Материалом исследований служили сыворотки крови лиц с подозрением на ЦМВ - инфекцию. Сбор сывороток крови осуществлялся в женских консультациях, родильных домах города Душанбе и областях Республики Таджикистан, республиканской клинической больницы № 3, городской клинической больницы № 1, городской клинической инфекционной больницы, детской инфекционной больницы, в госпиталях погранвойск и 201 МСД РФ. Сыворотки крови от практически здорового населения были получены из республиканской и областных станций по переливанию крови.
Исследования проводились в три этапа. Первый этап включал в себя серологический мониторинг определённых групп населения республики на ЦМВИ и был связан с определением специфических антитела класса IgG . Всего было обследовано на наличие суммарных антител к ЦМВ 6080 человек обоего пола в возрасте от 0 до 65 лет. Из них женщин было 3452 чел. (56,1 %), мужчин - 892 чел. (14,5 %). Из них жителей города 4753 чел. (77,2 %), в сельской местности - 1400 чел. (22,7 %).
С целью установления различий между изучаемым показателем в отдельных регионах Таджикистана изучена серопозитивность населения к ЦМВ в трёх регионах республики: Южный (Хатлонская обл.), Северный Таджикистан (Согдийская обл.), Центральный Таджикистан ( РРП).
Нами изучена иммунореактивность и спектр антител к возбудителю ЦМВИ в различных группах детского и взрослого населения.
С целью установления групп высокого риска проведена сравнительная оценка специфических факторов иммунитета к возбудителю ЦМВИ с условной группировкой титров антител (низкие, средние, высокие) в различных группах детского и взрослого населения.
Для изучения инфицированности в различных возрастных группах населения была использована случайная выборка. Основным контролем служили доноры.
На втором этапе исследований позитивные сыворотки на антитела к ЦМВ класса Ig G и сыворотки от пациентов групп высокого риска инфицирования, тестировались методом ИФА на выявление специфических антител к ЦМВ класса Ig M. Наличие антител класса Ig M свидетельствовало об активности инфекционного процесса .
С целью исключения ложной серопозитивности и установления титра IgM- антител серопозитивные сыворотки исследовались повторно с двукратным разведением.
Сравнительная оценка специфических факторов иммунитета к возбудителю ЦМВИ проводилась в следующих группах: беременные (1752 чел.); беременные с угрозой прерывания беременности (546 чел.); женщины с отягощенным акушерским анамнезом (864 чел.); матери детей с подозрением на внутриутробную инфекцию (254 чел.); дети с подозрением на ЦМВИ , при этом в отдельную группу выделены дети до 1 года (147 чел.); взрослые с клиническими проявлениями ЦМВИ (215 чел.); дети до 14 лет, отобранные методом случайной выборки (контроль) (305чел.); взрослые, отобранные методом случайной выборки (878 чел.); женщины (фертильного) детородного возраста (случайная выборка) (421 чел.); медицинские работники (64 чел.). Контрольную группу составляли доноры (569 чел.)
На наличие ЦМВИ было обследовано 65 сывороток крови ВИЧ-инфицированных пациентов.
На третьем этапе проводилось изучение иммунного статуса у 105 человека со специфическими антителами к ЦМВ при помощи тестов I и II уровня. С этой целью в периферической крови определяли общее количество лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, абсолютное и относительное содержание лимфоцитов, рассчитывали лимфоцитарный индекс - лимфоциты/нейтрофилы.
Исследования сывороток осуществлялись с помощью твёрдофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем III-поколения.
В работе было использовано медицинское оборудование для иммуноферментного анализа фирмы «Мультсистем» (Финляндия): набор одноканальных и многоканальных пипеточных дозаторов. Скрининг осуществлялся с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем фирм «Ниармедик» (Москва) и НПК «Диагностические системы» (Нижний Новгород) и «Вектор-Бест» (Новосибирск) Учет результатов проводился спектрофотометрически на мультискане при длине волны 492 нм.
С помощью тест-систем «ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-G-авидность» (НПО Диагностические системы , Н.Новгород.) в сыворотке крови, разведенной в 10 раз раствором для предварительного разведения, определяли низкоавидные «ранние» вирусоспецифические IgG, характерные для первичной ЦМВИ. Авидноcть IgG выражали индексом авидности (ИА) в %.
Параметры иммунологического статуса исследовали тестами I и II уровня в соответствии с методическими рекомендациями Института иммунологии МЗ РФ «Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях» под редакцией Р.В. Петрова .
Показатели клеточного иммунитета характеризовались абсолютным количеством лимфоцитов, уровнем Т-лимфоцитов (Е-РОЛ), теофелин-чувствительных (Тфч-РОЛ) и теофелин-резистентных (Тфр-РОЛ) в реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана. Уровень (М-РОЛ) В-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мышей.
