Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

Антиген Р и антитела анти-Р

Антиген Р − гликолипидный глобозид – имеется на всех эритроцитах за исключением редких фенотипов р и P k. Он одинаково экспрессирован на эритроцитах Р1 и Р2 взрослых лиц. Этот антиген в отличие от антигена Р1 хорошо развит к моменту рождения. Несколько слабее он выражен у новорожденных Р2 по сравнению с новорожденными Р1.

Сведения об экспрессии антигена Р на других клетках крови противоречивы. С помощью метода проточной цитофлюориметрии Dunstan [39] выявил антиген Р на лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах; в своих экспериментах автор применил аллогенные анти-Р-антитела. Напротив, von dem Borne и соавт. [163], используя моноклональные анти-Р-антитела, не обнаружили указанный антиген на гранулоцитах и большинстве лимфоцитов периферической крови, хотя при этом он присутствовал на клетках эндотелия, тромбоцитах, мегакариоцитах и фибробластах. Другие авторы (Shevinsky и соавт. [149]), применив несколько образцов моноклональных анти-Р-антител, не нашли фактора Р на лимфоцитах и фибробластах. Антиген Р выявлен в клетках злокачественных опухолей (Bono и соавт. [15], Kelus и соавт. [77], Shevinsky и соавт. [149], von dem Borne и соавт. [163]), в клет-

ках печени и сердца плода, а также в плаценте (Spitalnik и соавт. [153]). Анти-Р-антителанайденывсывороткахлиц,имевшихфенотипP k.Kortekangas

и соавт. [83], Matson и соавт. [108] выделили анти-Р-антитела из сывороток лиц р, содержащих комбинированные антитела, адсорбцией эритроцитами P1 k или P2 k. Такие же антитела получили Watkins и Morgan [168], нейтрализуя сыворотку с комбинированными антителами жидкостью эхинококковых кист.

Большинство анти-Р-антител является смесью IgM и IgG (Lopez и соавт. [103], Soderstrom и соавт. [151], Yoshida и соавт. [176]) и иногда содержат фрак-

цию IgA (Hansson и соавт. [55]). В присутствии комплемента анти-Р-антитела IgM вызывали гемолиз эритроцитов Р1 и Р2 (Adinolfi и соавт. [2]).

Помимо аллоиммунных анти-Р-антител встречаются аутоиммунные антитела такой же специфичности. Их обнаруживали у больных пароксизмальной холодовой гемоглобинурией (Worlledge, Rousso [173]). Это один из вариантов аутоиммунной гемолитической анемии, развивающейся преимущественно у детей как осложнение перенесенной вирусной инфекции. Сыворотка крови таких больных содержит гемолизины, получившие название двухфазных гемолизинов Доната – Ландштейнера по имени авторов, впервые их описавших и предложившихсоответствующуюпробудляихопределения.ПробаДоната –Ландштейнера сводится к следующему: сыворотку выдерживают с эритроцитами при температуре 4–8  оС (I фаза – сенсибилизация), затем экспонируют в термостате при температуре 37  оС. При наличии в испытуемой сыворотке двухфазных гемолизинов эритроциты разрушаются (II фаза – гемолиз). Гемолиз происходит в присутствии комплемента, который содержится в исследуемой сыворотке.

В значительном числе случаев двухфазные гемолизины имеют анти-Р- специфичность, реагируют с эритроцитами Р1 и Р2, но не взаимодействуют с

501

эритроцитами р и P k (Heddle [57], Levine и соавт. [95], van der Hart и соавт. [160]).

Эти антитела относятся к классу IgG. Значительно реже встречаются двухфазные аутоиммунные гемолизины со специфичностью анти-I, анти-i, анти-Pr (Sokol и

соавт. [152]) и анти-р (Engelfriet и соавт. [41], Issitt и соавт. [67]).

При проведении пробы Доната – Ландштейнера для усиления реакции эритроциты обрабатывают папаином (Heddle [57], Sokol и соавт. [152]), сыворотки корригируют до слабокислого pH (Judd [70]).

