имеют антиген D, но не имеют антигенов С и G, а также редкие эритроциты cdeG, которые содержат антиген G, но не содержат антигенов C и D. Из 49 исследованных авторами сывороток, идентифицированных обычными метода-
ми как анти-D + С, 51,4 % имели антитела анти-D + С + G; 17,2 % – анти-С + G; 5,7 % – анти-D + G; 25,7 % – анти-С + D. Таким образом, 74,3 % сывороток анти-
СD содержали антитела анти-G, а 25,7 % не содержали, 23,9 % сывороток антиCD фактически имели специфичность анти-С + G и анти-D + G, т. е. специфичность анти-D в первом случае и анти-С во втором случае была кажущейся.
Issitt и Anstee [374] обнаружили сильный компонент анти-G в 11 коммерческих реагентах анти-CD и анти-CDE. Среди 50 сывороток, взятых от сенсибилизированных к CD-антигенам лиц, 15 содержали анти-G-антитела, 37 реагировали с эритроцитами C −D −G +, т. е. имели анти-G-активность, однако 22 из этих 37 сывороток были комбинированными: анти-С + G, анти-D + G (поэтому они не были учтены как анти-G). Только 15 (30 %) сывороток после адсорбции – элюции характеризовались как содержащие гомогенный анти-G-компонент.
Авторы пришли к выводу, что гипериммунные сыворотки анти-CD и антиCDE, используемые как коммерческие в виде пула из нескольких сывороток, практически всегда содержат анти-G-антитела. В индивидуальных, непулированных, образцах анти-CD-сывороток антитела анти-G могут отсутствовать.
Как подчеркивают указанные авторы, опасение, что эритроциты r' G (CdeG) могут быть иммуногенными для реципиентов rr (cde / cde), потому что несут на себе антигены как C, так и G, не является основанием для того, чтобы рассматривать кровь доноров r' G (CdeG) как Rh +.
Антиген G, по-видимому, более иммуногенен, чем С, но не до такой степени, чтобы представлять опасность для лиц cde / cde. Для формирования анти-G- антител у лиц rr (cde / cde) требуется весьма значительный антигенный стимул в виде многократных переливаний эритроцитов G +, чтобы антитела анти-G образовались в выявляемом количестве.
Хотя анти-G-антитела чаще появляются у лиц D −C −G −, они могут образоваться у лиц D +. Антитела анти-G найдены Tippett и Sanger [660] как отделяемый компонент в сыворотке лиц с эритроцитами категории D IIIb, которые, как позднее выяснилось, не содержат антигена G. Другие авторы [630, 728] нашли анти-G-антитела у лиц с фенотипом D + G −.
Foung и соавт. [290], Thompson и соавт. [651] описали моноклональные анти-G-антитела.
О тесной связи антигенов G, С и D свидетельствуют эксперименты Allen, Tippett [132] и Nijenhuis [507], показавшие, что адсорбция анти-G-антител на эритроцитах конкурентно блокирует связывание эритроцитов с антителами анти-С, анти-D и, что пока не находит объяснения, с анти-е.
Установлено, что полипептиды Rh, несущие специфичность С и D, имеют одинаковую аминокислотную последовательность на участке от остатка 50 до остатка 103, кодируемом эквивалентными экзонами 2 гена RHD и гена RHC.
221
Если полипептид кодируется генами RHD и RHC, то экзофациальной аминокислотой в положении 103 оказывается серин. Если аналогичная последовательность кодируется геном RHc, то положение 103 занимает пролин (Cherif-Zahar и
соавт. [208], Le Van Kim и соавт. [418], Kajii и соавт. [390]).
У лиц с парциальным антигеном D IIIb экзон 2 гена RHD замещен экзоном 2 гена RHc (Rouillac и соавт. [584]). Гибридный белок D-c-D, экспрессируемый в результате этого, имеет пролин в положении 103, что придает эритроцитам специфичность G −.
По-видимому, серин в положении 103 обусловливает экспрессию как антигена С, так и антигена G. Высказано предположение, что антитела анти-С распознают структуру с серином в положении 103 на полипептиде, несущем С-антиген при отсутствии D-антигена. Антитела анти-G распознают структуру с серином в положении 103 на полипептиде, несущем как антигены С, так и антигены D.
Гены rG, r"G и антиген СG
Allen и Tippet [131] обозначили ген, кодирующий продукцию антигена G у лиц cde / cde, символом r G. Как оказалось, миссис Crosby, упомянутая выше, была гетерозиготна по гену rG и имела генотип cdeG / cde. Ее эритроциты не содержали антигенов D и С, поэтому имелась возможность наблюдать фенотипическое выражение гена r G в чистом виде, без модификации продукта r G (cdeG) геном RHD и аллелями Ce, cE и CE гена RHСE.
В 1961 г. Levine и Rosenfield [431] выявили человека с гомозиготным вариантом этого гена – r Gr G (cdeG / cdeG). Сравнение эритроцитов лиц r Gr (cdeG / cde) и r Gr G (cdeG / cdeG) в серологических реакциях позволило более полно охарактеризовать особенности гена r G. Оказалось, что ген r G производит антигены с (hr') и G, но не производит антигены е, f (ce), C W, C X и rhi (Ce). Поэтому неудивительно, что эритроциты миссис Crosby агглютинировались некоторыми сыворотками анти-CD, но не агглютинировались сыворотками анти-С, анти-C W, анти-C X, анти-f (ce), анти-rhi (Ce) и очень слабо агглютинировались сывороткой анти-е.
Case [197] нашел образец эритроцитов r" G (cdEG). В норме ген r" (cdE) не производит G-антигена, поэтому ген r" G, описанный Case, не только редко встречается, но и весьма необычен. Эритроциты r" G (cdEG), в отличие от эритроцитов r G (cdeG), реагировали с некоторыми сыворотками анти-С. Это происходило не потому, что ген r" G производит небольшое количество антигена С, как полагают некоторые исследователи, а за счет реагирования анти-С-антител с антигеном G. Сыворотки анти-С содержат фракцию перекрестно реагирующих антител анти-C G (или G C), которые, по мнению Race и Sanger [544], могут распознавать соответствующий антиген G C в эритроцитах r G (cdeG).
Антитела анти-C G в чистом виде не выделены. Они встречаются в сочетании анти-СC G, поэтому понятие «анти-С G» используют для описания антител, распознающих антиген, подобный С, но не идентичный ему. Иными словами,
222
гены, кодирующие антиген С, кодируют также G и C G как некую переходную форму от C к G. Другие, более редкие, гены: rG, r' S и r" G – кодируют антиген C G или G C, но не С и G.
Антиген C G трудно отличить от антигена С и его фенотипических вариантов. Для этого требуется панель не только сывороток анти-С с разными анти- G-характеристиками, но и эритроцитов с различными фенотипами r G и R G. Тем не менее антиген C G признан самостоятельной серологической единицей, и ему присвоен номер Rh21.
У негров присутствие гена rG характеризуется менее выраженной экспрессией антигена G [362, 660], чем у белых [131, 431]. У негроидов описан фенотип rG u (Beattie и соавт. [155]), в котором антиген G слабо выражен и лучше выявляется в непрямой пробе Кумбса. Вполне возможно, что описанный фенотип rG u является фенотипом r G негроидов. Эритроциты rG u содержали характерные для негроидов антигеныV(сe S) иVS (e S), значительно реже встречающиеся у европеоидов.
Таким образом, гены rG (cdeG), r'G (CdeG) и r"G (cdEG) представляют собой гетерогенную группу.
Антиген c-like (Rh26)
Анти-с-подобные антитела (анти-c-like), выявляющие парциальный с (hr') антиген (Rh26), описаны в 1964 г. Huestis и соавт. [361]. Характерной особенностью этих антител явилось то, что они реагировали не со всеми образцами эритроцитов с (hr') +: с теми эритроцитами, в которых этот антиген находился в ослабленной форме, антитела не реагировали.
Примерно 80 % обследованных имели фенотип с + Rh26 +, ≈ 20 % – фенотип c −Rh26 −, а лица c −Rh26 + и c + Rh26 − встречались крайне редко, что свидетельствовало об определенной связи между этими антигенами, а также о том, что антиген Rh26 является компонентом антигена с (hr'), хотя и серологически самостоятельным.
Как отметили указанные авторы, большинство сывороток анти-с представляли собой смесь антител анти-с и анти-Rh26.
Faas и соавт. [279] доложили, что фенотип с + Rh26 − происходит от гена се, в котором имеется мутация G →Aв нуклеотиде 286. Эта мутация приводит к продукции полипептида се, в котором Gly 96 замещен Ser. Авторы полагают, что и другие участки полипептида могут быть изменены, поскольку антиген Rh26 экспрессирован только на с-полипептиде, тогда как Gly 96 экспрессирован на D-полипептиде. Вероятно, замена Gly 96 → Ser влияет на антиген с (hr'), так как все эритроциты с + Rh26 −экспрессируютантигенс(hr')слабее,чемобразцыс + Rh26 +.
Reviron и соавт. [563] описали брата и сестру, эритроциты которых агглютинировались всеми использованными для исследования поликлональными сыворотками анти-с, но не реагировали с моноклональными анти-с-антителами и не адсорбировали их в противоположность обычным эритроцитам с +, взятым в качестве контрольных.
223
Антитела анти-Rh26 обнаружены лишь в единичных случаях у лиц Rh26 −, и в настоящее время их сложно получить, как и стандартные эритроциты Rh26 − и Rh26 +, для сопоставления с новыми находками.
Tippett [657] обнаружила ген r t (c tde), образующий уменьшенное количество антигена е и f (ce) и необычную форму антигена с (hr'), названную сt. Антиген сt отличается от обычного антигена с (hr') по аггютинационным и адсорбционным свойствам. Некоторые сыворотки анти-с реагировали с эритроцитами сt и адсорбировались ими, другие – не реагировали и не адсорбировались. Установлено, что ct и Rh26 представляют собой разные антигены, отличающиеся друг от друга серологически.
Антигены f (ce), rhi (Ce), cE и CE
Идею о том, что 2 гена RH, находящиеся в одном цистроне, т. е. в позиции цис, могут экспрессировать, помимо свойственных им антигенов, третий, сопутствующий антиген, впервые сформулировали Sanger, Race, Rosenfield и др. [577, 596], открывшие антиген f (ce) – первый антиген такого типа. Затем по аналогии были найдены антитела, выявляющие другие сопутствующие антиге-
ны: rhi (Ce), Rh22 (СЕ), Rh27 (сЕ), V (ce S), VS (Ce S), которые также в значитель-
ной мере обусловлены цис-эффектом.
Вначале эти антигены относили к комплексным, полагая, что сочетание антигенов c и e суммарно дает качественно новый антиген – f; сочетание антигенов С и е – антиген rhi, с и е S – V и т. д. Однако это определение вскоре было признано неточным. Цис-антигены – это самостоятельные, серологически четко очерченные детерминанты, продуцируемые при определенном сочетании генов.
Rosenfield и соавт. [577], Sanger и соавт. [596] установили, что анти-f (се)-
антитела реагируют с эритроцитами лиц сDe / CDe, cde / cde и другими вариантами генотипов, при которых с и е находятся в положении цис, но не реагируют с эритроцитами лиц Cde / cDE, CDe / cDE и другими, когда с и е также присутствуют, но в положении транс.
Иными словами, сыворотки анти-f (се) не реагируют с эритроцитами, содержащими антигены с и е по отдельности, а только когда эти антигены составляют се-комплекс. Однако это отнюдь не значит, что антиген f является комбинацией с и е, скорее он сопутствует этому комплексу.