Гуморальное звено иммунитета оценивали по содержанию основных классов иммуноглобулинов Ig G, Ig M, Ig A, Ig Е, определяли иммуноферментным методом на коммерческих тест-системах «Вектор-Бест» методом иммунодифузии по Манчини.
Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов оценивали методом преципитации в растворе полиэтиленгликоля (ПЭГ 6000) по методу V. Haskova, в модификации Ю. А. Гриневича .
Общую активность комплемента изучали по 50%-гемолизу эритроцитов барана .
Функциональную активность фагоцитирующих клеток оценивали по показателям фагоцитарного индекса, спонтанного и стимулированного НСТ-теста (нитро-синий тетрозолий) .
Статистическую обработку полученных данных проводили методом вариационной статистики с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической величины (m). Средние значения иммунологических показателей сопоставлялись с контрольными данными, степень их различий (р) определялась по таблицам Стьюдента - Фишера. Различия расценивали как достоверные по формуле р<0,05, р<0,01, р<0,001.
Средние величины, ошибку средней, среднее квадратичное отклонение и значение коэффициента корреляции вычисляли с помощью пакета прикладных программ.
Результаты исследований и их обсуждение.
Для изучения широты распространённости ЦМВИ на первом этапе наших исследований нами была проведена оценка иммунореактивности у 6088 жителей Республики Таджикистан.
Полученные данные показали, что уровень серопозитивности среди них достиг 65,6 % , при этом, нами анализировались маркеры ЦМВИ - иммуноглобулины классов G и M.
Нами была изучена частота выявления IgG-антител к ЦМВ по половому признаку. Результаты наших исследований показали более высокую инфицированность ЦМВ у женской части населения - Ig класса G были выявлены в 74,6% случаев. В тоже время при обследовании мужчин уровень серопозитивности к Ig класса G составил 45,9%.
Анализ серопозитивности по половому признаку показал, что его уровень достоверно в 1,6 чаще выявлялся у женщин, чем у мужчин .
Также нами была изучена частота выявления Ig класса М к ЦМВ, являющаяся показателем активной репликации возбудителя этой инфекции. Результаты исследований показали, что у обследованных нами мужчин IgM- антитела выявлены у 14,6%; а среди обследованных нами женщин IgM-антитела выявлены у 38,9%. Уровень серопозитивности среди женщин более чем в 2,7 раза превысил тот же показатель у мужчин.
Среди городских жителей у которых были выделены IgG-антитела серопозитивность в процентном отношении (67,7 ± 1,1%) была выше на 9,1%, чем серопозитивность (58,6±2,3%) у проживающих в сельской местности.
Для проведения сравнительной оценки распространённости ЦМВИ на территории Таджикистана, нами был проведен скрининг здорового населения на наличие антител к ЦМВ в трёх регионах республики: Хатлонской области, Согдийской области и в районах республиканского подчинения.
Полученные данные наглядно показывают распространенность ЦМВИ по географическим зонам Таджикистана , указывают на более высокий уровень серопозитивности в индустриально развитых регионах (60,8 ± 3,5% в Согдийской области ) и свидетельствуют об относительно равномерном её распространении среди сельских регионов Таджикистана (58,6 ± 1,8% в Хатлонской области и 57,6 ± 2,4% в Центральном регионе ).
С целью выявления распространенности ЦМВИ среди различных возрастных групп населения Таджикистана было проведено исследование сывороток крови у лиц, отобранных методами "случайной" и "целевой" выборки.
Результаты целевой выборки показали, что у детей до 1 года (с пороками развития, внутриутробной инфекцией, поражением ЦНС, лёгких, печени) в 1,8 раза чаще, а у детей 1-6 лет и в возрастной группе 7-14 лет с клиническими проявлениями ЦМВ - инфекции в 2,8 и в 2,3 раза чаще соответственно определялись специфические антитела по сравнению с контролем. В целом во II-ой группе уровень серопозитивности в 1,6 раза
превышал данные показатели в контроле, при этом по всем возрастным группам лиц со специфическими антителами к ЦМВ при целевой выборке было больше в 1,3 - 2,8 раза (p< 0,001) .
Результаты изучения иммуноструктуры по различным группам населения, свидетельствуют о выявляемости антител класса IgG и их уровне среди отдельных групп детского и взрослого населения. Среди взрослого населения самый низкий процент серопозитивных лиц (36,4 ± 1,8%) был выявлен среди доноров (основной контроль). При этом большинство обследованных (78,6 ± 2,6%) имели низкий уровень IgG- антител; высокотитражные сыворотки были выявлены в (1,7±0,8%), что может представлять определённую угрозу для серонегативных по анти-ЦМВ реципиентов при переливании крови и её компонентов.