Аутоиммунную гемолитическую анемию способны вызывать и однофазные аутоантитела анти-Р IgG-класса с температурным оптимумом между 20–32  оС

(Lindgren и соавт. [99], Mensinger и соавт. [110], Ries и соавт. [137]). Такие антите-

ла выявляли только в среде с низкой ионной силой, тест Доната – Ландштейнера с ними был отрицательным (Cohen и соавт. [30], Judd и соавт. [71]).

Крысиные МКА анти-Р (МС631) к эмбриональному стадиоспецифическому мышиному антигену (SSEA-3) перекрестно реагировали с эритроцитами Р1 и Р2, но не реагировали с эритроцитами р и P k. Их активность угнеталась трисахари-

дом GalNAcβ1 → 3Galα1 → 4Gal (Kannagi и соавт. [73],Tippett и соавт. [158]).

Мышиные МКА анти-Р IgM-класса, реагировавшие с очищенным глобозидом, вызывали сравнительно слабую холодовую агглютинацию, однако в присутствии комплемента наблюдали выраженный гемолиз эритроцитов Р + (Rouger и соавт. [139], von dem Borne и соавт. [163]). Другой образец мышиных МКА, полученных иммунизацией экстрактом из Escherichia coli, в серологических реакциях также показал анти-Р-специфичность. Однако активность этих антител устранялась Т-специфическим иммуносорбентом (Galβ1 →3 GalNAc-R) (Inglis и соавт. [66], Rouger и соавт. [139]).

Экстракты из лосося, форели и икры сельди реагировали с эритроцитами, содержащими антигены В, Р, Р1 или P k, но не агглютинировали эритроциты О(I) р или А(II) р (Anstee и соавт. [7, 8], Voak и соавт. [161, 162]). Антитела не сепарируются по специфичности дифференциальной адсорбцией, поэтому ценность указанных экстрактов в качестве реагентов невелика.

Антиген Pk и антитела анти-Pk

Антитела анти-P k и соответственно антиген P k открыты в 1959 г. Matson и соавт. [108] с помощью дифференциальной адсорбции сыворотки, содержавшей комбинированные антитела.

Особенностью лиц P k + является то, что их эритроциты не содержат часто встречающегося антигена Р, а в сыворотке крови присутствуют анти-Р-антитела. Кроме того, сыворотки слабо реагируют с эритроцитами р (Kortekangas и соавт. [83], Tippett [156]).

Антиген P k одинаково хорошо экспрессирован в эритроцитах независимо от

факторов Р1 и Р2.

Индивиды P k + встречаются крайне редко, реже, чем лица с нулевым фенотипом р (Daniels [37]). Все они были выявлены благодаря неизменному

502

присутствию в сыворотках их крови анти-Р-антител. Лица P k + были выявлены,

в основном, среди финнов и японцев (Daniels [37], Race, Sanger [133]).

Обращало на себя внимание, что родители пробандов P k + были P k −. Это давало основание полагать, что наследование гена P k имеет рецессивный характер

(Moullec и соавт. [119], Nakagima и соавт. [126], Race, Sanger [133]). Родители 7

индивидов P k + состояли в кровном родстве. Вместе с тем рецессивный характер наследования может представлять собой только видимость, поскольку вещество P k является предшественником субстанции Р, и стандартные серологические методы позволяют выявить его только у лиц Р − (гомозигот P k / P k).

По результатам прямых серологических тестов создавалось впечатление, что антиген P k является очень редким. Однако Fellous и соавт. [42] обнаружили его на фибробластах всех лиц Р1 и Р2; фибробласты лиц р этот антигена не содержали. Затем Naiki и Marcus [125] установили, что тригексозид церамида (Gb3) – один из основных мембранных гликолипидов эритроцитов – ингибирует активность антител анти-P k. Naiki и Kato [123] указали на присутствие P k на эритроцитах Р1 и Р2. Они высказали предположение, что ранее полученные результаты были ложноотрицательными, поскольку при адсорбции антител анти-Р1P k эритроцитами Р1 (содержащими Gb3), помимо анти-Р1-антител, из сывороток удалялась также и фракция анти-P k. Позднее присутствие антигена P k на эритроцитах Р1 и Р2 подтвердили с помощью МКА анти-P k. Слабую экспрессию антигена P k объяснили неполным превращением глобозида 3 в глобозид (антиген Р).

