Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

моноклональные антитела анти-Fy3 распознают эпитопы, расположенные на 3-й экстрацеллюлярной петле Fy-гликопротеина (Lu и соавт. [96]). Аллогенные поликлональные антитела анти-Fy3 выявляют эпитопы более чем одного региона молекулы Fy-гликопротеина.

МКА Анти-Fy3 часто используют для быстрого поиска доноров Fy(a −b −) среди доноров негров. Потребность в многократных трансфузиях таких эритроцитов весьма велика при лечении негров, страдающих серповидно-клеточной анемией (Sandler и соавт. [143]).

Fy4

После того как Sanger и соавт. [144] обосновали возможность существования молчащего аллеля Fy, обусловливающего высокую частоту фенотипа Fy(a −b −) среди негроидов, были предприняты безуспешные попытки найти антитела анти-Fy или анти-Fy с у реципиентов белой расы, получавших трансфузии крови от доноров негров. В 1973 г. Bezhad и соавт. [19] описали антитела, найденные у негритянки Fy(a +b + ), страдавшей серповидно-клеточной анемией и получившей множество трансфузий. По характеру реагирования антитела приближались к предсказанным анти-Fy с-антителам, но это не были антитела анти- Fy с-специфичности. Они были обозначены анти-Fy4. Реакция антител усиливалась после обработки эритроцитов папаином [19].

Исследования, проведенные с анти-Fy4-антителами в 3 лабораториях, внесли сомнения относительно принадлежности анти-Fy4-антител к системе Duffy. В частности эритроциты, лишенные Fy-гликопротеина, давали с анти-Fy4- антителами слабоположительные реакции (Behzad и соавт. [19], Buchanan и соавт. [23]). Не удалось провести генетических посемейных исследований. Единственный образец антител анти-Fy4 оказался нестабильным при хранении, в связи с чем исследования в этом направлении стали невозможными (Reid, Lomas-Francis [138]).

Fy5

Антиген Fy5 близок по серологическим свойствам антигену Fy3, но отличается от последнего тем, что отсутствует у лиц Rhnull (Daniels [43], Issitt, Anstee [76], Reid, Lomas-Francis [138], Westhoff, Reid [178]). Он слабо экспрессирован на эритроцитах –D–/–D–, однако присутствует на эритроцитах лиц Fy(a −b −), не относящихся к негроидам (табл. 10.5). Подобно антигену Fy3 антиген Fy5 устойчив к действию протеолитических ферментов и присутствует в одинаковой степени на эритроцитах взрослых и новорожденных (Colledge и соавт. [36], DiNapoli и соавт. [49]).

Характер реагирования анти-Fy5-антител позволяет полагать, что они взаимодействуют со структурами, интегрированными с Rh-протеинами и Rhассоциированными гликопротеинами (RhAG).

616

Таблица 10.5

Характер реагирования антител анти-Fy3, анти-Fy5 и анти-Fy6

«  + » – положительная, « – » – отрицательная, сл – слабовыраженная реакция, нд – нет данных.

Найдено по меньшей мере 6 образцов антител указанной специфичности – все у реципиентов черной расы с фенотипом Fy(a −b −), главным образом у больных серповидно-клеточной анемией, получавших гемотрансфузии (Bowen и со-

авт. [21], Chan-Shu [26], Colledge и соавт. [36], DiNapoli и соавт. [49], VengelenTyler [168]). Во всех случаях сыворотки сенсибилизированных содержали смесь антител анти-Fy5 и анти-Fy a (Vengelen-Tyler [168]). Антитела анти-Fy5 не удается разделить методами адсорбции. Эритроциты некоторых лиц с парциальными антигенами Rh слабо реагировали с анти-Fy5-антителами, еще раз подтверждая положение о том, что антигены Duffy имеют некоторую связь с антигенами резус (Meredith [104]). Эритроциты лиц, гомозиготных по гену Fy x, также несут слабый антиген Fy5 (Marsh [101]).

Антитела анти-Fy5 описаны как причина замедленных гемолитических посттрансфузионных реакций (Bowen [21], Chan-Shu [26], Vengelen-Tyler [168]).

У одного больного описаны 2 трансфузионные реакции, одна из которых была обусловлена антителами анти-Fy a, другая – анти-Fy5 (Bowen [21]).

Fy6

Nichols и соавт. [124], Riwom и соавт. [140] получили 2 образца мышиных моноклональных антител против часто встречающегося антигена, напоминавшего Fy3. Однако в отличие от антигена Fy3, открываемый полученными антителами антиген разрушался после обработки папаином, фицином и химотрипсином. Антиген получил обозначение Fy6, соответствующие антитела – анти-Fy6.

Антитела анти-Fy6 аллогенного происхождения не найдены (Daniels [43]).

617

Оба образца упомянутых моноклональных антител распознавали линейные эпитопы, представленные аминокислотными остатками QLDFEDV в позициях 19–25 на N-терминальном экстрацеллюлярном домене Fy-гликопротеина (Wasniowska и соавт. [170, 173, 174]). Удалось выделить Fy-гликопротеин, напоминавший структуру, делающую возможной инвазию эритроцитов малярийны-

ми паразитами Plasmodium vivax (Chaudhuri и соавт. [30], Riwom и соавт. [140]).

Антиген Fy6 присутствует на эритроцитах низших обезьян.

Онтогенез, распределение в тканях

Антигены Fy a и Fy b появляются на 6–7-й неделе эмбрионального развития (Toivanen и соавт. [158, 159]), выраженность их такая же, как на эритроцитах взрослых, и остается неизменной на протяжении всего периода внутриутробного развития плода.

Противоречивые результаты получены при изучении сроков появления антигена Fy6. В одних исследованиях появление указанного лиганда констатировалось в одинаковые сроки с появлением гликопротеинов Lutheran, т. е. на 2–3-й мес. внутриутробного развития, в других – приблизительно в одно и то же время с формированием гликофоринов С (Bony и соавт. [20], Daniels, Green [44], Southcott и соавт. [151]).

Эритроциты Fy(a +b −) и Fy(a −b + ) несут по 13 000–14 000 антигенных участков Fy a и Fy b на одну клетку. Количество антигенных участков Fy a и Fy b на эритроцитах

Fy(a +b + ) вдвое меньше – по 6000–7000 (Masouredis и соавт. [103]). После обработки эритроцитовпапаиномчислоантигенныхучастковредуцируетсяболеечемна85 %.

Nichols и соавт. [124], Riwom и соавт. [140] с помощью радиоиммунного метода, используя моноклональные антитела анти-Fy6, обнаружили на одном эритроците от 6000 до 12 200 участков антигена Fy6.

Уровень экспрессии антигена Fy6 на 50 % выше на ретикулоцитах, чем на зрелых эритроцитах (Woolley и соавт. [181, 182]).

Помимо эритроцитов антиген Fy6 выявлен на клетках эндотелия посткапиллярных венул во всех органах, за исключением печени (Chaudhuri и соавт. [27], Hadley и соавт. [61]), а также на волокнах Пуркинье нейронов (Horuk и соавт. [72]). Анализ кодирующих последовательностей ДНК подтвердил, что почечные и эритроидные изоформы Duffy-гликопротеинов практически идентичны. Небольшие различия в их мол. массе, вероятно, обусловлены неодинаковым гликозилированием (Chaudhuri и соавт. [27], Hadley [62], Neote и соавт. [123]).

Duffy-гликопротеины выявлены с помощью кроличьих антител в эпителии почечных канальцев и альвеол (Chaudhuri и соавт. [27]), а также в неэритроид-

ных тканях негров Fy(a −b −) (Peiper [132]).

РНК-транскриптыгенаFY быливыявленыметодомгибридизациивкостноммозге лиц фенотипов Fy(a +b −), Fy(a +b) и Fy(a −b + ), но не Fy(a −b −) (Chaudhuri и соавт. [28, 29]).Этитранскриптыобнаруживаливтканяхлегких,мышц,селезенки,толстойкишки, сердца, поджелудочной железы, почек и головного мозга (Chaudhuri и соавт. [29],

618

Hadleyисоавт.[61],Neoteисоавт.[123]),атакжевтканяхоргановнегроидовсфенотипом Fy(a −b −) (Chaudhuri и соавт. [29]). Хотя величина большинства транскриптов составляла 1,35 кб, LeVan Kim и соавт. [86] установили, что в тканях головного мозга преобладали транскрипты величиной 7,5 кб. Два вида транскриптов различались междусобойвобластинетранслируемого5ʹ-региона,однакокодировалисинтезодно- го и того же пептида. Тем не менее, Neote и соавт. [123] сообщили, что в головном мозгеплодатранскриптыимеливеличину8,5кб,аувзрослых–размером1,35кб.

Антигены Fy a и Fy b не выявлены на лимфоцитах, моноцитах, нейтрофилах и тромбоцитах (Dunstan и соавт. [50, 51]).

Гликопротеины Duffy как хемокиновые рецепторы

Гликопротеины Duffy способны связываться с хемокинами, относящимися к факторам воспаления и хемотаксиса, поэтому их нередко обозначают как DARC (Duffy antigen receptor chemokine). Хемокины участвуют во многих межклеточных взаимодействиях, в том числе в активации лейкоцитов (Rollins [141]). Существует 3большихклассахемокинов:С-Х-С,С-СиС,обозначенныхтаквсвязиспозицией цистеинового остатка в N-терминальном участке пептида. Большинство хемокиновыхрецепторовэритроцитовпредставленосемействоминтегральныхгликопротеи- нов.ТрансмембранныегликопротеиныG-типапредставляютгруппупротеинсвязы- вающихрецепторов(Jiисоавт.[81],Murdoch,Finn[120]),воcпринимающихэкстрацеллюлярныесигналычерезферомоны,нейромедиаторыигормоны.Хемокиновые рецепторыспецифичныкодномуилинесколькимгликопептидам.

Duffy-гликопротеины связываются с хемокинами C-X-C и С-С (Darbonne и соавт. [45], Horuk и соавт. [71], Neote и соавт. [122]). Некоторые хемокины C-X-C идентифицированы как интерлейкины-8 и факторы стимуляции роста меланомы (MGSA). Хемокины С-С участвуют в формировании рецепторов Т-клеток и продукции факторов хемотаксиса для моноцитов (RANTES, MCP- 1). Гликопротеин Duffy не содержит рецепторов для хемокина С – фактора хемотаксиса лимфоцитов (Szabo и соавт. [153]). В отличие от других протеинов G-типа, в структуре Duffy-гликопротеина нет мотива Asp-Arg-Tyr (DRY) во втором цитоплазматическом домене, последний взаимодействует с протеином, связывающим гуанозинтрифосфат (Hadley, Peiper [63]).

Эритроциты лиц Fy(a −b −) не обладают способностью связывать хемокины

(Horuk и соавт. [70], Tournamille и соавт. [162]), а эритроциты Fy(a −b + w) связы-

вают некоторое количество указанных субстанций (Tournamille и соавт. [162], Zimmerman и соавт. [184]).

Хемокиновые рецепторы располагаются на второй и четвертой экстрацеллюлярной петле Duffy-гликопротеина вблизи одной из дисульфидных связей

(Tournamille и соавт. [161, 163]).

Антитела к антигенам Fy a, Fy b и Fy6, связывающиеся с соответствующими эпитопами Duffy-гликопротеина, и моноклональные антитела анти-Fy3 способны блокировать хемокины (Chaundhury и соавт. [31], Hausman и соавт. [67], Horuk и

619

соавт. [70], Lu и соавт. [96], Szabo и соавт. [153],Tournamille и соавт. [163]).

Интерлейкин-8 связывается с эритроцитами, обработанными трипсином, сиалидазой, N-гликаназой, но не связывается с эритроцитами, обработанными папаином и α-химотрипсином (Wasniowska и соавт. [171]). Два последних фермента расщепляют N-терминальный домен Duffy-гликопротеина.

Физиологические функции Duffy-гликопротеинов до конца не ясны. Высказывались предположения, что Duffy-гликопротеины эритроцитов адсорбируют избыточное количество воспалительных хемокинов (Darbonne и соавт. [45])

иинтерлейкина-8, содержание которого повышается в плазме крови при инфаркте миокарда (de Winter и соавт. [47]). Однако в действительности эта функция эритроцитов вряд ли имеет столь существенное значение, поскольку у многих людей, особенно у негроидов, Duffy-гликопротеины на эритроцитах отсутствуют.

Как уже отмечалось выше, Duffy-гликопротеины содержатся и в неэритроидных клетках, в том числе у лиц Fy(a −b −), включая негроидов. Почечная изоформа Duffy-гликопротеина связывала хемокины в той же степени, что и эритроцитарная (Hadley и соавт. [61]).

HadleyиPeiper[63]полагают,чтовысокаяконсервативностьгенаFY,проявляющаяся в разных тканях, свидетельствует о важной роли Duffy-гликопротеинов в физиологии человека.

Клетки эритроидной линии K562, подвергнутые трансфекции кодирующей ДНК гена FY, связывали хемокины (Peiper и соавт. [132]). Duffy-гликопротеин присутствовал как трансмембранный структурный элемент в эндотелиальных клетках (Chaudhuri и соавт. [27]). Он может принимать участие в эндоцитозе,

ивозможно при этом инициирует синтез факторов хемотаксиса, вызывающих миграцию лейкоцитов (Hadley, Peiper [63], Lee и соавт. [87]). Существенное повышение содержания Duffy-гликопротеина отмечено в тканях почек ВИЧинфицированных лиц, а также больных уремией с гемолитическим синдромом. Последнее дает основание полагать, что Duffy-гликопротеины могут играть определенную роль в патогенезе воспалительных процессов в почечной ткани (Lu и соавт. [95]).

Гены, гомологичные генам FY человека, обнаружены у обезьян, коров, сви-

ней, кроликов и мышей (Chaudhuri и соавт. [29], Hadley, Peiper [63], Luo и соавт. [97]). Эритроциты мышей связывали хемокины мыши и человека (Szymanski

исоавт. [154]) так же, как и клетки эритроидной линии K562, подвергнутые трансфекции кДНК Dfy – мышиным гомологом гена FY человека (Luo и соавт. [97]). Мыши, дефицитные по гену Dfy, были соматически здоровы и их реакция на инъекцию воспалительных хемокинов не отличалась от таковой у обычных животных (Dawson и соавт. [46], Luo и соавт. [98]).

Некоторые лица Fy(a −b −), гомозиготные по мутации, инактивирующей ген FY, соматически здоровы, несмотря на полное отсутствие в их тканях Duffyгликопротеинов. Вероятно, при отсутствии Duffy-гликопротеинов их биологическую функцию могут выполнять другие структуры (Daniels [43]).

620