Достоверных различий между показателями инфицированности взрослого населения в целом (случайная выборка) и женщин детородного возраста, в частности, не выявлено.
Сравнительная ЦМВ-серопозитивность по группам женщин высокого риска дают представление о частоте выявления IgG, а также об уровне титров антител в каждой изученной группе. Среди беременных отмечена более высокая частота выявления IgG- антител к ЦМВ: в 2 раза выше по сравнению с 9 группой (p< 0,001) и в 4,8 раза по сравнению с 11 (p<0,001), при этом превалировали низкотитражные сыворотки - в 61,2 ± 1,4% (p< 0,001).
При обследовании женщин с угрозой прерывания беременности и женщин с отягощённым акушерским анамнезом серопозитивность по IgG-антителам составила 85,7 ± 1,5% и 81,3 ± 1,3% соответственно, что превышает данные по 11 группе в 2,3 и в 2,2 раза (p< 0,001 ) и по 9 группе в 1,5 и 2,2 раза (p<0,001), соответственно.
При изучении титров IgG-антител оказалось, что у женщин с неблагоприятным акушерским анамнезом среди серопозитивных лиц превалировали пациенты со средним (44,9 ± 1,8%) и высоким (18,2 ± 1,4%) уровнем антител, при этом высокотитражные сыворотки встречались в 2,3 и в 9,1 раза чаще, чем у женщин детородного возраста без патологии и у беременных, и в 19,9 раза чаще (p< 0,001) по сравнению с донорами. Существенные изменения в структуре титров антител к ЦМВ выявлены среди женщин с угрозой прерывания беременности, о чём свидетельствует большое количество серопозитивных пациентов с высоким титром IgG, которые определялись в 16,2 и в 4,2 раза чаще (p<0,001), чем в 2 и в 9 группах, и в 19 раз чаще (p< 0,001), чем в 11.
Среди серопозитивных матерей, у детей которых подозревали врождённую форму ЦМВИ, преобладали низкотитражные сыворотки (70,1±3,0%), что могло указывать на относительно отдалённые сроки инфицирования до момента обследования. При обследовании детей до 14 лет с клиническими проявлениями ЦМВИ серопозитивные лица обнаруживались в 2,4 раза чаще (p<0,001),чем среди детей при случайной выборке . В 5-й группе 59,6 % составили дети первого года жизни с подозрением на внутриутробную инфекцию, пороками развития, с поражением ЦНС, органов зрения, лёгких и печени, а также родившиеся от матерей с ЦМВИ. У детей с пороками развития, поражением ЦНС и органов зрения превалировали сыворотки с низким уровнем антител, что могло свидетельствовать об отдалённых сроках инфицирования и поздних проявлениях ЦМВИ.
В группе взрослых, обследованных по клиническим показателям, анти-ЦМВ IgG определялись в 79,5 ± 3,0 % случаев ( в 2,2 раза чаще (p< 0,001), чем у доноров, и в 1,6 раза чаще (p< 0,001),чем у взрослых при случайной выборке).
Обследование 64 медицинских работников, контактирующих с кровью и работающих прежде всего в родильных домах и перинатальном центре, а также из отделений реанимации и интенсивной терапии, куда госпитализируются дети с подозрением на внутриутробную инфекцию, выявило напряжённость иммунитета у них к ЦМВ: серопозитивность в этой группе составила 75,0 ± 5,4% и была выше показателя в группе доноров в 2 раза (p< 0,001) и в 1,5 раза по сравнению со взрослыми при случайной выборке (p< 0,001).
Данные изучения иммунореактивности медицинских работников свидетельствуют о высокой напряжённости иммунитета у этой группы лиц и позволяет сделать заключение, о том, что этот контингент следует рассматривать как группу высокого риска ЦМВ-инфицирования и заболевания.
При проведении скрининговых исследований в отдельных группах лиц высокого риска инфицирования ЦМВ наряду с выявлением специфических Ig класса G, нами также было проведено тестирование на наличие специфических Ig класса M. Результаты исследования отдельных групп населения показали , что Ig M антитела среди обследованного контингента выявлялись в целом в 9,3 %.
Особое внимание в наших исследованиях для установления острой формы ЦМВИ уделялось беременным женщинам.
Результаты наших исследований показали, что специфические Ig M антитела у беременных женщин обнаруживались в 5,5 % случаев, при этом следует отметить, что у беременных с угрозой прерывания беременности Ig M антитела регистрировались в 2 раза чаще, по сравнению с беременными без угрозы прерывания беременности . Среди женщин с отягощенным акушерским анамнезом специфические Ig M антитела также выявлялись почти в 1,9 раза чаще по сравнению с беременными.