Иммуноферментный анализ основан на выявлении родоспецифического липополисахарида. Его преимуществом является возможность использования для скринингового обследования.
Серологический метод позволяет обнаружить антихламидийные антитела в крови. При острой инфекции диагностическое значение имеет обнаружение специфических хламидийных антител иммуноглобулинов класса М либо четырехкратное нарастание титров иммуноглобулинов класса G в динамике, через 2 нед. При интерпретации полученных данных нельзя утверждать об инфицированности хламидиозом лишь на основании наличия антихламидийных антител, также как и отрицательные результаты серологических тестов не исключают наличия текущей или перенесенной хламидийной инфекции.
Молекулярно-биологические методы, в частности метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), основан на выявлении хламидийной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в образцах путем гибридизации. Метод применяется как при исследовании цервикальных и уретральных мазков, так и осадка мочи.
Для правильной постановки диагноза урогенитального хламидиоза и контроля излеченности необходимо сочетание (не менее двух одновременно) различных методов лабораторной диагностики.
Внутриклеточное паразитирование хламидий обусловливает применение антибиотиков, способных проникать и накапливаться в пораженных клетках и блокировать внутриклеточный синтез белка. Данные свойства среди антибиотиков наилучшим образом сочетают макролиды. Длительное время основными средствами в лечении хламидиоза являлись препараты тетрациклинового ряда. Однако они требуют довольно длительного приема, что повышает риск появления тяжелых побочных явлений.
Во время беременности перечень препаратов ограничен. Единственным антибиотиком, который нашел широкое применение для лечения урогенитального хламидиоза во время беременности, был эритромицин. Как показывает многолетний опыт, эритромицин является доступным, достаточно эффективным и, с точки зрения перинатологии, безопасным препаратом. Но низкий индекс плацентарной проницаемости, а также противопоказание к приему в первом триместре беременности являются существенным недостатком при использовании его для лечения внутриутробной инфекции.
Лечение восходящего урогенитального хламидиоза является более длительным (не менее 10-14 дней); желательно определять чувствительность хламидий к антибиотикам в культуре клеток.
При выборе тактики лечения необходимо учитывать, что после приема антибиотиков пенициллинового ряда, дробных доз других антибиотиков хламидии принимают L-форму и становятся нечувствительными к любому виду терапии.
Установление излеченности от урогенитального хламидиоза должно учитывать метод диагностики, культуральное исследование, проведенное ранее 10-14 дней после окончания антибиотикотерапии, может дать ложноположительные результаты из-за возможного сохранения нежизнеспособных микроорганизмов или их остатков. Обнаружение хламидий после указанных сроков контроля требует назначения повторного курса противохламидийной терапии препаратами других групп, который не должен превышать 7-10 дней. Лечение хронического (рецидивирующего) хламидиоза короткими курсами с перерывами более физиологично, чем длительный непрерывный прием антибиотиков, заметно угнетающий иммунную реактивность организма, способствующий развитию дисбактериоза, кандидоза и других осложнений. Профилактика хламидийной инфекции существенно не отличается от профилактики других заболеваний, передающихся половым путем. Это прежде всего полное и своевременное излечение больных, ликвидация инфекции у бессимптомных носителей возбудителя, выявление и качественное обследование половых партнеров, проведение профилактического лечения, использование презервативов, санитарное просвещение населения.
5. Острые кишечные инфекции вирусной этиологии. Энтеровирусы. Микробиологическая диагностика полиомиелита. Лечение и профилактика
Группа кишечных инфекций характеризуется специфической локализацией и размножением возбудителя в желудочно-кишечном тракте и последующим выделением возбудителя с испражнениями. Ведущим клиническим синдромом является диарея. В новый организм возбудитель проникает с пищей, водой или грязными руками через рот. Таким образом, реализуется фекально-оральный механизм передачи. Возбудители кишечных инфекций относятся к бактериям (брюшной тиф, сальмонеллез, дизентерия), вирусам (вирусные гепатиты А и Е, ротовирусная, реовирусная, энтеровирусная инфекции) или простейшим (амебиаз, лямблиоз, криптоспоридиоз).
Семейство пикорнавирусов (pico - маленький, RNA - РНК) включает в себя наиболее просто организованные вирусы, многие и из которых патогенны для человека. Одним из представителей этого семейства является энтеровирус, который вызывают у людей нейроинфекции и заболевания различных органов и тканей.
Патогенными для человека являются вирусы полиомиелита, Коксаки группы А и В, ECHO, энтеровирусы серотипов 68-72 и вирус гепатита А.
Полагают, что энтеровирусы весьма интенсивно эволюционируют, о чем свидетельствует формирование новых типов возбудителей с необычной локализацией в организмеВсе энтеровирусы близки между собой по своей структуре, химическому составу, резистентности к физическим и химическим факторам и другим свойствам. Наиболее изученным из них является вирус полиомиелита.
Материалом для лабораторного микробиологического исследования являются: фекалии, отделяемое носоглотки, очень редко--- цереброспинальная жидкость, при летальных исходах головной и спинной мозг, мышцы, миндалины, лимфатические узлы, стенки кишечника.
Используют вирусологический, серологический и биологический методы.
Вирусологический метод заключается заражении исследуемым материалом культуры: клеток почек обезьян, почек эмбриона человека, и др. Индикацию вируса проводят по ЦПД (выражается в мелкозернистой деструкции клеток на пятый - седьмой день) и бляшкообразовании (в культурах под агаровым покрытием вирусы образуют бляшки - зоны разрушенных клеток).
Для Для идентификации используют серологические реакции - РТГА, РСК, РБН.
При серологической диагностике у больного несколько раз делают забор сыворотки крови. Сывороитки исследуют в реакциях связывания комплемента, нейтрализации, торможения гемагглютинации, преципитации. Пробы считаются положительными если наблюдается повышение титра антител не менее чем вчетверо к выделенному от этого же больного вирусу или к его эталонным штаммам.
Биологический метод, проводимый без дифференциации энтеровирусов, заключается в заражении белых мышей-сосунков в мозг.
Лечение проводится в условиях стационара - бокс инфекционной больницы. Используют симптоматическую терапию, гаммаглобулин, витамин С, В 1,В 6,В 12, аминокислоты, применяют также меры по устранению деформаций и контрактур. Специфическая химиотерапия отсутствует.
Экстренную специфическую профилактику полиомиелита обеспечивают введением человеческого иммуноглобулина. При появлении клинических симптомов болезни иммуноглобулин неэффективен. Срок сохранения искусственного пассивного иммунитета - три недели.
Активная специфическая профилактика этой инфекции осуществляется с помощью живых и убитых вакцин.
Циркуляция вакцинных штаммов среди населения приводит к созданию коллективного иммунитета. Живая вакцина используется для обязательной вакцинации населения соответственно календарю обязательных прививок и вводится интраназально в виде капель грудным детям и в форме драже - детям более старшего возраста.
6. Морфология грибов. Особенности классификации
Грибы относятся к царству Fungi (Mycetes, Mycota). Это многоклеточные или одноклеточные нефотосинтезирующие (бесхлорофилльные) эукариотические микроорганизмы с клеточной стенкой.
Грибы имеют ядро с ядерной оболочкой, цитоплазму с органеллами, цитоплазматическую мембрану и многослойную, ригидную клеточную стенку, состоящую из нескольких типов полисахаридов, а также белка, липидов и др. Некоторые грибы образуют капсулу. Цитоплазматическая мембрана содержит гликопротеины, фосфолипиды и эргостеролы. Грибы являются грамположительными микробами, вегетативные клетки - некислотоустойчивые.
Грибы состоят из длинных тонких нитей (гиф), сплетающихся в грибницу, или мицелий. Гифы низших грибов - фикомицетов - не имеют перегородок. У высших грибов - эумицетов - гифы разделены перегородками; их мицелий многоклеточный.
Различают гифальные и дрожжевые формы грибов.
Гифальные (плесневые) грибы гифы, сплетающиеся в грибницу, или мицелий (плесень). Гифы, врастающие в питательный субстрат, называются вегетативными гифами (отвечают за питание гриба), а растущие над поверхностью субстрата - воздушными или репродуктивными гифами (отвечают за бесполое размножение). Гифы низших грибов не имеют перегородок. Они представлены многоядерными клетками и называются ценоцитными. Гифы высших грибов разделены перегородками, или септами с отверстиями.
Грибы размножаются спорами половым и бесполым способами, а также вегетативным путем (почкование или фрагментация гиф). Грибы, размножающиеся половым и бесполым путем, относятся к совершенным. Несовершенными называют грибы, у которых отсутствует или еще не описан половой путь размножения. Бесполое размножение осуществляется у грибов с помощью эндогенных спор, созревающих внутри круглой структуры - спорангия, и экзогенных спор - конидий, формирующихся на кончиках плодоносящих гиф.
Грибы можно разделить на 7 классов: хитридиомицеты, гифохитридиомицеты, оомицеты, зигомицеты, аскомицеты, базидиомицеты, дейтеромицеты.
Среди фикомицетов различают: хитридиомицеты, или водные грибы, ведущие сапрофитический образ жизни или поражающие водоросли; гифохитридиомицеты, имеющие сходство с хитридиомицетами и оомицетами; оомицеты - паразиты высших растений и водяные плесени; зигомицеты включают представителей рода Mucor, распространенных в почве и воздухе и способных (например, грибы рода Mucor) вызывать мукоромикоз легких, головного мозга и других органов. При бесполом размножении на плодоносящей гифеспорангиеносце образуется спорангий - шаровидное утолщение с оболочкой, содержащее многочисленные споры (спорангиоспоры). Половое размножение (оогамия) у зигомицетов осуществляются путем образования зигоспор, или ооспор.
Эумицеты представлены аскомицетами и базидиомицетами (совершенные грибы), а также дейтеромицетами (несовершенные грибы). Аскомицеты (или сумчатые грибы) объединяют группу грибов, имеющих септированный мицелий и отличающихся способностью к половому размножению. Свое название аскомицеты получили от основного органа плодоношения - сумки, или аска, содержащего 4 или 8 гаплоидных половых спор (аскоспор).
Плодоносящая гифа у грибов рода Penicillium (кистевик) напоминает кисточку, так как из нее (на конидиеносце) образуются утолщения, разветвляющиеся на более мелкие структуры - стеригмы, на которых находятся цепочки конидий. Пеницициллы могут вызывать заболевания (пенициллинозы). Многие виды аскомицетов являются продуцентами антибиотиков.
Представителями аскомицетов являются и дрожжи - одноклеточные грибы, утратившие способность к образованию истинного мицелия. Дрожжи имеют овальную форму клеток, диаметр которых 3--15 мкм. Они размножаются почкованием, бинарным делением (делятся на две равные клетки) или половым путем с образованием аскоспор. Дрожжи используют в биотехнологических процессах. Заболевания, вызываемые некоторыми видами дрожжей, получили название дрожжевых микозов.
Базидиомицеты - шляпочные грибы с септированным мицелием.
Дейтеромицеты - несовершенные грибы (Fungi imperfecti) - являются условным классом грибов, объединяющим грибы с септированным мицелием, не имеющих полового размножения. Они размножаются только бесполым путем, образуя конидии.
К несовершенным грибам относятся грибы рода Candida, поражающие кожу, слизистые оболочки и внутренние органы (кандидоз). Они имеют овальную форму, делятся почкованием (бластоспоры), образуют псевдомицелий (почкующиеся клетки из ростковой трубочки вытягиваются в нить), на концах которого находятся хламидоспоры. Эти грибы называют дрожжеподобными. Истинные дрожжи (аскомицеты) образуют аскоспоры, не имеют псевдомицелия и хламидоспор.
Подавляющее большинство грибов, вызывающих заболевания у человека (микозы), относятся к несовершенным грибам.
7. Выделение чистых культур микроорганизмов. Методы культивирования аэробных и анаэробных микроорганизмов
Чистой культурой называют такую культуру, которая содержит микроорганизмы одного вида. Выделение чистых культур бактерий - обязательный этап бактериологического исследования в лабораторной диагностике инфекционных болезней, в изучении микробной загрязненности различных объектов окружающей среды, и, в целом, при любой работе с микроорганизмами. Исследуемый материал (гной, мокрота, фекалии, кровь и другой материал от больных; вода, почва, воздух, пищевые продукты, трупы животных и человека, переносчики) обычно содержит ассоциации микробов.
Выделение чистой культуры позволяет изучить морфологические, культуральные, биохимические, антигенные и другие признаки, по совокупности которых определяется видовая и типовая принадлежность возбудителя, то есть производится его идентификация.