116. Микробиологическая диагностика коклюша.

1. Бактериологический (на ранних стадиях заболевания)

2. Серологический (на поздних стадиях заболевания) – реакция агглютинации и РСК.

3. Молекулярно-генетический – ПЦР.

См в тетради

117. Специфическая профилактика коклюша, препараты.

Для плановой профилактики коклюша у детей используют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину (АКДС). На этом же компоненте основана выпускаемая отдельно убитая коклюшная вакцина, применяемая в детских коллективах по эпидемиологическим показаниям. Этот ком­понент реактогенен (нейротоксическое свойство), поэтому сейчас активно изучаются бесклеточные вакцины, содержащие от 2 до 5 компонентов (коклюшный анатоксин, филаментозный гемагглютинин, пертактин и 2 агглютиногена фимбрий). Для лечения применяют антибиотики (гентамицин, ампициллин), эффективные в ка­таральном и бесполезные в судорожном периоде заболевания.

Адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС). Состав: смесь убитых мертиолятом коклюшных микробов и очищенных и концентрированных дифтерийного и столбнячного анатоксинов, адсорбированных на гидроокиси алюминия. Назначение: для профилактики коклюша, дифтерии и столбняка у детей с 5-6-месячного возраста до 6 лет. Способ применения: внутримышечно.

118. Морфологические и тинкториальные особенности туберкулезной палочки.

Морфологические свойства.

М. tuberculosis имеет форму тонких, стройных, коротких или длинных, прямых или искривленных палочек, длиной 1,0-4,0 мкм и диаметром 0,3-0,6 мкм. Непо­движны, спор и капсул не образуют. В старых культурах наблюдаются нитевидные, ветвящиеся формы, не­редко зернистые формы (зерна Муха), как в виде свободно лежащих зерен, так и в виде зерен, содержащихся внутриклеточно. В организме больных под влиянием химиопрепаратов часто образуются ультрамалые формы, способные проходить через мелкопористые бактериальные фильтры («фильтрующиеся формы»).

Многие биологические свойства микобактерий объясняются высоким содержа­нием липидов, составляющих до 40 % сухого остатка клеток. Обнаружены три фрак­ции липидов: фосфатидная (растворимая в эфире), жировая (растворимая в эфире и ацетоне) и восковая (растворимая в эфире и хлороформе). В составе липидов имеются различные кислотоустойчивые жирные кислоты, в том числе туберкуло-стеариновая, фтиоидная, миколовая и др. Высокое содержание липидов определяет следующие свойства туберкулезных палочек:

1. Устойчивость к кислотам, щелочам и спирту.

2. Трудная окрашиваемость красителями.

3. Относительно высокая устойчивость к высушиванию и действию солнечных лучей.

4. Устойчивость к действию обычных дезинфицирующих веществ.

5. Высокая гидрофобность, которая находит свое отражение в культуральных свойствах.

6. С высоким содержанием липидов связана и патогенность туберкулезных бак­терий.

Тинкториальные свойства.

Грамположительны. Для их окрашивания применяют интенсивные методы. Например, по способу Циля-Нильсена окрашивают кон­центрированным раствором карболового фуксина при подогревании. Восприняв окраску, туберкулезные бактерии, в отличие от других клеток, не обесцвечиваются ни спиртом, ни кислотой, ни щелочью, поэтому при докрашивании метиленовым синим в мазке все бактерии, клеточные элементы и слизь окрашиваются в синий цвет, а туберкулезные палочки сохраняют исходную красную окраску. Этот метод позволяет дифференцировать их от некоторых непатоген­ных микобактерий, например М.smegmatis, содержащихся на слизистой оболочке уретры, но обесцвечивающихся спиртом. Вместе с тем необходимо иметь в виду, что встречаются и кислотоподатливые («синие» при окрашивании по Цилю-Нильсену) формы туберкулезных бактерий (в том числе палочковидные, нитевид­ные и зернистые).

