свойствами в отношении большого числа микроорганизмов. Спороносные бактерии можно поставить в один ряд с лучистыми грибками, пенициллами и аспергиллами, представляющими собой основные источники получения антибиотических веществ.
Подавляющее большинство антибиотиков бактериального происхождения выделено из группы спорообразующих бактерий. Первый антибиотический препарат - грамицидин - выделен из культуры спороносной бактерии. Советскими учеными был получен антибиотик грамицидин С,
который успешно используется при лечении многих инфекций. Из различных видов бацилл получены антибиотики альвеин, бациллин, бацитрацин,
лихениформин, субтилин, циркулин и др. Особый интерес вызвало открытие полимиксинов - антибиотиков бациллярного происхождения, которые оказались высокоактивными против грамотрицательных бактерий. В ряде стран организовано промышленное производство отдельных препаратов антибиотиков: полимиксина В, колистина, бацитрацина.
Кроме терапевтического использования, бацитрацин применяется в качестве стимулятора роста животных.
В настоящее время из различных видов спорообразующих бактерий выделено более 60 антибиотиков, из которых некоторые были испытаны в клинической практике. Однако антибиотики, полученные из спорообразующих бактерий, изучены недостаточно.
За некоторыми исключениями, антибиотики из спорообразующих бактерий представляют собой вещества белковой природы - полипептиды. Они состоят из различных аминокислот, причем наиболее характерным является то, что в состав полипептидных антибиотиков входят неестественные аминокислоты с правой оптической конфигурацией. Некоторые антибиотики полипептидной природы имеют сравнительно более простой состав и несложную формулу,
представляя весьма удобную модель для изучения строения белка. С другой стороны, полипептидные антибиотики привлекают большой интерес биохимиков, так как эти вещества могут быть использованы при изучении
41
одной из центральных проблем современной биологии - выяснении причин,
обусловливающих специфичность биологически активного белка.
По механизму действия продуцируемые спорообразующими бактериями антибиотики разделяются на три группы. Группа эдеинов, представляющих собой пептиды с сильно основными свойствами, специфически подавляет синтез ДНК. Группа бацитрацинов и родственных им антибиотиков представляет собой циклические пептиды, которые угнетают синтез оболочки клеток. В обширную группу бациллярных антибиотиков включают грамицидины, полимиксины и родственные им соединения, которые специфически блокируют синтез структурных компонентов или функцию клеточной мембраны. Характерной особенностью этих антибиотиков является то, что они образуются после активного размножения бактерий в процессе спорообразования. Результаты генетических исследований свидетельствуют,
что биосинтез бациллярных антибиотиков тесно связан с образованием протеазы, характерной для процессов спорообразования. Поэтому синтез антибиотиков отражает особенности биохимической дифференциации клеток спорообразующих бактерий (http://molbiol.ru/wiki).
3.1 Спектр активности пробиотиков на основе спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus (Бакулина, 2001)
Действие |
|
Процессы, обеспечивающие это действие |
|
||
|
|
|
|
|
|
Подавление роста патогенных и условно- |
|
Синтез |
веществ, |
обладающих |
|
патогенных микроорганизмов |
|
антибиотическими свойствами, снижение рН |
|||
|
|
среды, высокая конкурентная способность в |
|||
|
|
процессе размножения. |
|
|
|
|
|
|
|||
Нормализация пищеварения |
|
Синтез пектолитических, протеолитических |
|||
|
|
ферментов, липазы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Стимуляция неспецифической |
|
Стимуляция |
лимфоцитов, |
макрофагов, |
|
резистентности макроорганизма |
|
индукция эндогенного α− и - интерферона, |
|||
|
|
увеличение |
содержания |
гамма |
– |
|
|
глобулиновой фракции крови. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
42 |
|
|
|
|
Антитоксическое действие |
Дезинтеграция высокомолекулярных белков. |
|||
|
Способность связывать тяжелые металлы. |
|||
|
|
|
||
Антиаллергическое действие |
Расщепление |
аллергенов на биологически |
||
|
инертные субъединицы. |
|
||
|
|
|||
Восстановление эндогенной микрофлоры, |
Филогенетическая общность представителей |
|||
коррекция микробиоценоза |
нормальной симбионтной микрофлоры. |
|||
|
|
|
|
|
Синтез заменимых и незаменимых |
Экзоцеллюлярная |
продукция |
треонина |
|
аминокислот и витаминов |
глутаминовой кислоты, аланина, валина, |
|||
|
тирозина, гистидина, орнитина и др. |
|||
|
|
|
|
|
Выведение тяжелых металлов и |
Способность |
к |
повышенной |
сорбции |
радионуклидов |
тяжелых металлов и рдионуклидов в |
|||
|
сочетании с быстрой элиминацией. |
|
||
|
|
|||
Противоопухолевая и антиметастотическая |
Стимуляция естественных киллерных клеток |
|||
активность |
и Т-лимфоцитов, стимуляция макрофагов. |
|||
|
|
|
|
|
43
Глава 4 Получение накопительных культур и идентификация рода Bacillus
4.1 Традиционный подход к идентификации видов
Традиционный подход к идентификации видов Bacillus в значительной степени основывается на морфологии спор. Вид относят к одной из трех групп в зависимости от того, являются ли споры: I) овальными и того же диаметра,
что и спорангий; II) овальными, но большего диаметра, чем спорангий, что вызывает его «разбухание», или III) круглыми. Для правильной идентификации на основе такого разделения необходимо хорошо знать эти типы бактерий,
однако большую помощь могут оказать отличные микрофотографии.
