Диссертация: Изучение морфологических, биохимических, паталогоанотомических свойств сальмонеллёзного микроба и действия на микробов, нового лекарственного препарата Биотон

Патогенность возбудителя паратифа для цыплят разного возраста и кур

Распространенность, потери птицы от пастереллеза и салмонеллезов с Среднеазиатских республиках изучали по отчетности и статистическим данным, полученным в отдельных птицеводческих хозяйствах и на птицефабриках системы Узптицепрома.

В осаде научно - исследовательской работы (2010-2012 гг.) нами всего было выделено 182 культуры возбудителей, в том числе пастереллеза 58, пуллорозу - тифа 103 и паратифа 21 от больной птицы из 94 общественных и личных хозяйств.

В лабораторных опытах использовали более 800 эмбрионов, 933 цыплят разного возраста и 400 кур-несушек, 150 голубей, 25 морских свинок, 85 кроликов, свыше 1000 белых мышей.

Культурально - морфологические и биохимические свойства культур пастерелл и салмонелл определяли по методикам Ф.Кафмана (1941), Г.Я.Синая (1949), Д.Берджи (1980), а патогенные свойства возбудителей - путем биопробы, сравнивали с данными М.Т.Прокофьевой (1956) и Е.М.Каживникова (1974).

Первичным материалом для выделения возбудителя пуллороза - тифа птиц послужил патологический материал от павшей птицы, поступившей 8/IV - 71 г. в лабораторию по изучению болезней птиц.

На основании результатов эпизоотологических, клинических, патологоанатомических, микробиологических, биологических и серологических исследований был установлен пуллороз - тиф пицц. В этом хозяйстве приобрели 24 птицы: 21 курицу и 3 петуха, из них 12 больных, реагировавших по ККРА, и 12 здоровых. Всех птиц содержали совместно в лабораторных условиях института. Кормили птицам комбикормом. Их окольцевали и исследовали через 10-20 дней после поступления.

Бактериологичеки исследовали экскременты, взятые из клоак каждой птицы при помощи стерильных палочек и ватных тампонов. Пробы помещали в пробирки с 10 мл. Стерильного физиологического раствора. После тщательного отмывания тампонов в физрастворе, последний цетрифигировали при 4000 об/мин в течение 15 мин. Затем часть назосадочной жидкости и делали посевы на среды Кауфмана и Киллиана чашки с указанен) по одной прбирки и на элективные среды Плоскирева и Эндо - по две чашки каждой пробы. Посевы помещали в термостат при температуре 37⁰_.

Посевы на плотных средах выдерживали в термостате 48ч. Через 24ч. делали дробные перевесы со среды Кауфмана и Киллмана на чашки с указанными плотными элективными средами, результаты которых также учитывали через 48ч.

Достоверность выделенных колоний подтверждали постановкой РА на предметном стекле с монорецепторной О - антигенной сывороткой с рецепторной 9. Готовили и окрашивали мазки, просматривали висячие капли и заражали белых мышей.

Проводили серологические исследования крови, взятой из гребешка кур-микробоносителей, смешивая ее с тифо - пуллорозным цветным антигеном.

Павших птиц вскрывали, изучали патолоанатомические именения и проводили высевы из внутренних органов на питательные среды. (МПБ, МПА, Кауфмана, Плоскирева, Эндо). Изучали культурально-морфологические и патогенные свойства культур.

Подопытных птиц в течение 1971-1973 гг. Исследовали 46 раз. Чтобы выяснить возможность контактного инфицирования, к птицам - микробоносителям были подсажены 9 здоровых кур и 5 петухов 6-месячного возраста. У птиц - микробоносителей определели яйценоскость, выводимость и сохранность потомства (первая генерация). Определяли развитие молодняка путем ежемесячного вывешивания до 5-меячного возраста.

Потомство птиц-микробоносителей (первая генерация) в период 1972-1973 гг. также подвергали 25-кратному исследованию. В опытах находилось до 18 птиц. У них определяли яйценоскость, выводимость и сохранность до 5-месячного возраста. Определяли развитие молодняка второй генерации путем ежемесячного взвешивания.

Птиц - микробоносителей второй генерации исследовали 22 раза. Определяли их продуктивность. В опыте находилось 22 птицы. Одновременно с подопытными птицами - микрабоносителями под наблюдением находились здоровые (контрольные) птицы. Их также исследовали: определяли яйценоскость, выводимость, сохранность и развитие.

У микробоносителей и здоровых птиц изучали морфологию крови по методике А.А. Кудрявцева (1974), а биохимические показатели ее (содержание общего белка, активность аминотрансферазы АСТ и (1957), и В.С. Асатиани (1965).

Исследовали морфологические изменения в органах птиц. Кусочки патологического материала фиксировали в 10-12%-ном нейтральном растворе формалина и частично в 96⁰ этиловом спирте. Уплотненные кусочки заливали парафином и целлоидином. Затем делали срезы на замороживающем микротаме. Срезы окрашивали гематоксилинэозином, на жир - суданом III, на гемосидерин - по Перлсу и на слизь - муцикорлином.

Факторы передачи и выживаемости возбудителей болезней изучали по методике ВНИИВС (1959). Для опытов использовали штаммы пастерелл 711,712,715, полученные во ВГНКИ, и штаммы, выделенные нами от птиц Бухарской (1965), Галя-аральской (1972-1976) птицефабрик, в колхозе им. Навои Ургутского района Самаркандской области (1972).

Кроме того, в опытах использовали паспортизированные штаммы возбудителя тифа птиц №№9585, 7979, 791, которые получили во ВГНКИ веет. препаратов (1962).

Штаммы пуллороза №№941 и «Ставрополь» также получены во ВГНКИ веет.препаратов.

Штаммы паратифа №№415,264 и «Индейка 1» получены во ВГНКИ вет.препаратов, другие выделены от цыплят и утят Самаркандской и цыплят Ката Курганской бройлерной птицефабрик (1975-1977).

Для обсеменения объектов применяли суспензию, приготовленную из 2-суточных агаровых культур указанных штаммов. Учитывая, что в естественных условиях место нахождения возбудителя во внешней загрязнятся пометам, пухом, пером и пылью, которые в определенной степени предохраняют его от воздействия неблагоприятных факторов, искусственно создавали аналогические условия. Бром 0,3г. нестерильного птичьего помета, смешивали с 1 мл взвеси культуры, содержащей 1 млрд. Микробных тел, и равномерно распределяли на 100 мс² площади исследуемого объекта.

Объектами, на которых изучали выживаемость микробов, были доски, кирпичи, асфальт, глинобитный пол, зерно, пух-перо, комбикорм, яйца, вода, почва, железо, хлопчатобумажная ткань, трупы птиц и некоторые другие.

Обсемененные тестообъект размещали в помещении и во дворе. Через определенное время (5-10 суток) с поверхности тесто-объктов браме соскоб и поверхность протирали ватно-марлевым тампоном. Пробы тщательно измельчали в ступке, разводили физиологическим раствором и сливали в центрифужную пробирку, после чего центрифугировали при 4000 об/мин в течение 30 мин. Непосадочную жидкость сливали. Остающиеся 1-1,5 мл жидкости тщательно перемешивали с осадком и высевали на агаровую среду в 2 чашки Петри и в пробирки с месопептонным бульоном Хоттингера. Посевы выдерживали в термостате 48ч. при температуре 37⁰. Результаты учитывали по характерным свойствам колоний пастерелл под малым увеличением микроскопы. Из подозрительных колоний делали мазки, которые окрашивали по Романовскому - Гимза, также исследовали висячую каплю, под геммерскией. Если культуру пастерелл не выделяли, то делали пересевы на агар Хоттингера в чашки Петри и в бульон, которые ставили в термостат для дальнейшего выращивания. В необходимых случаях ставили биопробу на белых мышак.

Патологический материал высевали на среды Кауфмана, Киллиана и на элективные среды Плоскирева и Эндо.

Достоверность выделенных колоний салмонелл подтверждали поставкой реакции агглютинации (РА) с моноперецепторной О-антигенной сывороткой с рецептором 9 или Н-антигенной сывороткой. Готовили и окрашивали мазки, просматривали висячие капли и заражали белых мышей.

При проведенным опытов учитывали температуру и относительную влажность воздуха. Исследования продолжали до 3-кратного отрицательного результата.

Испытание средств и разработку методов влажной дезинфекции птичников проводили на основании инструкции по проведению дезинфекции, дезинвации и дератизации.

И контроль качества дезинфекции А.А.Поляков, В.С.Ярных, Е.С.Цой, А.А.Розов (1974). Контроль качества аэрозольной дезинфекции осуществляли по методике А.А.Закомырдина и Ю.И.Боченина (1970).