По способности к пигментообразованию микобактерии также делят на 3 группы:

1. Фотохромогенные – образуют пигмент лимонно-желтого цвета при росте на свету.

2. Скотохромогенные – образуют пигмент оранжево-желтого цвета при инкуби­ровании в темноте.

3. Нефотохромогенные – пигмента не образуют (независимо от наличия света), иногда культуры имеют светло-желтоватую окраску.

114. Факторы патогенности коклюшной палочки.

• Фимбрии (агглютиногны), белок наружной мембраны пертактин (69кД) и филаментозный гемагглютинин (поверхностный белок) отвечают за адгезию возбудителя на цилиарном эпителии средних отделов респираторного тракта (трахея, бронхи).

• Капсула защищает от фагоцитоза. Часто присутствуют гиалуронидаза, лецитиназа, плазмокоагуляция, аденилатциклаза.

• В составе эндотоксина (ЛПС) два липида: А и Х. Биологическая активность ЛПС определяется липидом Х, липид А обладает низкой пирогенностью и нетоксичен. ЛПС обладает иммуногенностью (цельноклеточная вакцина), но вызывает сенсабилизацию.

• Имеются три экзотоксина. Коклюшный токсин (117кД) по структуре и функции подобен холерогену, проявляет активность АДФ-рибозилтрансферазы (риболизирует трансдуцин – белок мембраны клетки-мишени, являющейся частью системы, ингибирующей аенилатциклазу), сильный иммуноген, повышает лимфоцитоз и выработку инсулина. Трахеальный цитотоксин представляет собой фрагмент пептидогликана, обладает пирогенностью, артритогенностью, индуцирует медленноволновой сон и стимулирует продукцию ИЛ-1, в ответ на который синтезируется оксид азота (цитотоксический фактор). Повреждает эпителиальные клетки трахеи и вызывает цилиостаз. Термолабильный дермонекротоксин обладает нейротропностью, сосудосуживающей активностью, гомологичен цитотоксическому некротизирующему фактору 1 (CNF1) кишечной палочки. Мишенью его являются Rho-белки мембран клеток. Обнаруживают дерматотоксин внутрикожной пробой на кроликах (проба Дольда)

115. Эпидемиология и патогенез коклюша.

Эпидемиология инфекции.

Источник инфекции при коклюше и паракоклюше – больной типичной или стертой формой, особенно в период до появления спазматического кашля. При коклюшеподобном заболевании, вызванном В.bronchiseptica, источни­ком инфекции могут быть домашние и дикие животные, среди которых иногда на­блюдаются эпизоотии (свиньи, кролики, собаки, кошки, крысы, морские свинки, обезьяны), при этом чаще всего у животного поражается респираторный тракт. Ме­ханизм заражения – воздушно-капельный. Бордетеллы обладают специфическим тропизмом к цилиарному эпителию респираторного тракта хозяина.

Патогенез инфекции.

Инкубационный период при коклюше от 3 до 14 дней, чаще 5—8 дней. Возбудитель, попавший на слизистую оболочку верхних дыхательных путей, размножается в клетках цилиарного эпителия и далее бронхогенным путем распростра­няется в более низкие отделы (бронхиолы, альвеолы, мелкие бронхи). При действии эк­зотоксина эпителий слизистой оболочки некротизируется, в результате чего раздража­ются кашлевые рецепторы и создается постоянный поток сигналов в кашлевой центр продолговатого мозга, в котором формируется стойкий очаг возбуждения. Это приводит к возникновению спазматических приступов кашля. Бактериемии при коклюше не бы­вает. Вторичная бактериальная флора может приводить к осложнениям.

В течении заболевания выделяют следующие стадии:

1) Катаральный период, длящийся около 2 недель и сопровождающийся сухим кашлем. Состояние больного по­степенно ухудшается.

