Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

Феномен перекрестного реагирования сывороток Оαβ(I) впервые описали Landsteiner и Witt в 1926 г. [134] как парадокс, нарушающий стройную концепцию системы АВО, постулирующую 2 агглютиногена – А и В, и два агглютинина – α и β. Вопреки ожиданиям исследователей элюаты, полученные при адсорбции сывороток Оαβ(I) эритроцитами А, реагировали не только с эритроцитами А, но и с эритроцитами В. Такой же результат наблюдали после адсорбции сывороток Оαβ(I) эритроцитами В: элюат реагировал с эритроцитами В и А.

При адсорбции смеси сывороток Аβ(II) и Вα(III) перекрестного реагирования антител не происходило: элюат с эритроцитов А реагировал только с эритроцитами А, элюат с эритроцитов В – только с эритроцитами В (Wiener и соавт. [229]).

Адсорбционные пробы с сывороткой Оαβ(I), а именно возможность удалить с помощью эритроцитов А агглютинины β, а с помощью эритроцитов В – агглютинины α, указывают на то, что антигены А и В содержат общий компонент, который и является, по Винеру, антигеном С.

Весьма убедительными казались доводы оппонентов, отрицавших существо-

вание антигена С. Так, Dodd, Lincoln, Boorman [91, 146], Bird [80] полагали,

что анти-С-антитела представляют собой химически сшитые, несепарируемые, αβ-молекулы, способные реагировать с антигенами А и В. Таким образом, антиген С на эритроцитах А и В – это лишь видимость.

Другиевидныеисследователи(RaceиSanger[184],Доссе[25],П.Н.Косяков[35], Прокоп [56]) также указывали, что α- и β-агглютинины лиц группы О(I) не являются простойсмесью.Логичнодопустить,чтовпроцессесинтезаα-агглютининовиодно- временноβ-агглютининовкакая-точастьизнихможетбытьсобранакакαβ-антитела.

Важным аргументом против существования антигена С явился также тот факт, что до настоящего времени не найдены индивиды, в эритроцитах которых антиген С присутствует в чистом виде без антигенов А и В.

По мнению Wiener [229], некоторые образцы эритроцитов Аx (А4,А5) как раз и являются носителями антигена С в чистом виде. Эти эритроциты не содержат антигена В, а количество антигена А в них крайне мало. Особенностью этих эритроцитов является то, что они не реагируют с сыворотками Вα(III), но реагируют с сыворотками Оαβ(I), так как сыворотки Вα(III) содержат только α-агглютинины, асывороткиОαβ(I)нарядусα-агглютининамиимеютанти-С-антитела.Болеетого, у лиц Аx в сыворотке крови иногда содержатся α1-экстраагглютинины, поэтому нельзяисключать,чтоантигеныА4 иА5таковыминасамомделенеявляются,т.е. не относятся к группе А, а представляют собой антиген С.

Race и Sanger [184] не разделяли точку зрения Винера, указывая на то, что некоторые сыворотки Вα(III) слабо, но все-таки реагируют с эритроцитами А4, А5 [184]. Кроме того, в слюне людей А4, А5 находят растворимый антиген А, нейтрализующий α-агглютинины сывороток Вα(III), что свидетельствует о принадлежности антигенов А4 и А5 к группе А.

Дискуссия относительно существования антигена С в системе АВО, продолжавшаяся до 1970-х годов, в последующие годы не возобновлялась в связи с

81

отсутствием новых данных, а также некоторым скептическим отношением иммуносерологов к этому вопросу, не представляющему, по их мнению, большого значения для практики переливания крови.

На наш взгляд, перекрестно реагирующие антитела имеют значение в трансфузиологии. Их присутствие у реципиентов, по-видимому, усугубляет тяжесть посттрансфузионных осложнений. Об этом свидетельствует то обстоятельство, что среди реципиентов О(I), которым перелили кровь другой группы, осложнения протекают более тяжело и риск летального исхода выше, чем у реципиентов A(II) и B(III), которым перелили кровь другой группы. Однако соответствующие иммуносерологические исследования, подтверждающие или опровергающие высказанное положение, не были проведены.

Вместе с тем в литературе накапливались сведения о том, что перекрестно реагирующие антитела, а стало быть и антиген С, имеют значение в акушерстве.

Rosenfield в 1953 г. [188, 189], исследуя групповые антитела у новорожденных и их матерей, обратил внимание на 2 обстоятельства: 1 – если мать и плод имели группу О(I), то у новорожденных α- и β-агглютинины в сыворотке крови присутствовали чаще, чем в случаях, когда мать и плод имели группу A(II) или оба относились к группе B(III); 2 – у женщин с О(I) группой крови ГБН развивалась чаще, чем у рожениц, имевших другие группы крови.

Unger и Wiener [213], Wiener и Wexler [231], подтвердив данные Rosenfield,

показали, что у новорожденных О(I) от матерей О(I) через месяц после рождения перекрестно реагирующие αβ-антитела исчезали, что свидетельствовало об их материнском происхождении.

Kochwa и Rosenfield установили, что перекрестно реагирующие антитела анти-А,В относятся к глобулинам 7Sγ2, которые легкопроникают через плаценту, поскольку размер их молекул меньше, чем у других антител.

Разделяя взгляды Винера, мы предприняли попытку найти подтверждение его концепции, а именно того, что перекрестные реакции в системе АВО обусловлены антигеном С эритроцитов, а не комбинированными αβ-антителами.

Дляначалапредставлялосьцелесообразнымполучитьсобственныеданныеохарактереперекрестныхреакций,свойственныхсывороткамОαβ(I)[20,21,23,24,47].

Материал и методы. Исследовали сыворотки крови 100 доноров, имеющих группу крови О(I), мужчин и женщин. Каждую сыворотку титровали с эритроцитами А и В до и после адсорбции эритроцитами А, В и О. Титр сывороток устанавливали кратным их разведения 0,9 % NaCl. В качестве контроля первые 3 разведения сыворотки тестировалиэритроцитамиО(I).Адсорбцию антител проводили при комнатнойтемпературе 20–22  оСвтечение 1 ч в соотношении2 объемасыворотки  +1 объем плотно упакованного гомогенизированного осадка трижды отмытых эритроцитов. Устойчивость антител к унитиолу (2,3-димеркаптопропансульфонат натрия – CH2SH-CH-SH-CH2SO3Na) оценивали титрованием сыворотки после добавления равного объема 1,25 % раствора этого реактива и инкубации полученной смеси в течение 2 ч при температуре 37  оС. Температурную устойчивость антител исследовали посредством прогревания сывороток при температуре 56 и 70  оС в течение 1 ч и 10 мин соответственно.

82

Из 100 исследованных сывороток группы О(I) 52 не содержали перекрестно реагирующих антител. При уменьшении титра α-антител на 4–8 ступеней после адсорбции этих сывороток эритроцитами А β-антитела оставались в том же титре, что и до адсорбции. Аналогичный результат наблюдали после адсорбции этих сывороток эритроцитами В. Титр β-антител снижался на 4–8 ступеней, в то время как титр α-антител оставался прежним (табл. 3.7).

Таким образом, 52 % сывороток Оαβ(I) не обладали способностью к перекрестному реагированию, 48 % сывороток содержали перекрестно реагирующие антитела. Перекрестное реагирование было симметричным и асимметричным, в частности, 20 из 48 сывороток показали симметричное перекрестное реагирование, т. е. независимо от того, какими эритроцитами (А или В) проводили их адсорбцию, титр α- и β-агглютининов снижался пропорционально.

Другие 28 сывороток показали асимметричное перекрестное реагирование. В 15 сывороткахпослеадсорбцииэритроцитамиАснижалсятитробоихагглютининов(α и β), а после адсорбции эритроцитами В убывал титр только β-агглютининов, титр α-антител оставался прежним. В 13 сыворотках, наоборот, снижение титра обоих агглютининовнаблюдалипослеадсорбцииэритроцитамиВ.Адсорбцияэритроцитами Аснижалатитрα-агглютининов,ноневлияланатитрβ-антител.Такимобразом,пе- рекрестное реагирование по своему характеру может быть симметричным, асимме- тричнымвсторонуА-антигенаиасимметричнымвсторонуВ-антигена.

Примечание.КатегорияI–сыворотки,несодержащиеперекрестнореагирующихантител, II – сыворотки, содержащие антитела, дающие симметричные перекрестные реакции, IIIиIV– сыворотки,содержащиеантитела,дающиеасимметричныеперекрестныереакции.

83

Нанашвзгляд,перекрестноереагированиеобусловленонеαβ-агглютининами, как полагала Dodd и соавт., а антителами αС, βС, что в большей мере согласуется с концепцией Винера, а также полученными нами данными. На рис. 3.2 представлена предполагаемая модель этих антител.

Рис. 3.2. Возможные варианты изогемагглютининов в сыворотке Оαβ(I).

1 – α-изогемагглютинины; 2 – β-изогемагглютинины, 3 – С-изогемагглютинины; 4 – αС-изогемагглютинины; 5 – βС-изогемагглютинины.

Представленная структурная модель изогемагглютининов позволяет объяснить характер перекрестного реагирования сывороток Оαβ(I). Сыворотки, не вызывающие перекрестных реакций, содержат только α- и β-антитела (рис. 3.3, п. 1). Сыворотки, вызывающие симметричные перекрестные реакции, содержат, помимо α- и β-антител, антитела αС и βС или анти-С-антитела (рис. 3.3, п. 4). Сыворотки, вызывающие асимметричные перекрестные реакции, содержат α, β и одну из разновидностей антител – αС или βС (рис. 3.3, п. 2, 3).

1.Перекрестная реакция отсутствует 2. Асимметричная перекрестная реакция

3.Асимметричная перекрестная реакция 4. Симметричная перекрестная реакция

Рис. 3.3. Комбинации агглютининов, обусловливающие различные варианты перекрестного реагирования.

84

Рассмотрим модель асимметричного реагирования сыворотки, которая содержит агглютинины в сочетании, представленном на рис. 3.4.

Рис. 3.4. Вариант асимметрично реагирующей сыворотки.

Согласно схеме сыворотка содержит 50 % α-агглютининов, 75 % – β. Валентность анти-С реагирует как α и β. При адсорбции такой сыворотки эритро- цитамиАα-агглютининыбудутудаленыполностью.Инымисловами,изсыворот- ки будет удалено 50 % антител. При адсорбции сыворотки эритроцитами В будет удалено 75 % антител (50 % β + 25 % α) за счет рецептора анти-С. В случае, если рецептор анти-С связан не с α-, а с β-агглютининами, асимметричное реагирование проявят эритроциты А, унося на своей поверхности 25 % β-агглютининов.

Какдалеенамипоказано,перекрестнореагирующиеантителатакже,какиммунныеантителаАВОиRh,относятсякклассуIgG,устойчивыкунитиолу,лучшереагируют с отмытыми, чем неотмытыми эритроцитами, в отличие от иммунных (термостабильных)антителявляютсятермолабильными(утрачиваютактивностьпослепрогревания сыворотки при 70  оС в течение 10 мин). В противоположность классическимиммуннымантителамIgG,которыеадсорбируютсянаэритроцитах,ноневызывают их агглютинации, перекрестно реагирующие антитела непосредственно агглютинируют эритроциты в солевой среде. В низкой концентрации они утрачивают способность агглютинировать эритроциты, однако сенсибилизируют их подобно неполнымантителамихорошовыявляютсявнепрямойантиглобулиновойпробеКумбса.

Сыворотки лиц Оαβ(I), очевидно, содержат несколько типов групповых анти- тел:изогемагглютининыαиβIgM,αиβIgG,αСиβСIgG,анти-СIgG,иммунные α и β IgM, иммунные α и β IgG, что закономерно обусловливает перекрестные реакции с различными групповыми антигенами.

Важным аргументом, подтверждающим концепцию Винера о существовании антигена С, явились эксперименты по получению специфических антисыворотк. В частности, при иммунизации мышей эритроцитами А(II) и В(III) нами [21] были полученымоноклональныеантителасоспецифичностьюанти-АВ(МКА-АВ).

Материал и методы. Трехмесячным самкам мышей BALB / с вводили по 0,1 мл отмытых 0,9 % NaCl эритроцитов А(II) или В(III) внутрибрюшинно дважды с интервалом в 7 дней. Третью инъекцию производили внутривенно за 5 дней до слияния спленоцитов с клетками миеломы NS-1. Слияние осуществляли по стандартной методике с использованием 45 % полиэтиленгликоля-1500 «Loba» и 5 % диметилсульфоксида. Эффективность гибридизации составляла 10–5. Клонировали гибридные клетки в среде НАТ без фидера. Антителопродуцирующие клоны отбирали с помощью реакции агглютинации в 96-луночных планшетах с отмытыми эритроцитами О(I), А(II) и В(III).

Класс моноклональных антител устанавливали по флюоресценции сенсибилизи-

85