Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

как правило, были кровными родственниками (Swanson и соавт. [46], Okubo и

соавт. [29], Massaquoi [21]).

На эритроцитах Gy(a −) отсутствуют антигены Ну и Jo a (Moulds и соавт. [26], Laird-Fryer и соавт. [18]), а также Do a и Do b. Подобная фенотипическая зависимостьуказываланато,чтоперечисленныеантигенымогутвходитьводнусистему.

Hy

Первый образец сыворотки, содержащей анти-Ну-антитела, получили Schmidt и соавт. [40]. Позднее были найдены другие образцы антител указан-

ной специфичности (Moulds и соавт. [26], Beattie, Castillo [3], Hsu и соавт. [12]).

Носителями антител во всех случаях были негроиды, имевшие фенотип Ну −. Moulds и соавт. [26] отметили фенотипическую связь антигенов Ну и Gy a.

Негроиды Ну − имели слабый антиген Gy a [фенотип Ну −Gy(a + w)], тогда как у европеоидов Ну − и монголоидов Ну − антиген Gy a отсутствовал.

Индивиды Ну −Gy(a −) вырабатывали анти-Gy a-антитела, индивиды Ну −Gy(a + w) – анти-Ну-антитела.

Сыворотки анти-Gy a не содержали антител анти-Ну. Троекратная адсорбция сывороток анти-Gy a эритроцитами Ну −Gy(a + w) полностью истощала активность анти-Gy a-антител. Элюаты с указанных эритроцитов вели себя в серологических реакцияхтакже,какантителаисходныхнеадсорбированныхсыворотоканти-Gy a.

Все лица Ну −Gy(a + w) были Do(a −b + w), антиген Do a у них отсутствовал, антиген Do b был выражен слабо (Banks и соавт. [1]).

У 7 лиц Ну −Gy(a + w), обследованных с использованием молекулярнобиологических методов, была найдена замена нуклеотида G 232 T в экзоне 2, ведущая к аминокислотной замене Gly 108 Val (Rios и соавт. [37, 38]). У указанных индивидов обнаружена мутация C 898 G в экзоне 3, которая приводила к аминокислотной замене Leu 300 Val и, соответственно, уменьшала экспрессию антигенов Gy a и Do b.

Joa

О выявлении антигена Jo a (Joseph) впервые сообщили Jensen и соавт. [14], которые нашли антитела, идентифицировавшие этот антиген у 2 пациентов – американских негров. Обе сыворотки реагировали со всеми исследованными эритроцитами.

Третий образец анти-Jo a-антител обнаружили Morel и соавт. [24] у больного с серповидно-клеточной анемией.

Все три носителя анти-Jo a-антител получали многократные гемотрансфузии. Laird-Fryer и соавт. [18] выявили у 5 негритянок антитела, обозначенные как анти-Jc a. Позднее было показано, что эти антитела и антитела анти-Jo a реагиру-

ют с одним и тем же антигеном (Weaver и соавт. [52]).

Частота встречаемости антигена Jo a очень высока. Jensen и соавт. [14] при обследовании 3000 жителей Нью-Йорка, преимущественно европеоидов, а также

731

7689 американских негров не нашли ни одного человека с фенотипом Jo(a −). Позднее было установлено, что антиген Jo a отсутствует на эритроцитах лиц

Hy −Gy(a −) и Hy −Gy(a + w), что свидетельствовало о фенотипической связи этих антигенов и возможной принадлежности к одной групповой системе. Вместе с тем все лица, имевшие анти-Jo a-антитела, были Gy(a + )Hy + Jo(a −) (Laird-Fryer и

соавт. [18], Weaver и соавт. [51], Brown и соавт. [4]). Тем самым было показано, что антигены Gy a, Ну и Jo a полностью различаются между собой.

Антиген Ну несколько отличался от антигена Jo a. Если антиген Jo a отсутствовал на эритроцитах Hy −Gy(a −) и обнаруживался только на эритроцитах Hy + Gy(a + ), то антиген Ну присутствовал на эритроцитах и Gy(a + )Jo(a + ), и Gy(a + ) Jo(a −) (Spring и соавт. [43]).

Weaver и соавт. [51] нашли 4 человек Ну −Gy(a −)Jo(a −).

Banks и соавт. [1] выявили пять человек Jo(a −)Do(a + wb + w) негров, одного испанца Jo(a −)Do(a + wb −).