Антиген P k лучше экспрессирован на эритроцитах LKE −, чем LKE + (см. Антиген LKE).

Антиген P k, идентифицированый как CD77, присутствует на лимфоцитах, гранулоцитах, моноцитах, тромбоцитах, клетках гладкой мускулатуры пищеварительного и мочеполового тракта (Kasai и соавт. [75]), клетках злокачественных опухолей (Bono и соавт. [15], Wiels и соавт. [170]) и считается информативным при диагностике лимфомы Беркитта. Полагают, что CD77 участвует в апоптозе клеток зародышевых центров В-лимфоцитов (Khine и соавт. [80], Mori и соавт. [117]). Связывание CD77 и CD19 (специфический В-клеточный маркер) в дальнейшем приводит к апоптозу В-клеток (Mangeney и соавт. [104]).

Аллоиммунные антитела анти-P k присутствуют одновременно с анти-Р и анти-Р1 в сыворотках крови лиц нулевого фенотипа р. Их выделяли из некоторых сывороток адсорбцией эритроцитами Р1 (Race, Sanger [133], Tippett [156]). Такие антитела реагируют одинаково интенсивно с эритроцитами Р1 и Р2. Активность антител анти-P k нейтрализуется жидкостью эхинококковых кист (Kortekangas и соавт. [84], Matson и соавт. [108]). Используя метод ингибиции анти-P k-антител различными фракциями эхинококковой жидкости и олигосахаридами известной структуры, Watkins и Morgan [168] пришли к выводу, что антитела анти-P k имеют более широкую специфичность, чем анти-Р1. Установлено, что дисахарид Galα1 → 4Gal, выделенный из P1 k-специфичного гликопротеина жидкости эхинококка, так же как Р1-специфический трисахарид

503

и олигосахариды, имеющие группировку Galα1 → 4Gal, ингибирует активность антител анти-P k (Naiki и соавт. [123]).

Помимо аллоиммунных антител, описаны аутоиммунные анти-P k-антитела, которые находили у больных аутоиммунной гемолитической анемией и билиар-

ным циррозом печени (Race, Sanger [133]).

Иммунизацией крыс клетками лимфомы Беркитта были получены моноклональные анти-P k-антитела (Wiels и соавт. [170]), реагирующие с Gb3. Эти антитела реагировали в высоком титре с клетками P1 k и P2 k, слабо реагировали с папаинизированными эритроцитами Р1 и Р2 и давали отрицательные реакции с эритроцитами нулевого фенотипа р.

Другие образцы МКА анти-P k получены иммунизацией мышей синтетическими гликопротеинами, содержащими P k-специфические компоненты, глобозидом 3, выделенным из эритроцитов свиней и клеточных линий плоскоклеточной карциномы пищевода (Kasai и соавт. [75], Miyamoto и соавт. [113]).

Антиген LKE (Luke)

Антиген LKE обнаружили Tippett и соавт. [159] в 1965 г. Сыворотка анти-LKE была получена от негра по имени Luke Р., страдавшего болезнью Ходжкина. Она напоминала известные к тому времени сыворотки анти-Р, поскольку не реагировала с эритроцитами р и P k. Однако отрицательные реакции наблюдали также с некоторымиобразцамиэритроцитовР1 иР2,чтоотличалоанти-LKE-антителаотанти-Р.

В 1985 г. были получены моноклональные антитела к мышиному стадиоспецифическому эмбриональному антигену (SSEA-4) (Kannagi и соавт. [73]), специфичность которых практически совпадала со специфичностью антител сыворотки Luke (Tippett и соавт. [158]). Как показал биохимический анализ, структура, с которой реагировали указанные антитела, содержала терминальную группировку NeuAcα2 → 3Galβ1 → 2GalNAc, сиаловую кислоту и галактозу, присоединенную к глобозиду. Именно эта структура распознается антителами антиLKE и анти-SSEA-4.

Популяционные исследования среди англичан, проведенные Tippett и соавт. [158, 159]сиспользованиемсывороткиLuke,атакжеМКАанти-SSEA-4,показали98,84 % положительныхрезультатов(LKE + );1,16 %отрицательных(LKE −).Частотагеноти-

повLKE  +/LKE  +составила0,7962;LKE  +/LKE  −  −0,1922;LKE  −/LKE  − −0,0116.

Фенотип LKE − обнаружен у представителей различных расовых и этнических групп:англичан,шотландцев,итальянцев,французов,евреев,арабов,турок,негров.

Посемейные исследования показали, что ген LKE независим от локусов, контролирующих другие антигенные системы эритроцитов (MNS, P1, RH, LU, KEL, FY, XG), а также выделительство.

При проведении популяционных исследований отмечено, что экспрессия антигена LKE варьировала в широких пределах. Фенотип LKEw (weak) встречался чаще у лиц лиц Р2, чем у лиц Р1, а также чаще среди лиц, имеющих группу крови А1 и А1В, по сравнению с людьми, имеющими группу крови О, В, А2 и

504

А2В. Однако второй образец аллогенных анти-LKE-антител не показал какихлибо ассоциаций с группой Р и АВО (Daniels [37]).

Антиген LKE хорошо выражен к моменту рождения (Bruce и соавт. [22], Tippett и соавт. [158]). Он обнаружен в клеточных линиях тератомы человека (Kannagi и соавт.[73]),вганглиозидах,выделенныхизтромбоцитов(Coolingисоавт.[32]).

Экспрессия антигена LKE не зависела от наличия антигена Р. Лица LKE − присутствовали среди индивидов Р1 и Р2. Отмечена некоторая фенотипическая связь с антигеном P k. Последний лучше выражен на эритроцитах Р + LKE − (Bruce и соавт. [22]).

Известно 5 образцов антител анти-LKE аллогенного происхождения. Первый из них найден у больного лимфомой, не получавшего гемотрансфузий (Tippett и соавт. [159]). В серологических реакциях антитела проявляли себя как агглютинины, выраженность реакций усиливалась по мере снижения температуры, такой же эффект давало энзимирование эритроцитов трипсином, фицином и папаином. Свежая сыворотка Luke вызывала гемолиз папаинизированных клеток. Антитела анти-LKEнеингибировалисьжидкостьюкистэхинококкаилислюнойлицLKE +. Позднее было найдено еще 4 сыворотки указанной специфичности (Bruce и соавт. [22], Moller, Jorgensen [114]), в одном случае анти-LKE-антитела сочетались с анти-Р ([114]). У новорожденных LKE +, родившихся от матерей с наличием анти-LKE-антител, проявлений ГБН не отмечено ([22, 114]).

Фенотип р и антитела анти-РР1Рk

В 1951 г. Levine и соавт. [94] описали антитела, присутствовавшие у пациентки с карциномой желудка. Последние реагировали со всеми образцами эритроцитов, за исключением собственных и эритроцитов сестры. Антитела были обозначены анти-Tj a (T – тумор, j – по имени больной). Ассоциацию антигена Tj a с системой Р установила Sanger [142], обнаружившая 6 неродственных лиц с фенотипом Tj(a −), не содержавших антигенов Р. По предложению Sanger фенотип Tj(a −) был переименован в р. Его возникновение интерпретировали как фенотипическое проявление гомозиготности по рецессивному аллелю локуса Р1.

Фенотип р встречается редко – 1 на 172 тыс. обследованных. По расчетам

Race и Sanger [133], частота гена р составляет 0,0024.

При обследовании более миллиона китайцев Гонконга он не найден ни разу (Lin и соавт. [98]), однако присутствовал среди японцев. Из 40 149 обследованных шведов 8 имели фенотип р (Cedergren [26]).

Посемейными исследованиями, в том числе в изолятах, показан рецессивный характер наследования гена р (Catino и соавт. [25], Miwa и соавт. [112], Salmon и соавт. [141], Yamaguchi и соавт. [174]). Родители лиц с фенотипом р часто оказывались кровными родственниками.

Полагают, что фенотип р обусловлен гомозиготностью по мутантному гену, кодирующему Gb3-синтазу. Этот фермент обеспечивает превращение лактозилцерамида в глобозид-3 (Furukawa и соавт. [50], Steffenson и соавт. [155]). Точковые

505