15. Методы мб диагностики чумы.

Используются бактериоскопический, бактериологический, серологический и биологический методы, а так же аллергическая проба с пестином. Простым и надёжным методом является РПГА, особенно с использованием эритроцитарного диагностикума, сенсибилизированного моноклональными антителами к капсульному антигену, и ИФМ. Эти же реакции могут быть использованы для обнаружения антител в сыворотке больных. Биологический метод заключается в заражении исследуемым материалом морской свинки накожно, подкожно или, реже, внутрибрюшинно.

16. Специфическая профилактика чумы.

Постоянный контроль за природными очагами чумы и организация мероприятий по предупреждению заболеваний людей в стране осуществляется специальной противочумной службой. Для специфической профилактики чумы используется Чумная живая сухая вакцина из штамма EV. Состав: высушенная взвесь живых бактерий вакцинного штамма EV в специальной среде. Способ применения: накожно, внутрикожно или подкожно, однократно. Сухую вакцину разводят физиологическим раствором. При накожном методе три капли вакцины наносят на три участка скарифицированной кожи плеча, оспопрививательным пером через каждую каплю делают крестообразно 8 линейных насечек и тщательно втирают вакцину. При подкожном методе вакцину вводят с помощью шприца или струйного инъектора.

17. Морфологические и тинкториальные свойства бруцелл.

Морфологические свойства.

• мелкие кокковидные клетки диаметром 0,5-0,7 мкм и длиной 0,6-1,5 мкм,

• располагаются беспорядочно, иногда парами,

• не имеют жгутиков, не образуют спор и капсул.

• Являются аэробами или микроаэрофилами, в анаэробных условиях не растут.

Тинкториальные свойства.

• Грамотрицательна.

18. Культуральные свойства бруцелл.

Бруцеллы хорошо растут на обычных питательных средах, но лучше с добавлением сыворотки или крови. Рекомендуемые среды: 1) питательный агар с добавлением сыворотки 5% и глюкозы; 2) агар, приготовленный на картофельном настое, с добавлением 5% сыворотки; 3) кровяной агар; 4) мясо-пептонный бульон. ***Особенностью B.abortus является потребность её в повышенном содержании СО2. Очень характерен для бруцелл медленный рост, особенно в первых генерациях. Колонии бруцелл бесцветные, выпуклые и круглые – S-формы или шероховатые – R-формы, нежные и прозрачные в начале, с возрастом мутнеют. Рост бруцелл в бульонных средах сопровождается равномерным помутнением. Для роста необходимы тиамин, биотин, ниацин.

Бх.св-ва: Ферментируют глюкозу и арабинозу с образованием кислоты без газа, не образуют индола, восстанавливают нитраты в нитриты.

19. Эпидемиология бруцеллеза.

Бруцеллёз – зооноз. Основными носителями являются овцы, козы (B.melitensis), крупный рогатый скот (B.abortus) и свиньи (B.suis). Из всех видов наиболее патогенным для человека в нашей стране является B.melitensis. Человек заражается от животных, главным образом контактным или контактно-бытовым путём. Алиментарный способ наблюдается при употреблении непастеризованного молока от больных животных или молочных продуктов, приготовленных из него, а также воды.

Бруцеллы обладают относительно высокой устойчивостью во внешней среде. Они сохраняются во влажной почве и воде до 2-3, а при температуре 11- – до 4,5 месяцев; в непроточных водоёмах – до 3 месяцев; в молоке до 273 дней; в сыре – до 1 года; в кефире до 11 дней. Очень чувствительны к высокой температуре – при погибают через 10 минут, а при кипячении за несколько секунд. Также чувствительны к химическим дезинфектантам.

20. Почему бруцеллез – особо опасная инфекция?

● Прежде всего возбудитель проникает в лимфоузлы и там размножается, локализуясь внутриклеточно. В лимфатических узлах создаётся резервуар возбудителя, устойчивый к действию защитных факторов (фагоцитоз) → длительное сохранение.

● Генерализация: распространение лимфогенным и гематогенным путём по организму → поражение других лимфоузлов и других органов и тканей (селезёнка, костный мозг).

● Позже болезнь переходит в хрониосепсис – периодическое поступление микроорганизмов в кровь из лимфоузлов, содержащих их резервуар, → разрушение микроорганизмов → выделение эндотоксина → подъём температуры.

● С первых дней болезни возникает реакция ГЧЗТ (т.к. липополисахарид клеточной стенки и белки оказывают выраженное сенсибилизирующее действие), которая сохраняется в течение всей болезни и длительное время после выздоровления. В поражённых тканях формируются гранулёмы (первые – к 20 дням от начала болезни). Гранулёмы возникают по механизму, сходному с таковым у гранулём туберкулёза (но нет специфического некроза).

Бруцеллёз – хроническая гранулёматозная инфекция, склонная к формированию хрониосепсиса.

21. Патогенез бруцеллеза.

Инкубационный период от 1 недели до нескольких месяцев. Входными воротами инфекции являются кожа и слизистые оболочки полости рта, носа, глаза (заносятся грязными руками). По лимфатическим путям возбудитель попадает в лимфатические узлы; размножаясь, образует «первичный бруцеллёзный комплекс». Из лимфатических узлов возбудитель проникает в кровь и распространяется по всему организму, избирательно поражая ткани лимфо-гемопэтической системы. Бактериемия и генерализация процесса приводят к сильнойаллергизации организма. Бруцеллёз протекает как хрониосепсис. Это обусловлено незавершённым характером фагоцитоза. Бруцеллы могут превращаться внутри клеток в L-формы и в таком виде длительно персистировать в организме, а возвращаясь в исходную форму, вызывать рецидив болезни.

Чаще всего страдают лимфатическая, сосудистая, нервная и особенно опорно-двигательная системы. Бруцеллёзу свойственно длительное течение (иногда до 10 месяцев). Болезнь, как правило, заканчивается полным выздоровлением.

22. Микробиологическая диагностика бруцеллеза.

23. Методы мб диагностики бруцеллеза.

• К биологической пробе ( заражение морских свинок) прибегают в том случае, если материал сильно загрязнён посторонней микрофлорой и получить непосредственно из него чистую культуру возбудителя трудно. (Вводится морской свинке по 1.0 подкожно в паховую обл. Через 30 дней: Проба Бюрне, р-ия Райта, посев материала из органов и лимфатических узлов на питатетльные среды для выделения чистой культуры)

• Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

А. Для обнаружения антител

1. Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах - МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2. Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3. Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

5. Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).

6. Реакция связывания комплемента.

7. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.

Б. Для обнаружения антигена

1. Реакция агрегат-гемагглютинации.

2. Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

3. РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.

4. Реакция коагглютинации.

Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.

• Аллергический - проба Бюрне

• Бактериологический.

От больного человека - кровь, костный мозг , моча (печеночный бульон + антифаговая сыворотка)

От больного животного - абортивный плод, околоплодная жидкость, кусочки некротизированной плаценты, моча, молоко, мясо (печеночный агар и бульон+ антифаговая сыворотка+ генциа-виолет)

Печеночный МПА + антифаговая сыворотка:

1)Биохимические тесты( активность уреазы, образование сероводорода. При необходимости др тесты.

2)Р-ия агглютинации со спец. сывороткой

3) Изучение отношения к Тбилиотическому бруцеллезному фагу

4)Изучение роста на средах с красителями

24. Серодиагностика бруцеллеза.

См. 23

25. Преимущества реакции Кумбса при серодиагностике бруцеллеза.

При помощи р-ии прямой и пассивной агглютинации определяют полные ( бивалентные) антитела. Неполные ( моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами , так как, соединяясь с антигеном , блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигены в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют спец. р-июКумбса. В р-ии участвуют : а)сыворотка больного в которой преобладают неполные антитела, б)антиген-диагностикум, в)антиглобулиновая сыворотка- антитела к человеческому глобулину.

Реакция протекает в 2 этапа:

1)взаимодействие антигена с неполными антителами

2)взаимодействие антиглобулиновой сыворотки с антителами, адсорбированными на антигене.

В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают 2 одновалентных антитела, адсорбированных соотвественно на 2 антигенах , что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.

26. Серологические экспресс-реакции для диагностики бруцеллеза.

Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

27. Реакция Хеддльсона и реакция Райта, их сущность.

1. Реакция Хеддльсона: На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3x3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл, в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипет­кой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.

Оценка реакции: агглютинация только в первой капле – реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях – реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях – реакция резко положи­тельная.

Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только скрининговое, ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить более надежные серологические реакции (Райта, РПГА, ИФМ) и/или аллергическую пробу Бюрне.

Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.

2. Реакция Райта(ставится по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 16). Диагностический титр реакции Райта - 1:200): Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза. Отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки - реакция "отрицательная". Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости. Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза