Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

олигосахарид в положении Asn 8 и 12 участков О-гликозилирования. Второй домен – трансмембранный гидрофобный (позиции 58–81), третий домен – цитоплазматический С-терминальный (позиции 82–128) (Colin и соавт. [19], High, Tanner [38]). Цитоплазматический домен гликофорина С связан с цитоскелетоном. N-терминальный участок ассоциирован с трансмембранными гликофоринами А и В.

Аминокислотная последовательность гликофорина D определена частично, поскольку N-терминальный участок его блокирован (El-Maliki и соавт. [32]). Гликофорин D представляет собой укороченный вариант гликофорина С без N-терминальной последовательности из 21 аминокислоты. Он идентичен гликофорину С по аминокислотам в позициях 22–128.

Гликофорин D не имеет участков N-гликозилирования, поскольку не содержит N-терминального домена (Dahr и соавт. [21]). Антиген Ge3, представленный аминокислотной последовательностью в позициях 40–50 на гликофорине С, присутствует также на гликофорине D (High и соавт. [39]);

Антигенные детерминанты, распознаваемые ксеногенными моно- и поликлональными антителами, расположены на цитоплазматических доменах гликофоринов С и D (El-Maliki и соавт. [32], King и соавт. [48], Reid и соавт. [94]).

Структура гена GYPC

Несмотря на высокую степень гомологии гликофоринов С и D, гомолог гена GYPC на уровне кДНК идентифицировать не удалось. Это свидетельствует о том, что самостоятельного гена, контролирующего синтез гликофорина D, не существует. Оба типа гликофоринов кодирует один и тот же ген GYPC (Le Van Kim и соавт. [52], Tanner и соавт. [120]). Как установи-

ли Tanner и соавт., различия гликофоринов С и D обусловлены мутацией иРНК гена GYPC, в результате чего трансляция начинается с двух разных точек, соответственно, синтезируются два гомологичных полипептида разной длины.

Структура гена GYPC и схема его функционирования исследованы

(рис. 20.2–20.5, табл. 20.2).

Рис.20.2.ГенетическаякарталокусаGYPC (поReid,Lomas-Francis[97]).

781

Рис. 20.3. Схема синтеза гликофоринов С и D геном GYPC из двух стартовых точек

(по Daniels [24]).

Трансляция начинается с AUG-кодона (метионина), представленного в ДНК триплетом AЕG. Вновь синтезированные полипептиды имеют метионин в N-области, хотя последний отщепляется от зрелого протеина. Последовательность РНК вблизи стартового кодона гликофорина С (CCAGGAAUGU) отдалена от стартовой последовательности (CC(A / G) CCAUGG). Последовательность (CCGGGGAUGG) кодона метионина в позиции 22 на гликофорине С находится ближе к стартовому участку (Tanner и соавт. [120]). Таким образом, первая стартовая точка (для метионина в позиции 1),

782

с которой начинается трансляция, иногда не считывается. Второй участок, с которого может начаться трансляция, кодирует метионин в позиции 22. В этом случае синтезируется гликофорин D, который, как отмечалось выше, идентичен гликофорину С в позициях 22–128 (см. рис. 20.3). Возможность двух вариантов трансляции одного и того же гена подтверждена экспериментами с трансфекцией кДНК GYPC в клетки COS-7. Указанные клетки продуцировали оба типа гликофоринов. Трансфекция этой линии кДНК с делециямиATG (кодона метионина) приводила к продукции только гликофорина D. В случае заменыATG на ACG в позиции 22 синтезировался гликофорин С. В случае замены обоих кодоновATG в позициях 1 и 22 гликофорины не синтезировались. Мутация в нуклеотиде 4 (ATG T →ATG G) повышала экспрессию гликофорина С в 2 раза по сравнению с выраженностью гликофорина D (Le Van Kim и соавт. [54]).

Ген GYPC представлен четырьмя экзонами общей протяженностью 13,5 кб

(см. табл. 20.2, рис. 20.2) (Colin и соавт. [18], High и соавт. [39]).

Экзоны 1–3 кодируют экстрацеллюлярные домены гликофоринов С и D, экзон 4 – трансмембранный и цитоплазматический домены. Экзоны 2 и 3 имеют высокую степень сходства, что объясняется происхождением экзонов путем дупликации, хотя при этом экзон 3 содержит вставочную последовательность из 27 пар нуклеотидов, которой нет в экзоне 2. Указанная вставка кодирует аминокислоты в позициях 42–50 гликофорина С (Colin и соавт. [16]), Le Van Kim и со-

авт. [53]).

На рис. 20.4 и 20.5 представлена схема неравновесного кроссинговера и варианты гена GYPC, приводящие к возникновению редких антигенов и феноти-

пов Gerbich.

Рис. 20. 4. Неравновесный кроссинговер, приводящий к возникновению необычных вариантов гена GYPC (по Daniels [24]).

783

Рис. 20.5. Организация редких вариантов гена GYPC (по Daniels [24]).

Часто встречающиеся антигены Gerbich

В 1960-х годах полагали, что существует один антиген Gerbich, выявляемый сывороткой миссис Gerbich и двумя другими однотипно реагирующими сыворотками. Этот антиген был описан Rosenfield и соавт. [106] и позднее получил обозначение Ge3. В 1961 г. Barnes и Lewis [6] нашли еще один антиген этой системы – Ge2, выявляемый сывороткой миссисYussef. И наконец, в середине 80-х го-

дов Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [26], McShane и Chung [67] обнаружили антитела, идентифицирующие третий часто встречающийся антиген – Ge4.

Ge2, Ge3 и Ge4

Как установили Barnes и Lewis [6], эритроциты миссис Yussef, жительницы Кипра турецкого происхождения, агглютинировались сывороткой Gerbich, но не реагировали с сыворотками анти-Ge, полученными от других лиц Ge −. Сыворотка миссис Yussef содержала антитела, реагировавшие со всеми

784

образцами эритроцитов за исключением собственных эритроцитов и эритроцитов трех ранее найденных Ge-отрицательных лиц. Адсорбция сыворотки Gerbich эритроцитами Yussef полностью устраняла ее активность. Таким образом, с помощью двух разнореагирующих сывороток (Gerbich и Yussef) были идентифицированы два антигена системы Gerbich.

Обследование жителей Папуа – Новой Гвинеи позволило получить новые данные об этой системе. Booth и соавт. [10, 11] нашли Gerbich-ассоциированные антитела у меланезийца Ge +, которые не реагировали с эритроцитами лиц, имевших фенотипGerbichиYus,атакжесэритроцитами15 %меланезийцевGe +.Сталоочевидным, что существует третья разновидность анти-Ge-антител, с помощью которой можно идентифицировать три Ge-отрицательных фенотипа, каждый из которыхлишенодногоизтрехантигенов,составляющихсистемуGerbich(табл.20.3).

Таблица 20.3

Редкие фенотипы Gerbich

Однако эритроциты меланезийца Ge: −1, 2, 3 и его анти-Ge1-сыворотка вскоре стали недоступны. Соответственно, меланезийский вариант Gerbichотрицательного фенотипа (Ge: −1, 2, 3) и анти-Ge1-антитела не вошли в классификацию и больше не используются (Booth и соавт. [11, 61], Daniels [24]).

Anstee и соавт. [5] и Daniels и соавт. [26] обнаружили, что некоторые исследованные ими моноклональные антитела обладали Gerbich-ассоциированной специфичностью. Эти антитела реагировали со всеми образцами эритроцитов Ge + и Ge −, включая эритроциты Ge: −2, −3. В то же время были найдены образцы эритроцитов Ge: −2, −3, которые не реагировали с Gerbichассоциированными МКА (Anstee и соавт. [4, 5]). Этот Gerbich-отрицательный фенотип получил название Leach. Антитела, имевшиеся у миссис Leach, давали реакции, сходные с реакциями Gerbich-ассоциированных МКА. Антиген, открываемый ими, получил обозначение Ge4 (McShane, Chung [67]). Фенотип Leach обозначен в цифровой номенклатуре как Ge: −2, −3, −4. Все другие образцы эритроцитов содержат антиген Ge4 (см. табл. 20.3).

Посредством иммуноблоттинга с использованием нескольких образцов анти- Ge2-антител показано, что антиген Ge2 распологается на гликофорине D (рис. 20.6). Гликофорин С не содержит этот антиген (Dahr и соавт. [22], Reid и соавт. [94]). Эпитопы Ge2 расположены на N-терминальном пептиде гликофорина D (аминокислоты в позициях 1–27) (Dahr и соавт. [22]). Обработка эритроцитов трипсином или папаином разрушает антиген Ge2, в то время как химотрипсин и проназа на него не действуют (Daniels [25]). Примерно половина образцов анти-Ge2-антител реагироваласлабеесэритроцитами,обработаннымисиалидазой(Daniels[25]).

785