Биохимия и молекулярная генетика

Banks и соавт. [1], Spring и соавт. [42, 43] посредством перекрестной иммунопреципитации показали, что антигенные детерминанты Do a, Gy a, Hy и Jo a расположены на одном и том же экстрацеллюлярном гликопротеине (рис. 16.1), имеющем мол. массу 46,75–57,5 кДа. Обработка эритроцитов эндогликозилазой F приводила к уменьшению мол массы гликопротеина до 11 кДа, что свидетельствовало о N-гликозилировании изучаемого субстрата. Вместе с тем протеин Dombrock не подвергался О-гликозилированию.

Рис. 16.1. Строение гликопротеина

Dombrock.

732

Впроцессе иммунопреципитации предположительно выделялись также димеры указанных соединений.

Вэкспрессии антигенов Gy a и Ну участвуют дисульфидные связи. При обработке сульфгидрильными реагентами мол. масса гликопротеина уменьшалась до 40–50 кДа и он быстрее мигрировал в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата.

Gubin и соавт. [9] провели скрининг базы данных, включающих около 5000 нуклеотидных последовательностей хромосом, полученных из дифференцирующихся эритроидных клеточных линий. Оказалось, что синтез ГФИассоциированных протеинов кодируют гены, расположенные на хромосоме 12.

Идентифицирован фрагмент ДНК, который, по-видимому, и является геном Dombrock. Трансфекция этого фрагмента в эритролейкемические клетки K562 приводила к экспрессии на их поверхности антигенов Do a, Gy a, Hy и Jo a (Gubin

исоавт. [9]).

Локус DO имеет величину 14 кб, состоит из трех экзонов (рис. 16.2) и кодирует синтез протеина, состоящего из 314 аминокислот (рис. 16.3). Экзон 1 кодирует аминокислоты в позиции 1–45, экзон 2 – в позиции 49–285, экзон 3 – в позиции 286–314, включая ГФИ-ассоциированный фрагмент из 17 аминокислот

(Reid, Lomas-Francis [35]).

Рис. 16.3. Аминокислотная последовательность гликопротеина Dombrock.

Обследование индивидов Do(a + ) и Do(a −) с использованием молекулярногенетических методов показало, что антигенные различия Do a / Do b обусловлены нуклеотидной заменойA793 G в экзоне 2 гена DO (Gubin и соавт. [9], Rios и соавт. [36]). Последняя приводит к аминокислотной заменеAsn 265Asp (табл. 16.4). Два других замещения нуклеотидов, приводящие к появлению аминокислотных остатковTyr 126 и Leu 208, также связаны с различиями Do a / Do b. Антигенные различия

Hy +/Hy −иJo(a + )/Jo(a −)обусловленызаменамиGly108ValиThr117Ile.

733

Таблица 16.4

Молекулярная основа антигенов Dombrock

РНК-транскрипты гена DO обнаруживали в селезенке, лимфатических узлах, костном мозге и эмбриональной печени; в тимусе и лейкоцитах периферической крови они отсутствовали (Gubin и соавт. [9]). Они не выявлялись в течение первых 4 дней культивирования клеток периферической крови человека в присутствии эритропоэтина (Gubin и соавт. [9]).

Антитела системы Dombrock

После открытия антигенов Do a и Do b [23, 45] последовала серия сообщений о выявлении новых образцов антител анти-Do a (Webb и соавт. [53], Williams, Crawford [54], Polesky и соавт. [31], Moulds и соавт. [25], Kruskall и соавт. [17], Judd, Steiner [15], Roxby и соавт. [39], Strupp и соавт. [44]) и анти-Do b (Strupp

исоавт. [44], Yvart и соавт. [55], Moheng и соавт. [22], Halverson и соавт. [11], Shirey и соавт. [41]).

Частота анти-Do a-антител в исследованных выборках практически не отличалась от частоты антител анти-Do b и соответствовала ожидаемой, рассчитанной по частоте генов. На основании этого исследователи пришли к выводу, что антигены Do a и Do b одинаковы по своей способности вызывать аллоиммунизацию (Issitt, Anstee [13]). Антитела Dombrock чаще сопутствовали антителам другой специфичности, однако известны также сыворотки, содержащие моноспецифические анти-Do a-антитела (Moulds и соавт. [25], Roxby и соавт. [39])

имоноспецифические анти-Do b-антитела (Shirey и соавт. [41]). О выявлении естественных антител Dombrock не сообщалось.

Polesky и соавт. [31] наблюдали женщину, у которой анти-Do a-антитела образовались во время первой беременности. Ребенок имел фенотип Do(a + ).