К бактериям группы I относятся группа В. subtilis и некоторые другие,
часто встречающиеся бациллы. Существуют трудности с разграничением В. amyloliquefaciens и В. subtilis, но обычно их можно различить по признаку синтеза ДНКазы, а также по способности сбраживать лактозу и ксилозу. У В. amyloliquefaciens первый признак отсутствует, второй имеется, третий отсутствует, тогда как у В. subtilis характеристики противоположные (Priest et al, 1987). Однако наиболее надежным способом различения этих таксонов является гибридизация ДНК. Вид Bacillus megaterium считается гетерогенным,
но клетки В. megaterium sensustricto обычно можно отличить по их крупным размерам. Клетки В. cereus, В. anthracis, В. thuringiensis и В. mycoides трудно отличимы друг от друга и их ДНК действительно обнаруживают высокую степень гомологии. В. thuringiensis можно распознать по наличию параспорального тела, а В. mycoides - по ризоидному росту.
Группа II представляет собой гетерогенное собрание видов. Для Bacillus macerans и В. polymyxa характерно выделение газа в процессе сбраживания сахаров, а штаммы В. alvei, как правило, образуют подвижные колонии.
Распознавание B. circulans представляет определенные трудности, так как на основе данных по гомологии ДНК в пределах этого, таксона различают по крайней мере 10 групп. Попытки решить эту проблему привели к созданию
44
видов В. pabuli, В. lautus, В. amylolyticus и В. validus (Nakamura, 1984). В эту группу включены патогенные для насекомых В. larvae (вызывает американский гнилец медоносной пчелы), В. lentimorbus и В. popilliae (вызывает молочную болезнь личинок жука-навозника), которые не выживают при последовательных пересевах в питательном бульоне и не содержат каталазы.
Наконец, к этой группе относится гетерогенный таксон В. stearothermophilus
включающий, вероятно, по крайней мере три таксона в ранге вида (Sharp et al, 1980).
Для штаммов группы III характерна сферическая форма спор. Из бактерий этой группы наиболее распространенной является, вероятно, B. sphaericus, но опять-таки это название относят к бактериям, которые можно разделить по гомологии ДНК примерно на семь групп. Дифференцировать эти таксоны по фенотипическим признакам в настоящее время практически невозможно. Другие организмы, образующие сферические споры - это
психрофилы (цитир. Харвуд, 1992). |
|
|
|
||
В настоящее |
время |
используют |
определенный |
набор |
тестов для |
определения штаммов. |
|
|
|
|
|
Пример: |
|
|
|
|
|
Штамм №7, относится к роду Bacillus, грамположительные палочки |
|||||
(1.86×0.81 мкм), эллипсовидные споры |
при окраске по Граму имеют |
||||
грамотрицательную |
окраску |
(1.38×0.65), |
спорангий |
немного |
раздутый, |
расположение споры центральное. Аэробы, каталазоположительные. По идентификационной таблице предложенной Норрисом (Norris et al, 1981)
штамм №7 был отнесён к виду Bacillus pumilus, по признакам перечисленным в таблице ниже:
45