2) Конвульсивный (судорожный), или спазматический, период, длящийся до 4—6 недель и характеризующийся возникающими до 20—30 раз в сутки приступами неукротимого «лающего» кашля, причем приступы могут быть спрово­цированы даже неспецифическими раздражителями (свет, звук, запах, медицинские манипуляции, осмотр и т. д.).

3) Период разрешения, когда приступы кашля стано­вятся реже и все менее продолжительными, отторгаются некротизированные участ­ки слизистой оболочки верхних дыхательных путей, часто в виде «слепков» с трахеи и бронхов. Продолжительность — 2—4 недели

111. Методы определения токсигенности дифтерийной палочки.

Для обнаружения токсигенности дифтерийных бактерий можно использовать следующие способы:

1. Биологические пробы на животных. Внутрикожное заражение морских свинок фильтратом бульонной культуры дифтерийных бактерий вызывает у них некроз в месте введения.

2. Заражение куриных эмбрионов. Дифтерийный токсин вызывает их гибель.

3. Заражение культур клеток. Дифтерийный токсин вызывает отчетливый цитопатический эффект.

4. Метод твердофазного иммуноферментного анализа с использованием мечен­ных пероксидазой антитоксинов.

5. Использование ДНК-зонда для непосредственного обнаружения Юх-оперона в хромосоме дифтерийных бактерий.

Однако наиболее простым и распространенным способом определения токсиген­ности дифтерийных бактерий является серологический – метод преципитации в геле. Суть его состоит в следующем. Полоску стерильной фильтровальной бумаги разме­ром 1,5 х 8 см смачивают антитоксической противодифтерийной сывороткой, со­держащей 500 АЕ в 1 мл, и наносят на поверхность питательной среды в чашке Пет­ри. Чашку подсушивают в термостате 15—20 мин. Испытуемые культуры засевают бляшками по обе стороны от бумажки. На одну чашку засевают несколько штаммов, один из которых, заведомо токсигенный, служит контролем. Чашки с посевами ин­кубируют при 37 °С, результаты учитывают через 24—48 ч. Вследствие встречной диффузии в геле антитоксина и токсина в месте их взаимодействия образуется чет­кая линия преципитации, которая сливается с линией преципитации контрольного токсигенного штамма. Полоски неспецифической преципитации (они образуются, если в сыворотке кроме антитоксина присутствуют в небольшом количестве другие антимикробные антитела) появляются поздно, выражены слабо и никогда не сливаются с полоской преципитации контрольного штамма.

112. Специфическая профилактика и лечение дифтерии, препараты.

Специфическим средством лечения дифтерии является применение противодифтерийной антитоксической сыворотки, содержащей не менее 2000 МЕ в 1 мл. Сыворотку вводят внутримышечно в дозах 10000 до 400000 МЕ в зависимости от тяжести течения болезни. Эффективным методом лечения является применение антибиотиков (пенициллины, тетрациклины, эритромицин и др.) и сульфамидных препаратов. С целью стимулирования выработки собственных антитоксинов можно использовать анатоксин. Для освобождения от бактерионосительства следует использовать те антибиотики, к которым данный штамм коринебактерий высокочувствителен.

Основным методом борьбы с дифтерией является массовая плановая вакцинация населения. С этой целью используют раз­личные варианты вакцин, в том числе комбинированные, т. е. направленные на од­новременное создание иммунитета против нескольких возбудителей. Наибольшее распространение в России получила вакцина АКДС.

Адсорбированный дифтерийный анатоксин. Состав: очищенный и концентрированный дифтерийный анатоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия. Назначение: для профилактики дифтерии у детей с 5-6-месечного возраста. Способ применения: внутримышечно или подкожно.

Противодифтерийная сыворотка. Состав: очищенная и концентрированная методом Диаферм-3 сыворотка лошадей, гипериммунизированных дифтерийным анатоксином. Назначение: для лечения и профилактики. Способ применения: внутримышечно.

