Однонаправленное снижение уровня АТ и аи-АТ к HLDF по сравнению с контролем, согласующееся со снижением концентрации белка HLDF в сыворотке крови пациентов с ГБ и с церебральными осложнениями ГБ, позволяет предположить вовлеченность в механизмы регуляции АД также и специфичных к HLDF ауто-АТ. Можно полагать, что ауто-АТ к HLDF в достаточно высоких титрах (что свидетельствует о высокой их активности) в норме выполняют регуляторную гомеостатическую функцию. При этом снижение синтеза и/или усиление катаболизма фактора HLDF приводит к ответному снижению титра идиотипических ауто-АТ к HLDF. В то же время, аи-АТ к могут служить функциональным аналогом антигена и существенно влиять на течение аутоиммунных процессов (Крыжановский Г.Н., 2010; Морозов С.Г. и др., 2005). Действительно, при не осложненной ГБ выявлено минимальное из всех обследованных групп пациентов содержание HLDF (рис.2а) и максимальный уровень аи-АТ к HLDF (рис.2c). Не исключено, что при нарушении метаболизма белка HLDF, наблюдаемого нами при ГБ, повышение уровня аи-АТ к HLDF можно объяснить попыткой организма скомпенсировать недостаточность фактора дифференцировки HLDF как адаптогенного агента. С другой стороны, понижение уровня ауто-АТ к HLDF по сравнению с наблюдаемым у здоровых лиц может свидетельствовать о дисбалансе в системе HLDF - АТ к HLDF - аи-АТ к HLDF, взаимосвязанной, по нашему предположению, с эндотелиновой системой, что, вероятно, может быть одним из звеньев дизрегуляции функционирования сердечно-сосудистой системы на молекулярном уровне. Так, при ОИИ мы наблюдаем не только истощение самого фактора HLDF в крови пациентов (рис.2а), но и снижение титра аи-АТ к HLDF до минимального из всех обследованных групп пациентов уровня (рис.2с).
Таким образом, проведенные исследования показали, что ГБ, ГК и ОИИ сопровождаются снижением сывороточного содержания белка HLDF (в 160, 9 и 8,5 раз соответственно), а также снижением уровня АТ к HLDF в 2-2,5 раз и уровня аи-АТ к HLDF в 2-11 раз по сравнению с условно здоровыми лицами. При этом развитие ГК характеризуется снижением титра аи-АТ к HLDF по сравнению с не осложненной ГБ в 2,6 раз.
Сопоставление содержания в сыворотке крови белков S100b, HLDF и уровней идиотипических и антиидиотипических аутоантител к ним с показателями функционального состояния сердечно-сосудистой и нервной систем у пациентов с гипертонической болезнью и ЕЕ цереброваскулярными осложнениями
Сравнительный анализ содержания белка S100b, уровня идиотипических и антиидиотипических аутоантител к S100b и динамики неврологических показателей у пациентов с церебральным гипертоническим кризом и острым ишемическим инсультом
При помощи статистического анализа были изучены взаимосвязи количественного содержания S100b, продукции АТ к S100b, аи-АТ к S100b в сыворотке крови пациентов, перенесших ГК и ОИИ, с неврологической симптоматикой. Обнаружена прямая корреляция титра АТ к S100b с очаговой симптоматикой при полушарном повреждении мозга, оцениваемой по шкале клинической оценки неврологического статуса Е.А. Широкова на 3-е сутки (R=0,37 p=0,042), 7-е сутки (R=0,41 p=0,021) и 21-е сутки (=0,57 p=0,031) развития ГК.
Сравнение по уровню аи-АТ к S100b подгрупп пациентов с различной выраженностью очаговой симптоматики при полушарном повреждении мозга (0 баллов, 10 баллов, 20 баллов) продемонстрировало, что на всех этапах обследования - с 1-го по 21-й день от начала ГК - наибольший титр аи-АТ к S100b соответствует наиболее выраженной очаговой симптоматике (рис.3).
*р<0,05 в сравнении с симптоматикой 0 баллов в соответствующий период наблюдения
**р<0,01 в сравнении с симптоматикой 0 баллов в соответствующий период наблюдения
Рис.3. Взаимосвязь титра антиидиотипических антител к S100b и очаговой симптоматики при полушарном повреждении мозга у пациентов с гипертоническим кризом в течение периода наблюдения.
У пациентов, перенесших ОИИ, обнаружена отрицательная корреляция содержания S100b с неврологической симптоматикой, оцениваемой по клинической шкале Orgogozo (рис.4), при которой более низкие баллы соответствуют более выраженному неврологическому дефициту. Как видно из представленных на рис.4 кривых корреляции, наиболее высокая концентрация S100b соответствует наиболее низким баллам по шкале Orgogozo, т.е. чем выше сывороточное содержание белка S100b в крови пациентов с ОИИ, тем выраженнее у них неврологическая симптоматика согласно данной шкале.
В результате проведения дисперсионного анализа полученных экспериментальных и клинических данных в работе обнаружена прямая взаимосвязь содержания белка S100b у пациентов, перенесших ОИИ, с объемом инфаркта мозга (ОИМ). При сравнении подгрупп пациентов с различным размером инфаркта мозга при ОИИ было обнаружено, что наивысшей концентрации белка S100b соответствует наибольший объем очага (рис.5). Принимая во внимание литературные данные, указывающие на то, что течение и исход инсульта напрямую зависят от ОИМ (Гусев Е.И., 2003; Широков E.A., 2007; Gaudinski M.R. et al., 2008; Pialat J.B. et al., 2005; Schiemanck S.K. et al., 2005), а также полученные в данной работе результаты, указывающие на статистически значимо больший размер очага инфаркта мозга у пациентов с неблагоприятным исходом ОИИ (рис.14), можно утверждать, что сывороточное содержание белка S100b может быть прогностическим показателем относительно исхода ишемического инсульта, поскольку оно коррелирует с ОИМ. В связи с этим данный временной период можно рассматривать как критический для дальнейшего развития и прогноза исхода ОИИ.
Анализ взаимосвязей иммунохимических и клинических показателей также документировал прямую корреляцию титра аи-АТ к S100b с выраженностью неврологической симптоматики по шкале NIH в группе пациентов, перенесших ОИИ (рис.6). Представленные на данном рисунке кривые корреляции указывают на то, что чем выше уровень аи-АТ к S100b в крови пациентов с ОИИ, тем выраженнее у них неврологическая симптоматика согласно шкале NIH.
Таким образом, в данной работе установлена прямая статистическая взаимосвязь сывороточного содержания белка S100b и уровней АТ и аи-АТ к S100b с выраженностью неврологической симптоматики при ГК и при ОИИ, а также с объемом инфаркта мозга при ОИИ.
Полученные в данной работе результаты подтвердили литературные данные о взаимосвязи содержания белка S100b (Foerch C. et al., 2005; Nash D.L. et al., 2008; Sienkiewicz-Jarosz Н. et al., 2009; Dayon L. et al., 2011) и уровня первичных ауто-АТ к нему (Жданов Г.Н. и др., 2004; Камчатнов П.Р. и др., 2009; Poletaev A.B. et al., 2000) с неврологической симптоматикой, тяжестью и исходом цереброваскулярных заболеваний, а также выявили статистическую взаимосвязь титра вторичных ауто-АТ к S100b с выраженностью неврологических проявлений при церебральном ГК и при ОИИ. Описанные данные указывают на вовлеченность белка S100b и ауто-АТ к S100b в патогенетические механизмы цереброваскулярных осложнений ГБ, что позволяет использовать S100b, АТ к S100b и аи-АТ к S100b в качестве маркеров нейронального повреждения и нарушений нейроиммунных взаимодействий при рассматриваемых патологиях.
Сравнительный анализ содержания белка HLDF, уровня идиотипических и антиидиотипических аутоантител к HLDF и клинических показателей, отражающих функциональное состояние сердечно-сосудистой системы у пациентов с гипертонической болезнью, церебральным гипертоническим кризом и острым ишемическим инсультом
Для выяснения возможных статистических взаимосвязей между сывороточным содержанием белка HLDF, а также уровнем АТ к HLDF и аи-АТ к HLDF и клиническими показателями, отражающими функциональное состояние сердечно-сосудистой системы у обследованных пациентов с ГБ, ГК и ОИИ, был проведен корреляционный и дисперсионный анализ. Выявлено, что содержание белка HLDF в сыворотке крови всех обследованных пациентов с ГБ и осложнениями ГБ, а также пациентов контрольной группы, обратно взаимосвязано с длительностью протекания ГБ (рис.7). При этом длительность ГБ у условно здоровых лиц принималась равной нулю.
*р0,05 по сравнению с длительностью ГБ 0-5 лет
Рис.7. Взаимосвязь сывороточного содержания белка HLDF с длительностью гипертонической болезни у всех обследованных пациентов.
*р0,05 по сравнению со стенозом МАГ менее 70%
Рис.8. Взаимосвязь сывороточного содержания HLDF с выраженностью стеноза магистральных артерий головы у пациентов с острым ишемическим инсультом.
Как продемонстрировано на рис.7, содержание белка HLDF у пациентов, страдающих ГБ от 6-ти до 15-ти и более лет, статистически значимо снижено по сравнению с содержанием HLDF у пациентов, страдающих ГБ менее 5-ти лет.
При дисперсионном анализе обнаружен также факт зависимости концентрации белка HLDF от выраженности стеноза магистральных артерий головы (МАГ) у пациентов, перенесших ОИИ (рис.8). Как видно из данного рисунка, пациенты с гемодинамически не значимым (менее 70%) стенозом МАГ демонстрируют более высокую сывороточную концентрацию белка HLDF (в 2 и более раз), чем пациенты с гемодинамически значимым (более 70%) стенозом МАГ.
*р0,05 по сравнению с длительностью ГБ 0,5-5 лет
Рис.9. Взаимосвязь титра АТ к HLDF с длительностью гипертонической болезни у пациентов с гипертонической болезнью, церебральным гипертоническим кризом и острым ишемическим инсультом.
*р0,05 по сравнению с ИБС функционального класса «1» в соответствующий период наблюдения
**р0,001 по сравнению с ИБС функционального класса «1» в соответствующий период наблюдения
Рис.10. Взаимосвязь титра АТ к HLDF с выраженностью ишемической болезни сердца у пациентов с гипертоническим кризом в течение периода наблюдения.
Дисперсионный анализ позволил обнаружить прямую взаимосвязь уровня идиотипических ауто-АТ к HLDF с длительностью протекания ГБ у пациентов с ГБ, ГК и ОИИ (рис.9). Данный рисунок демонстрирует, что значения титра АТ к HLDF у пациентов, страдающих ГБ 15-ть и более лет, статистически значимо превышают его значения у пациентов, страдающих ГБ от 0,5-ти до 15-ти лет.
При изучении кардиологической симптоматики в анамнезе обследованных пациентов с 1-го по 21-й день после поступления в стационар обнаружено, что в группе пациентов с ГК уровень АТ к HLDF взаимосвязан выраженностью ИБС. При разделении пациентов с ГК по степени выраженности ИБС на подгруппы с ИБС функционального класса «1» и ИБС функционального класса «2» было установлено, что титр АТ к HLDF в течение всего периода наблюдения выше у больных с более выраженной ИБС (рис.10). На данном рисунке видно, что титр АТ к HLDF на 1-е, 7-е и 21-е сутки обследования пациентов, страдающих ИБС функционального класса «2», статистически значимо превышает титр АТ к HLDF у пациентов, страдающих ИБС функционального класса «1» в те же временные периоды. В 3-и сутки обследования статистически значимых отличий титра АТ к HLDF у пациентов с различной выраженностью ИБС выявлено не было.
Дизрегуляция в сердечно-сосудистой системе у пациентов как с не осложненной, так и с осложненной ГБ напрямую взаимосвязана с иммунологической регуляцией гомеостаза сосудов (Harrison D.G. et al., 2011; Matrougui K. et al., 2011; Muller D.N. et al., 2011). Примером может служить выявленная в результате проведенного анализа прямая корреляция титра аи-АТ к HLDF и величины САД и ДАД у всех обследованных пациентов независимо от патологического состояния (рис.11). Как видно, титр аи-АТ к HLDF прямо коррелирует с САД (R=0,24 p=0,017) и ДАД (R=0,27 p=0,007), что еще раз подтверждает предположение о том, что ауто-АТ к HLDF вовлечены в регуляцию АД.
Рис.11. Прямая корреляционная зависимость титра антиидиотипических антител к HLDF от величины систолического и диастолического артериального давления во всех группах обследованных пациентов.
Дальнейшие исследования кардиологических показателей продемонстрировали, что уровень аи-АТ к HLDF также взаимосвязан с выраженностью СН у пациентов с ГК (рис.12). На данном рисунке показано, что уровень аи-АТ к HLDF у пациентов, страдающих выраженной СН, статистически значимо превышает таковой у пациентов, не имеющих СН или страдающих СН умеренной степени.
*р0,05 по сравнению с группой пациентов с отсутствующей и умеренно выраженной сердечной недостаточностью
Рис.12. Взаимосвязь титра аи-АТ к HLDF с выраженностью сердечной недостаточности у пациентов с гипертоническим кризом.
Полученные результаты демонстрируют, что длительное протекание ГБ приводит к снижению концентрации белка HLDF и повышению титра АТ к HLDF в крови пациентов, страдающих как ГБ, так и ее осложнениями относительно контрольной группы. Обнаруженное в работе снижение содержания HLDF при длительно протекающей ГБ и при выраженном стенозе МАГ позволяет предположить протективную роль белка HLDF для сердечно-сосудистой системы и взаимосвязи данного фактора с другими системами регуляции АД (эндотелиновая, ренин-ангиотензиновая) при развитии ГБ. Повышение титра АТ к HLDF и аи-АТ к HLDF при увеличении длительности ГБ и прогрессировании ИБС и СН может расцениваться как модуляция защитной функции HLDF по мере прогрессирования заболевания; компенсаторное повышение уровня ауто-АТ к HLDF указывает на дисбаланс иммунологической сети, регулирующей биологическую активность фактора HLDF. Выявленная обратная корреляция уровня аи-АТ к HLDF с САД и ДАД свидетельствует о вовлеченности данных ауто-АТ в регуляцию АД, причем роль аи-АТ к HLDF может сводиться не только к участию в деятельности иммунологической сети, но и состоять в функциональной замене самого фактора дифференцировки в условиях его сниженной концентрации для поддержания гомеостаза сердечно-сосудистой системы. В целом, выявленные взаимосвязи содержания HLDF и уровня ауто-АТ к HLDF с АД, длительностью протекания ГБ, выраженностью ИБС и СН, степенью стеноза МАГ подтверждают предположение о вовлеченности данных иммунобиохимических факторов в механизмы функционирования сердечно-сосудистой системы и формирование гипертонии.