Итоговое контрольное занятие «оои, капельные инфекции, гноеродные кокки»

1. Особенности организации работы баклаборатории особо опасных инфекций.

Микробиологические лаборатории организуются при больницах и санитарно-эпидемиологических станциях (СЭС). Существуют также специальные лаборатории, в которых работают с возбудителями особо опасных инфекций, вирусологические лаборатории и др. Микробиологические лаборатории занимаются бактериологической диагностикой инфекционных заболеваний, исследуя испражнения, мочу, кровь, мокроту больных с целью обнаружения патогенных микроорганизмов — возбудителей заболевания. Помимо этого, в микробиологических лабораториях проводят санитарно-бактериологические исследования воды, воздуха, смывов с окружающих предметов, рук, пищевых продуктов для обнаружения санитарно-показательных микроорганизмов, указывающих на загрязнение патогенными микробами. При необходимости в объектах внешней среды определяют наличие патогенных микробов.

В связи с тем что в микробиологических лабораториях работают с заразным материалом, помещение их должно быть изолировано от других больничных помещений, пищеблоков, жилых комнат. В состав лаборатории входят:

1) лабораторные комнаты для проведения микробиологических исследований;

2) моечная;

3) препараторская для подготовки лабораторной посуды, приготовления питательных сред и других вспомогательных работ;

4) автоклавная;

5) комната, где производят прием материала и выдачу результатов исследования. Лабораторных животных, необходимых для постановки биологических проб, содержат в специальном изолированном помещении — виварии. В лабораториях, где объем работ невелик, можно объединить моечную и препараторскую, исключить комнату для приема анализов и т. д.

Помещение, где проводится подготовка медицинских работников по индикации и лабораторной диагностике ООИ, должно обеспечивать возможность соблюдения режима работы с возбудителями особо опасных инфекций; как минимум, иметь место для снятия личной одежды и надевания спецодежды (санпропускник), комнату для проведения практических занятий, комнату для чтения лекций , комнату для подготовки всего необходимого для обеспечения практических занятий с боксом для разливки питательных сред и помещение для работы с зараженными животными.

Персонал во время работы должен строго соблюдать следующие правила:

1) находиться в лаборатории можно только в специальном халате и шапочке;

2) в лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, хранить там продукты, принимать пищу;

3) исследуемый материал поступающий в лабораторию, рассматривается как заразный; его ставят на специальный поднос и обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором;

4) во время работы необходимо соблюдать осторожность, следить за чистотой рук, применять технические приемы, исключающие контакт с заразным материалом;

5) исследуемый материал, отработанные культуры подлежат уничтожению;

6) по окончании работы руки, инструменты, рабочее место обрабатывают дезинфицирующим раствором. Культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят в холодильник или сейф и опечатывают.

Уборка помещений лаборатории. Уборку проводят ежедневно до и после работы влажным способом с применением дезинфицирующих средств. Пол протирают 2— 5% раствором карболовой кислоты или хлорамина. Стены, инвентарь и полы один раз в неделю моют горячей водой с мылом. Бокс убирают в конце рабочего дня, а утром перед работой облучают бактерицидными лампами.

2. Какие признаки (критерии) характерны для особо опасных инфекций?

К категории ООИ бактериальной природы относятся чума, туляремия, бруцеллез, сибирская язва, сап и холера. Первые 5 болезней – зооантропонозы, а холерой болеют только люди.

1. Обладают высокой заразительностью (к чуме, туляремии, бруцеллезу восприимчивы все люди).

2. Способны вызывать не только эпидемии, но и пандемии (чума, холера).

3. Вызывают тяжело протекающие заболевания.

3. Аллергены для диагностики особо опасных инфекций.

1. Диагностика чумы. Внутрикожная аллергическая проба с пестином. Реакция считается положительной, если на месте введения пестина через 24—48 ч образуется уплотнение не менее 10 мм в диаметре и появляется краснота. Аллергическая проба положительна и у лиц, имеющих постинфекционный иммунитет.

2. Диагностика туляремии. Аллергические диагностические пробы при туляремии предложили Л. М. Хатеневер и др. Тулярин. Состав: взвесь убитых нагреванием туляремийных бактерий вакцинного штамма в физиологическом растворе, содержащем 3% глицерина. Назначение: диагностика туляремии и проверка иммунитета после прививки и перенесённого заболевания. Способ применения: при накожной пробе каплю тулярина наносят на обработанную кожу наружной поверхности левого плеча в средней трети и стерильным оспопрививательным пером делают две параллельные насечки, а затем втирают тулярин и дают подсохнуть. Реакцию считают положительной при наличии вдоль насечек ясного покраснения и валика отёчности.Учитывают реакцию через 24—48 час. Реакция специфическая и появляется с 5-го. дня заболевания. Как и проба с бруцеллином, проба с тулярином может быть положительной длительное время после заболевания. Отрицательный ответ не исключает инфекции.

3. Диагностика бруцеллеза. Аллергическая диагностика при бруцеллезе была предложена Бюрне (Е. Burnet). В качестве аллергена используют бруцеллин .Бруцеллин. Состав: 0,1% раствор полисахаридно-белкового комплекса из вакцинного штамма 19-ВА. Назначение: для диагностики и определения иммунитета у иммунизированных людей аллергической пробой Бюрне. Способ применения: строго внутрикожно в ладонную поверхность предплечья вводят препарат. Реакция положительна при наличии красноты и отёчности диаметром 4-6 см.Учет проводят через 24 часа. Положительная реакция появляется через 6—8 час.Положительный результат наблюдают с 8—9-го дня заболевания и длительное время после выздоровления. Отрицательный ответ, указывающий на отсутствие аллергии, не исключает заболевания.

4. Диагностика сибирской язвы. Антраксин применяется для лечения и профилактики сибирской язвы. Состав: белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, полученный путем гидролиза вегетативных форм вакцинного штамма сибиреязвенной палочки. Способ применения: внутрикожно на внутренней поверхности предплечья. В кожу другого предплечья для контроля другим шприцем вводят физиологический раствор. Положительной считают воспалительную реакцию с инфильтратом диаметром более 8 мм.

4. Значение реакции иммунофлуоресценции в диагностике оои.

Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики.

В практике применяются два варианта РИФ: прямой и непрямой. В первом случае применяются меченные красителем антитела к вирусам, которые наносятся на инфицированные клетки (мазок, культура клеток). Таким образом, реакция протекает одноэтапно. Неудобством метода является необходимость иметь большой набор конъюгированных специфических сывороток ко многим вирусам.

При непрямом варианте РИФ на исследуемый материал наносится специфическая сыворотка, антитела которой связываются с вирусным антигеном, находящимся в материале, а затем наслаивается антивидовая сыворотка к гамма-глобулинам животного, в котором готовилась специфическая иммунная сыворотка, например антикроличья, антилошадиная и т. п. Преимущество непрямого варианта РИФ состоит в потребности лишь одного вида меченых антител.

Метод РИФ широко применяется для быстрой расшифровки этиологии острых респираторных вирусных инфекций при анализе мазков-отпечатков со слизистой оболочки верхних дыхательных путей [2, 3]. Успешное применение РИФ для прямой детекции вируса в клиническом материале возможно лишь в случае содержания в нем достаточно большого числа инфицированных клеток и незначительной контаминации микроорганизмами, которые могут давать неспецифическое свечение.

5. Морфологические и тинкториальные особенности возбудителя чумы.

Морфологические свойства: Y.pestis имеет длину 1-2 мкм и толщину 0,3-0,7 мкм. В мазках из организма больного и из трупов, погибших от чумы людей и грызунов, выглядит как короткая овоидная палочка с биполярной окраской. В мазках из бульонной культуры палочка располагается цепочкой, в мазках из агаровых культур – беспорядочно. Спор не образует, жгутиков не имеет. При температуре 37^о образует нежную капсулу белковой природы.

Тинкториальные свойства: Грамотрицательны, лучше красится щелочными и карболовыми красителями (синькой Леффлера)

6. Культуральные свойства возбудителя чумы.

Палочка чумы даёт характерный рост на жидких и плотных питательных средах:

• На бульоне он проявляется образованием рыхлой плёнки, от которой спускаются нити в виде сосулек, напоминающих сталактиты, на дне – рыхлый осадок, бульон остаётся прозрачным.

• Развитие колоний на плотных питательных средах проходит через три стадии: через 10-12 ч под микроскопом рост в виде бесцветных пластинок (стадия «битого стекла»); через 18-24 ч - стадия «кружевных платочков», при микроскопии заметна светлая кружевная зона вокруг центральной части желтоватой или слегка буроватой окраски. Через 40-48 ч наступает стадия «взрослой колонии» - буровато-очерченный центр с выраженной периферической зоной. Стимуляторы роста: сульфит натрия, кровь (или её препараты) или лизат культуры сарцины.

7. Подвиды Yersinia pestis.

Род Yersinia относится к семейству Enterobacteriaceae и включает 11 видов, из них патогенными для человека являются три: Y.pestis, Y.pseudotuberculosis, Y.enterocolitica.

Отечественная классификация вида Yersinia pestis (Саратов, 1985)

• Y. pestis subsp. pestis - основной подвид

• Y. pestis subsp. altaica- алтайский подвид

• Y. pestis subsp. caucasica- кавказский подвид

• Y. pestis subsp. hissarica- гиссарский подвид

• Y. pestis subsp. ulegeica- улэгейский подвид

8. Главные факторы патогенности возбудителя чумы

1. Способность клеток сорбировать эндогенные красители и гемин.

2. Зависимость роста при температуре 37^о от наличия в среде ионов кальция.