Очищенный дифтерийный токсин для реакции Шика. Состав: очищенный и концентрированный дифтерийный токсин. Назначение: для выявления невосприимчивости к дифтерии у детей. Способ применения: внутрикожно в среднюю часть ладонной поверхности предплечья.

119. Классификации микобактерий по скорости роста и пигментообразованию.

По скорости роста род Micobacterium подразделяются на 3 группы:

1. Быстрорастущие – крупные видимые колонии появляются ранее 7-го дня инкубации (18 видов)

2. Медленнорастущие – крупные видимые колонии появляются после 7-ми и более дней инкубации (20 видов)

3. Микобактерии, которые требуют специальных условий для роста или не растут на искусственных питательных средах. К этой группе относятся 2 вида: M. Leprae и M.lepraemureum

Дифференциация видов микобактерий среди быстро- и медленнорастущих проводится с учетом ряда их биохимических признаков: восстановление нитратов, тллурита; наличие каталазы, уреазы, никотин- и пиразинамидазы, способность синтезировать ниацин; а также пигментобразование

По способности к пигментообразованию микобактерии также делятся на 3 группы:

1. Фотохромогенные – образуют пигмент лимонно-желтого цвета при росте на свету.

2. Скотохромогенные – образуют пигмент оранжево-желтого цвета при инкубировании в темноте

3. Нефотохромогенные – пигмента не образуют (независимо от наличия света) иногда культуры имеют светло-желтоватую окраску.

120. Факторы патогенности туберкулезной палочки.

Патогенность туберкулезных бак­терий связана с высоким содержанием липидов. Содержащиеся в липидах фтиоидная, миколовая и другие жирные кислоты оказывают своеобразное токсическое действие на клетки тканей. Например, фосфа­тидная фракция, наиболее активная из всех липидов, обладает способностью вызы­вать в нормальном организме специфическую тканевую реакцию с образованием эпителиоидных клеток, жировая фракция – туберкулоидной ткани. Эти свойства указанных липидных фракций связаны с наличием в их составе фтиоидной кислоты. Восковая фракция, содержащая миколовую кислоту, вызывает реакции с образова­нием многочисленных гигантских клеток. Таким образом, с липидами, состоящими из нейтральных жиров, восков, стеринов, фосфатидов, сульфатидов и содержащими такие жирные кислоты, как фтиоидная, миколовая, туберкуло-стеариновая, пальми­тиновая и другие, связаны патогенные свойства туберкулезной палочки и те биологиче­ские реакции, которыми ткани отвечают на их внедрение. Главным фактором патогенности является токсический гликолипид (корд-фактор), который располагается на поверхности и в толще клеточной стенки. По химической природе он представля­ет собой полимер, состоящий из одной молекулы дисахарида трегалозы и связанных с ней в эквивалентных соотношениях миколовой и миколиновой высокомолекуляр­ных жирных кислот – трегалоза-6,6'-димиколат (С₁₈₆Н₃₆₆О_ш). Корд-фактор не только оказывает токсическое действие на ткани, но и защищает туберкулезные па­лочки от фагоцитоза, блокируя окислительное фосфорилирование в митохондриях макрофагов. Будучи поглощенными фагоцитами, они размножаются в них и вызы­вают их гибель. Корд-фактор обладает двумя характерными свойствами, указываю­щими на его важную роль как основного фактора патогенности.

1. При внутрибрюшинном заражении белых мышей он вызывает их гибель. Подобным действи­ем не обладает ни одна другая фракция туберкулезной палочки.

2. Он подавляет миграцию лейкоцитов больного туберкулезом человека (in vivo и in vitro).

М. tuberculosis, лишенные корд-фактора, являются непатогенными или слабопа­тогенными для человека и морских свинок. С необычным химическим составом туберкулезных клеток связана также способность их вызывать характерную для туберкулеза реакцию гиперчувствительности замедленного типа, выявляемую с по­мощью туберкулиновой пробы.