Антитела анти-с и анти-е не реагируют с антигеном f (се). Это сложно показать в серологических реакциях, так как антиген f присутствует на эритроцитах, содержащих антигены с и е. Противоположный вариант, когда с и е антигены присутствуют на эритроцитах, а f отсутствует, широко распространен – это большинство гетерозиготных по с и е людей. Эритроциты таких людей реагируют с анти-с и анти-е, но не реагируют с анти-f (се)-сыворотками. Это может показаться игрой слов, если не вдумываться в логику комбинаций. В действительности же все проще: антитела анти-f (се), анти-с и анти-е реагируют как антитела разной специфичности.
224
Антитела анти-f (се) были обнаружены после множественных переливаний крови у лиц R1R2 (CDe / cDE) [434, 596], которые не могли продуцировать аллоиммунные антитела анти-с и анти-е, что еще раз указывает на существенные различия в специфичности антител анти-f, анти-с и анти-е, а также подчеркивает различия антигенов f (се), c и е.
Антитела анти-f иногда встречаются в сыворотках анти-с и анти-е [383, 434, 596], и их можно очистить, адсорбируя сыворотки эритроцитами CDe и cDE.
Описаны некоторые парадоксы, касающиеся f-антигена, которые ранее не находили объяснения. В частности, эритроциты сD −, имеющие ослабленную форму антигена с и не содержащие антигена е, тем не менее, вопреки ожидани-
ям, несли f-антиген (Delmas-Marsalet и соавт. [258], Yamaguchi и соавт. [724]).
То же самое отметили Metaxas и соавт. [475], Heiken и соавт. [343] в отношении редкого фенотипа (c)d(e)f +, характеризующегося слабовыраженными антигенами с, е и сильным f. Описаны фенотипы Dc(e)f +, Dc(e)f − и Cde Sf +. В настоящее время стало понятно, что отсутствие фенотипической выраженности признака не всегда отражает поломку соответствующего гена. В большинстве случаев необычные фенотипы наблюдали при функционально сохранном генном комплексе, который воспроизводил нормальные антигены у потомства. Например, лица
Rhnull передавали по наследству нормальные гены Rh, а лица с фенотипом Oh (Бомбей) – нормальные гены Oαβ. Известны и другие примеры нулевых феноти-
пов без повреждения соответствующих генов.
Всвете этих данных приведенные выше находки сильного f в отсутствие с
ие не выглядят парадоксально и вряд ли могут рассматриваться как аргумент против существования цис-антигенов.
Наличие антигена f в эритроцитах Cde S позволило предположить, а затем доказать с помощью адсорбции – элюции, что гаплотип CdeS продуцирует некоторое количество антигена с и е.
Впервые годы после обнаружения антигена f полагали, что этот антиген и его возможный антитетичный партнер F составляют четвертую пару антигенов
Rh после Dd, Cc и Ee (Race, Sanger [544], Доссе [50]).
Теперь, когда известно, что полипептид D кодирует ген RHD, а полипептиды СсЕе кодируют аллели локуса RHCE [496], природа цис-антигенов прояснилась.
Аллели RHce, RHCe, RHcE и RHCE локуса RHCE кодируют продукцию с, е,
иf (ce); C, e и rhi (Ce); с, E и cE (Rh27); С, Е и СЕ (Rh22) соответственно.
Определение «цис-антигены» в свете современных представлений о генети-
ке системы Rh стало не совсем корректным, поскольку в настоящее время считается, что f (се) и другие сопутствующие антигены производятся одним геном.
В табл. 4.7 представлены реакции продукта этих аллелей в 8 основных гаплотипах.
Такимобразом,генотипСDe / cDE производитне5(C,c,D,Eиe),а7(C,c,D,E, e,CeиcE)антигенов,агенотипcde / cde –не2(сие),а3(с,еисе)антигенаит.д.
Точно так же, как рассматриваемые 4 антигена (се, Се, сЕ и СЕ) не являются
225