3. Синтез V-W-антигенов. W расположен в наружной мембране, а V в цитоплазме. Эти антигены обеспечивают размножение Y.pestis внутри макрофагов.

4. Синтез «мышиного» токсина. Токсин блокирует перенос электронов в митохондриях сердца и печени, поражает тромбоциты и сосуды и нарушает из функцию.

5. Синтез капсулы (фракции I). Капсула угнетает активность макрофагов.

6. Синтез плазмокоагулазы. Оба белка обеспечивают высокие инвазивные свойства.

7. Синтез термоиндуцибельных белков наружной мембраны – Yop-белков. Белки YopA, YopD, YopE, YopH, YopK, YopM, YopN подавляют активность фагоцитов.

8. Синтез нейраминидазы. Она способствует адгезии.

9. Синтез аденилатциклазы. Она подавляет «окислительный взрыв».

10. Синтез пилей адгезии. Она угнетает фагоцитоз и обеспечивает внедрение.

11. Эндотоксин (ЛПС).

12. pH6-антиген. Подавляет фагоцитоз и обладает цитотоксическим действием на макрофаги.

9. Плазмиды и факторы патогенности возбудителя чумы.

Контроль наиболее важных факторов патогенности возбудителя чу­мы осуществляется плазмидами, на которых локализованы гены вирулентности. Известны три плазмиды, контролирующие важнейшие факто­ры патогенности возбудителя: рYР (м.м.6 МД); рYТ (м.м. 60 МД) и рYV (м.м. 47 МД).

Плазмида рYР (6 МД) несет гены, определяющие синтез пестицина. фибринолизина и плазмокоагулазы.

Плазмида рYТ (60 МД) несет детерминанты, контролирующие синтез антигена фракции I и "мышиного" токсина.

Плазмида рYV (47 МД) ответственна за синтез антигенов v и w и термоиндуцибельных белков внешней мембраны, а также зависимость роста чумной палочки от наличия в среде ионов Са⁺⁺.

10. Эпидемиология чумы.

Чума – типичный зооантропоноз, основной источник чумы в природе – грызуны и зайцеобразные, а также блохи. Заражение человека происходит через укус блох, при прямом контакте с заразным материалом, воздушно-капельным, редко алиментарным путём (мясо верблюдов, больных чумой). В мокроте палочка чумы может сохраняться до 10 дней; на белье и одежде, испачканными выделениями больного, сохраняется неделями. В трупах людей и животных выживает с начала осени до зимы; низкая температура, замораживание и оттаивание не убивают её. Солнце, высокая температура и высыхание губительны для чумной палочки. 70%-й Спирт, 5% раствор фенола и 5% раствор лизола убивают за 5-20 минут.

11. Пути и способы заражения человека чумой.

Через укус блох,при прямом контакте с заразным материалом,воздушно-капельным, редко алиментарным.

Инкубационный период от нескольких часов до 9 суток. Возбудитель проникает через мельчайшие повреждения кожи, иногда через слизистую оболочку или воздушно-капельным путём, достигает регионарных лимфатических узлов, в которых начинает бурно размножаться.

12. Основные клинические формы чумы, материал для мб диагностики.

В зависимости от способа заражения различают:

• бубонную,

• легочную,

• кишечную форму чумы,

• редко септическую и кожную( гнойные пузырьки на месте укуса блохи)

Материалом для исследования служат: пунктат из бубона( или его отделяемое), мокрота, кровь, при кишечной форме- испражнения.

13. В каких случаях ставится аллергическая проба с пестином?

Ставится для ретроспективной диагностики. Реакция считается положительной, если на месте введения пестина через 24-48 ч образовалось уплотнение не менее 10мм в диаметре и появляется краснота. Она положительна так же и у лиц, имеющих постинфекционный иммунитет.

Аллергический метод: с помощью этого метода обнаруживают повышенную чувствительность макроорганизма к определенным возбудителям инфекционных заболеваний или продуктам их жизнедеятельности. Используются препараты-аллергены.

14. Характеристика иерсиний, патогенных для человека, отличия от палочки чумы.

Иерсинии -возбудители псевдотуберкулеза ( Y.pseudotuberculosis) и кишечного иерсиниоза ( Y. Enterocolitica)

Эти два вида не относятся к категории особо опасных, но играют значительную роль в патологии чел. Представляют собой полиморфные, не образующие спор грамотрицательные палочки, имеющие часто овоидную форму. Обладают подвижностью из-за наличия перитрихиальных жгутиков( отличие от Y.pestis) -выявляется посевом в столбик полужидкого агара уколом, но только при 18-20С*, при 37С* она отсут. На среде Эндо через сутки колонии им диаметр 0,1-0,2мм, круглые, выпуклые, блестящие, с ровными краями, бесцветны( не фермент лактозу), через несколько суток размер колоний 0,5-3мм.

Основные различия между возбудителями чумы,

псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза