воск, который отфильтровывают через бумажный фильтр, предварительно
6.7.2.2 высушенный при температуре окружающего воздуха в эксикаторе.
Осадок на фильтре промывают холодным ректификованным этиловым спиртом три раза: первый раз - 20 см3, затем - два раза по 10 см3 мерным цилиндром вместимостью 50 см3. Фильтр с осадком сушат при температуре окружающего воздуха до постоянной массы в эксикаторе, взвешивают.
Измерение проводят в двух повторностях.
Примечание - Температура кипения спирта - 78.4 'С.
6.7.3 Обработка и представление результатов измерений
6.7.3.1 За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.14). если расхождение между ними не превышает предел повторяемости г = 0.11Х, % (при Р - 0.95).
6.7.3.2 Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.18), не должно превышать предела воспроизводимости R - 0,2Х1 (при Р - 0,95) по ГОСТ ИСО 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата измерения и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение.
67.4.4 Границы абсолютной погрешности результатов измерений при определении массовой доли механических примесей - ±0,14Х, % (при Р - 0.95).
67.4.5 Окончательный результат измерений массовой доли механических примесей округляют до второго десятичного знака и представляют в виде
Х1±Д, при 0.95
где Ху - среднеарифметическое значение результатов измерений массовой доли механических примесей по 67.4.2.%;
±Л - границы абсолютной погрешности результатов измерений по 67.4.4.%.
67.4.6 Массовую долю воска Х2.%. в прополисе вычисляют до третьего десятичного знака по формуле
где /п3 - масса фильтра с воском, г.
го, - масса фильтра, г:
т - масса навески, г.
67.47 За результат принимают среднеарифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.14), если расхождение меж-ду ними не превышает предел повторяемости г - 0.11^, % (при Р - 0,95).
67.4.8 Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.18). не должно превышать предела воспроизводимости R - 0.2Х2.% (при Р - 0.95), по ГОСТ ИСО 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата измерения, и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение.
67.4.9 Границы абсолютной погрешности результатов измерений при определении массовой доли воска - ±0.14Х2.% (при Р - 0.95).
6.7.4.10 Окончательный результат измерений массовой доли воска округляют до второго десятичного знака и представляют в виде
Х2 ± А, при Р - 0.95
где Х2 - среднеарифметическое значение результатов измерений массовой доли воска по 67.3.1.%;
±д - границы абсолютной погрешности результатов измерений по 67.3.4.%.
6.8 Определение массовой доли флавоноидных и других фенольных соединений
6.8.1 Сущность метода
Метод основан на экстракции флавоноидных и других фенольных соединений из прополиса и колориметрическом измерении интенсивности окрашивания образовавшегося соединения.
6.8.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами абсолютной допускаемой погрешности ±0.001 г.
Мешалка магнитная, обеспечивающая скорость вращения магнитного якоря 120-1500 об/мин.
Спектрофотометр или колориметр фотоэлектрический концентрационный, позволяющий проводить измерение оптической плотности в диапазоне длин волн 315-900 нм.
Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.
Колбы конические Кн-2-50-14/23 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1-50-2 по ГОСТ 1770.
Воронки по ГОСТ 25336.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Пипетки исполнений 1-1-1-5. 2-1-1-25 по ГОСТ 29227.
Колбы конические Кн-1 (2.3) - 100 (250) - 29/32 (34) по ГОСТ 25336.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ 5962.
6.8.3 Проведение измерений
6.8.3.1 Навеску прополиса, подготовленного по 6.4.2. массой (0,05 ± 0.001) г помещают в коническую колбу вместимостью 50 см3, пипеткой наливают 10 см3 этилового спирта, перемешивают на магнитной мешалке 10 мин. Смесь фильтруют через складчатый бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 50 см3.
6.8.3.2 Пипеткой вносят в кювету полученный по 6.8.3.1 раствор. Кювету помещают в юоветодержатель фотоэлектроколориметра и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 400 нм.
В качестве контроля используют этиловый спирт.
Измерение проводят в двух повторностях.
6.8.4 Обработка и представление результатов измерений
6.8.4.1 Массовую долю флавоноидных и других фенольных соединений в прополисе Х3.%. вычисляют до первого десятичного знака по формуле
6.8.4.2 За окончательный результат измерений массовой доли флавоноидных и других фенольных соединений принимают среднеарифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.14), если расхождение между ними не превышает предел повторяемости г = 0,10Х3.% (при Р - 0.95).
6.8.4.3 Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости_по ГОСТ ИСО 5725-1-2002 (пункт 3.18), не должно превышать предела вос-
6.8.4.4 производимости R - 0.19Х3, % (при Р - 0.95). по ГОСТ ИСО 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата измерения, и в качестве окончательного результата может быть использовано
6.8.4.5 их среднеарифметическое значение.
6.8.4.6 Границы абсолютной погрешности результатов измерений массовой доли флавоноидных и других фенольных соединений в прополисе - ±0.12Х3.% (при Р - 0.95).
6.8.4.7 Окончательный результат измерений массовой доли флавоноидных и других фенольных соединений округляют до первого десятичного знака и представляют в виде
Х3 ± А, при Р - 0,95
где Х3 - среднеарифметическое значение результатов измерений массовой доли флавоноидных и других фенольных соединений по 6.8.4.2, %;
±А - границы абсолютной погрешности результатов измерений по 6.8.4.4.%.
6.9 Определение полифенольных соединений
6.9.1 Сущность метода
Метод основан на реакции окисления полифенольных соединений водно-спиртового экстракта прополиса реактивом Фолина-Чокальтеу с последующим фотометрированием образующихся продуктов реакции при длине волны 765 нм. В качестве внутреннего стандарта используют галловую кислоту.
6.9.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами абсолютной допускаемой погрешности взвешивания 10,001 г.
Спектрофотометр или колориметр фотоэлектрический концентрационный, позволяющий проводить измерение оптической плотности в диапазоне длин волн 315-900 нм.
Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.
Воронки по ГОСТ 25336.
Пипетки исполнений 1-1-1-1.5 (10). 1-1-1-5 (10), 2-1-1-25 по ГОСТ 29227.
Колбы конические Кн-1 (2,3) - 100 (250) - 29/32 (34) по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1-100-2, 2-100-1, 2-500 (1000) - 1 по ГОСТ 1770.
Колбы круглодонные К-1-100-29/32 (34) по ГОСТ 25336.
Капельница 2-25 ХС по ГОСТ 25336.
Цилиндры 1-250-1.2-1000-1 по ГОСТ 1770.
Холодильник ХШ-1-400-29/32 ХС и трубки соединительные стеклянные по ГОСТ 25336.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые по ГОСТ 14919.
Баня водяная лабораторная с электрическим подогревом диапазоном поддержания температуры
до 100 `С и с погрешностью ±0.5 вС.
Бром по ГОСТ 4109.
Натрий углекислый безводный по ГОСТ 83.
Натрий вольфрамовокислый 2-водный по ГОСТ 18289.
Натрий молибденовокислый 2-водный по ГОСТ 10931.
Литий сернокислый вводный. х.ч. В Российской Федерации действуют ТУ-09-5299--69 «Литий сернокислый 1-водный. Технические условия».
Кислота галловая, моногидрат, с содержанием основного вещества не менее 99%.
Фоллина-Чокальтеу фенольный реагент.
Кислота соляная синтетическая техническая по ГОСТ 3118. х. ч.
Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552. х. ч.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Склянка из темного стекла со шлифом по ГОСТ 21400.
Термометры жидкостные стеклянные по ГОСТ 28498.
Шкафы вытяжные радиохимические по ГОСТ 23308.
Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники по ГОСТ 27752.
6.9.3 Подготовка к выполнению измерений
6.9.3.1 Приготовление водного раствора этилового спирта с массовой долей 70%
8 мерный цилиндр вместимостью 1000 см3 вносят 730 см3 этилового спирта. Объем раствора до-водят до метки дистиллированной водой.
6.9.3.2 Приготовление водно-спиртового экстракта прополиса В коническую колбу вместимостью 100 см3 вносят навеску прополиса массой (1,0 1 0.1) г, подготовленного по 6.4.2. и мерным цилиндром вместимостью 50 см3 добавляют 30 см3 водного раствора этилового спирта, приготовленного с массовой долей 70% по 6.9.3.1. Выдерживают при комнатной температуре в течение 24 ч. Содержимое колбы сливают с осадка и фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерную колбу вместимостью 100 см3. Процедуру экстракции прополиса повторяют еще раз с таким же объемом водного раствора этилового спирта. Осадок промывают 10 см3 водного раствора этилового спирта. Фильтрат доводят до метки водным раствором этилового спирта с массовой долей 70%.
Водно-спиртовой экстракт прополиса хранят в темном месте при температуре не выше 25°C в течение 3 дней.
6.9.3.3 Приготовление реактива Фолина-Чокальтеу В круглодонной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют вольфрамовокислый натрий массой (50.0 ± 0,01) г и молибденовокислый натрий массой (12.25 ± 0.001) г в 350 см3 дистиллированной воды.
Мерным цилиндром вместимостью 50 см3 добавляют 25 см3 ортофосфорной кислоты и 50 см3 концентрированной соляной кислоты. Колбу соединяют с обратным холодильником и кипятят на водяной бане в течение 10 ч. охлаждают. Затем добавляют (75.0 ± 0.01) г сернокислого лития и 25 см3 дистиллированной воды, перемешивают и капельницей добавляют 5 капель жидкого брома, перемешивают. Для удаления избытка брома кипятят 15 мин без холодильника и снова перемешивают. Охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерную колбу вместимостью 500 см3 и доводят до метки дистиллированной водой по ГОСТ 6709.
Реактив хранят в склянке вместимостью 500 см3 при температуре 4 *С не более 3 мес.
Примечание - Работу проводят в вытяжном шкафу по ПОСТ 23308.
6.9.3.4 Приготовление раствора углекислого натрия с массовой долей 20%
В конической колбе вместимостью 750 см3 растворяют безводный углекислый натрий массой (100.0 ± 0,01) г в 400 см3 дистиллированной воды и доводят до кипения на электрической плитке.