Для выявления протеолитических ферментов исследуемую культуру засеивают в питательную среду, содержащий тот или иной белок (МПЖ, молоко, свернутую кровяную сыворотку).
Протеолитическая активность микробов на желатине определяется по разжижению столбика желатина под действием фермента желатиназы разжижение желатина может быть послойное, воронкообразное, в виде чулка.
В молоке микробы, выделяющие протеолитические ферменты, через несколько дней вызывают свертывание и пептонизацию молока. Пептонизация сопровождается отделением молочной сыворотки, растворением сгустка казеина под действием фермента казеиназы и выпадением осадка.
Для идентификации видов существенное значение имеет выявление способности микробов гидролизовать белок до продуктов глубокого распада: индола, сероводорода, аммиака.
Индол (орто-бензопирил) образуется при расщеплении ферментом триптофаназой сложной гетероциклической аминокислоты триптофана.
Источниками образования сероводорода могут быть различные соединения среды: органические (цистеин, цистин, метионин) и неорганические (сульфиты, сульфаты, тиосульфата). Для определения образования сероводорода делают посев в пробирку с МПБ, в которую под пробку над средой помещают кусочек стерильной фильтровальной бумаги, пропитанной раствором уксуснокислого свинца. Если исследуемая культура при разложении белка выделяет сероводород, то образуется сульфид свинца, в результате чего появляется темно-бурое окрашивание фильтровальной бумажки. Присутствие аммиака определяют по изменению цвета красной лакмусовой бумажки (синеет), а также при помощи реактива Несслера.
Результат: Сделав посев в МПБ, дополнительно поместив под пробирку кусочек стерильной фильтровальной бумаги, пропитанной раствором уксуснокислого свинца, наблюдается выделение сероводорода, а вследствие этого наблюдается потемнение бумажки, т.е. сероводород является продуктом жизнедеятельности этих микроорганизмов.
Определение видов бактерий
Выполнив посев и изучив морфологические, культуральные и биохимические свойства данного вида микроорганизмов, проанализировав их, я сделал вывод, что наиболее подходят под описание кокки рода Staphilococcus, вида Saprophyticus.
Характеристика вида:
Кокки, располагаются группами в форме виноградной грозди, грамположительные, каталазоположительные, факультативные анаэробы, хорошо размножаются на простых питательных средах и быстро размножаются на средах с большой концентрацией NaCI (ЖСА), образуя на плотных питательных средах семейства с белым, желтым или золотистым пигментом. Обладают хорошо выраженными протеолитическими свойствами: разжижают желатин, свертывают и пептонизируют молоко, вызывают гемолиз, выделяют аммиак, сероводород.
Список используемой литературы
1.Дикий.И.Л., Сидорчук И.И., Холупяк И.Ю. и др. Микробилогия: Руководство к лабораторным занятиям: Учебное пособие для студентов фармацевтических ВУЗов и фармацевтических факультетов медицинских институтов. // К.: ИД “Профессионал”, 2004. - С.
2.Джавец Э., Мельник Дж. Л., Эйдельберг Э.А. Руководство по медицинской микробиологии. 1-ый т. Пер. с англ. - М.: Медицина, 1982.
3.И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, 1999.-С. 50-60., 138-142
4 П.П.Степаненко "руководство к лабораторным работам по микробиологии молока и молочных продуктов». Москва 2005 г.
5 П.П.Степаненко «Микробиология молока и молочных продуктов". Учебник для студентов вузов, Москва 2003 г.
6 «Определитель бактерий» Берджи.
7.П.П. Стенанеико, Р.П. Корнелаева «Микробиология молока и молочных продуктов. Методы выделения чистых культур и идентификации вида бактерий» Москва 2002 г.
8.Руководство к практическим заняттям по медицинской микробиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней /Под ред. Проф. Кривошеина Ю.С. - К.: Вища школа, 1986. - С. 25-31.