Дисперсность аэрозоля (массовый медианный диаметр частиц аэрозоля) определяли по методу В.С.Ярных (1972).

При изучении физического метода дезинфекции температуру поверхности объектов измеряли по методу, описанному В.П.Преображенским (1978), с помощью милливольтметра МР-64-02 и потенциометра УПИП-60М.

Действие некоторых химических веществ на дыхание салмонелл и пастерелл исследовали на аппарате Варбурга, используя методику, применению Г.М.Боьяном и Г.Н.Малйоновой (1961). Действие дезинфицирующих веществ на ультраструктуру бактерий определяли по методика А.В.Кумиковского (1976).

Для биотермического обеззараживания куриного помета от пастерелл использовали ранее разработанную наши методику (1962).

Все цифровые данные, полученные в экспериментах, обработывали по И.П.Ашмарину и др. (1975). Объем выполненных исследований и некоторые частные методики приведены в последующих главах.

11. Действия нового “Биотона” на сальмонеллезной бактерий

Опыты по испытанию нового препарата “Биотон” на микробную культуру сальмонелл.

Опыты проводилась в городском санитарно-эпидемиологическом центре г. Андижан

В течение 2-лет наши выделана 6 штаммы сальмонелл 4 из них сталовых общественного питаниях 2 из продуктов приведенного на исследования в эпиднадзора.

Выращенные и выделенные штамм с нача отделили отдельные колоних читай культуры их выращивали на питательной среде МПБ и МПА при 37⁰С в термостате в течение 24 ч.

Выращенные на МПБ культуру высевали на элективную среде Плоскерева по 2 чашки ода чашки посева явилась опытной на -------- с верху наливали испытуемая препарат «Биотон» другая оставалась контрольной их оставляли в термостате на 48 часов.

Результаты опытов показала что на поверхность напитый препарат «Биотон» рост культуры не наблюдалась, а у контрольной наблюдалась сплошной ростом.

Следовательно препарат «Биотон» оказалось надежным препаратом при действии на микробную культуру сальмонелл.

Выводы и предложения

1. Установлена, имеют место распространение сальмонеллезной инфекции в регионе.

2. При изучении морфология колонии бактерий сальмонелл на плотной питательной среде. Эндо и Плоскирова; Установлена колония на указанных питательной среде, колония имеет равные края, серого цвета, колония выпуклая. На бульоне имеет виде осадка, цвет яркий не мутный.

3. Цыплята и куры погибают от од 1 млрд. до 3 млрд. в течение от 2 до 10 суток от 80-100%.

4. У цыпляти кур при вскрытки обнаружена в основном изменение кушечнике-калтар и в печеники никроз цирроз.

5. При изучении биохимических свойстве использованные штаммы S.typhimurium образовали кислиту мальтозу, сорбит, инозит, кислота и газ глюкоза, маните, сероводород, а не образовали.

6. Испытание биотона и антибиотон бацилли дали хороший результат, пенициллин не убивает микробов сальмонелл

Практические предложения

1. Рекомендуется изучение, распространение сальмонеллезной инфекции в регионе.

2. Это изучение распространение сальмонеллезной инфекции в регионе, имеет большой научный интрес.

Использованная литература

1. Шлегель Г. Обшая микробиология.- М., 1987

2. Воробьев А.А., Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии //М.: Медицинское информационное агенство, 2003.

3. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - Москва, «Медицина». - 1982.

4. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Фрейдлин И.С. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. - Москва, «Медицина». - 1994.

5. «Новые педогогические технологии» - 2001. - Ташкент.

6. Гариeв Б.Г., «Микробиология» Тошкeнт. Мe?нат. 1990

7. Ивушкин И.Ф. Взаимодействие между актиномицетами, клубеньковыми бактериями и азотобактером, выделенным из ризосферы люцерны, Микробиологичний журнал, т. 18, № 2.1956.

8. Му?амeдов И., Eшбоeв E., Зокиров Н., Зокиров М.. Микробиология, иммунология, вирусология. Тошкeнт 2002 й.

9. Прозоркина Н.Б., Рубашкина Л. А. “Основа микробиологии, вирусологии и иммунологии”. Ростов на Дону. Фeнeкс. 2002.

10. Ва?обов А. ?. “Микробиология ва вирусалогия” (Марузалар матни).

11. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Фрейдлин И.С. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. - Москва, «Медицина». - 1994.