Антитела анти-Do a и анти-Do b относятся к классу IgG, не обладают способ-

ностью связывать комплемент (Polesky, Swanson [30], Moulds и соавт. [25],Yvart

исоавт. [55]). Их ни разу не описывали как причину ГБН. В отдельных случаях эти антитела обусловливали положительную прямую антиглобулиновую пробу с эритроцитами новорожденных без гемолитической реакции (Polesky и соавт. [31], Moulds и соавт. [25],Yvart и соавт. [55]).

Вместе с тем анти-Do a-антитела вызывали как острые, так и замедленные посттрансфузионные реакции, особенно у больных с серповидно-клеточной анемией (Kruskall и соавт. [17], Judd, Steiner [15], Strupp и соавт. [44]). Такие же реакции вызывали и анти-Do b-антитела (Strupp и соавт. [44], Moheng и соавт. [22], Halverson и соавт. [11], Shirey и соавт. [41]).

734

Тесты на приживление эритроцитов in vivo, а также эксперименты с монослоем моноцитов in vitro, показали, что антитела Dombrock ускоряют разруше-

ние эритроцитов, несущих антигены Dombrock (Polesky, Swanson [30], Shirey и соавт. [41]).

Водном случае, описанном Gudino и соавт. [10], у пациента, имевшего анти-Do a-антитела, приживаемость эритроцитов Do(a + ) была нормальной. Переливание ему Do a-положительных эритроцитов не вызвало реакции.

Внекоторых случаях антитела анти-Do a и анти-Do b выявляли post factum, когда трансфузии уже были выполнены. В отдельных случаях эти антитела трактовали как слабые аллогенные, не имеющие клинического значения, ауто-

иммунные или HLA-антитела (Kruskall и соавт. [17], Judd, Steiner [15], Strupp и соавт. [44], Halverson и соавт. [11]).

Впротивоположность антигенам Do a и Do b антиген Gy a более иммуногенен

ивыраженно проявляет себя при разногруппной беременности женщин Gy(a −) (Swanson и соавт. [46], Race, Sanger [32], Clark и соавт. [6], Okubo и соавт. [29]).

Антитела анти-Gy a, анти-Ну и анти-Jo a естественного происхождения не описаны (Daniels [7]). Однако могут быть исключения. Ellisor и соавт. [8] выявили анти-Gy a-антитела у пожилого мужчины, которому не проводили гемотрансфузий. Через 3 мес. антитела исчезли. Эритроциты этого человека, фенотип которого был определен как Gy(a −), адсорбировали анти-Ну-антитела, которые можно было затем элюировать. Стандартные эритроциты Gy(a −) такой способностью не обладали.Этодаетоснованияполагать,чтофенотипGy(a −)можетбытьприобретенным (Reid и соавт. [34]). Процесс подобной трансформации, по-видимому, может сопровождаться появлением соответствующих транзиторных антител.

Антитела анти-Gy a, анти-Ну и анти-Jo a, как правило, относятся к классу IgG (Swanson и соавт. [46], Clark и соавт. [6], Moulds и соавт. [26], Beattie, Castillo [3], Hsu и соавт. [12], Jensen и соавт. [14], Morel и соавт. [24], Brown и соавт. [4], Ellisor и соавт. [8], Barrett и соавт. [2]). Один образец анти-Gy a-антител содержал фракцию IgAи, как удалось установить с помощью антиглобулиновой пробы, связывал комплемент (Clark и соавт. [6]). Один образец анти-Ну-антител, вызывавший прямую агглютинацию эритроцитов, помимо IgG, содержал фрак-

цию IgМ (Barrett и соавт. [2]).

Beattie и Castillo [3] описали случай гемолитической посттрансфузионной реакции у мужчины, имевшего анти-Ну-антитела, которому были перелиты две дозы эритроцитов Ну +.

Описан также реципиент с наличием анти-Gy a-антител, которому были произведены трансфузии 10 доз эритроцитов Gy(a + ) (Mak и соавт. [20]). Какихлибо проявлений несовместимости при этом авторы не наблюдали.

Убольного с транзиторными анти-Gy a-антителами приживаемость эритроцитов Gy(a + ) in vivo была нормальной (Hsu и соавт. [12]). В аналогичных исследованиях ускоренную элиминацию эритроцитов in vivo вызывали антитела анти-Ну (Hsu и соавт. [12]) и анти-Jo a (Viggiano и соавт. [50]).

735