Материал: Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

Naiki, Marcus [125] идентифицировали антиген P k как Gb3 (глобозид 3) с наличием галактозного остатка.

Анализ мембранных гликосфинголипидов показал, что Gb3 отсутствует на эритроцитах нулевого фенотипа р, однако содержится в повышенном количе-

стве на эритроцитах P k + (Koscielak и соавт. [85], Marcus и соавт. [107]). Как было показано Nudelman и соавт. [128], моноклональные антитела анти-P k хорошо связываются с Gb3.

Brodin и соавт. [18] получили несколько образцов мышиных моноклональных анти-P k-антител иммунизацией животных синтетическими гликопротеинами с присоединенной трисахаридной группировкой Galα1 → 4Galβ1 → Clc.

При изучении мембранных гликосфинголипидов, выделенных из эритроцитов Р1 и Р2, установлено присутствие на обоих типах клеток глобозида 3 в качестве общего компонента мембраны (Naiki, Markus [124, 125], Markus и соавт. [105, 106]). Полученные авторами данные свидетельствуют о том, что антиген P k в действительности встречается чаще, чем это было ранее показано с помощью серологических методов исследования.

Антиген Р (глобозид)

Гликопротеины, угнетающие активность антител анти-Р1 и анти-P k, не реагировали с антителами анти-Р. Причина такого реагирования вскоре стала понятной. Naiki и Matson [125], используя технику ингибиции антител, установли, что антиген P k представлен глобозидом 3 (Gb3), а антиген P – глобозидом 4 (Gb4). Было показано, что Gb4 отсутствует на эритроцитах P k и содержится в следовых количествах на клетках р (Kundu и соавт. [86], Marcus и соавт. [107]).

Глобозиды являются наиболее представительными мембранными гликолипидами: на одной клетке может присутствовать до 14 млн молекул (Anstee [6, 8], Fletcher и соавт. [45]). Вариант глобозида Gb3 (P k) содержит дополнительный N-ацетилгалактозаминовый остаток (см. табл. 7.2).

Моноклональные антитела анти-Р ингибировались глобозидами, имеющими терминальные группировки GalNAcβ1 → 3Galα1 → 4Gal и Galβ1 → 3GalNAcβ1 → 3Gal (Kannagi и соавт. [73]). Один из образцов моноклональных анти-Р-антител нейтрализовался иммуносорбентом Galβ1 → 3GalNAc-R, обладающим специфичностью Т-антигена (Inglis и соавт. [66]). Анти-Р-антитела аллогенного происхождения с указанным дисахаридом не реагировали.

Эритроциты р, несмотря на отсутствие в их мембране глобозидов Gb3 и Gb4, каких-либо морфологических и функциональных отклонений от нормы не имеют. Они содержат лактозилцерамид и другие комплексные гликолипиды в более высокой концентрации, чем эритроциты Р1 (Kundu и соавт. [89], Marcus и соавт. [107], Wiels и соавт. [171]).

Высокая концентрация глобозидов зарегистрирована в почках (Kundu и со-

авт. [87]).

511

Антиген LKE

Антиген LKE [см. Антиген LKE (Luke)] перекрестно реагирует с моноклональными антителами к мышиному стадиоспецифическому эмбриональному антигену (SSEA-4). Химическая структура позволила отнести его к глобозидам

(Daniels [37], Kannagi и соавт. [73]).

Генетика

Подобно тому, как это имеет место в системе АВО, продуктом генов локуса Р являются не сами антигены, а гликозилтрансферазы. Антигены, распознаваемые специфическими антителами, образуются в результате присоединения углеводных группировок к терминальным участкам субстратапредшественника. Возникновение нулевого фенотипа р связано с мутациями гена α4Gal-T (табл. 7.3).

Pk -синтаза

Ген α4Gal-T1, обусловливающий фенотипические различия Р1 и Р2, картирован на хромосоме 22 (22q13.2). В этом регионе секвенирован участок, кодирующий α1,4-галактозилтрансферазу, которая присоединяет галактозу к лактозилцерамиду (глобозиду 2) с образованием глоботриозилцерамида (глобози-

да 3), или антигена P k(Gb3) (Furukawa и соавт. [50], Steffenson и соавт. [155]).

Ген α4Gal-T1 представлен двумя экзонами, его гомологи, помимо млекопитающих, найдены у насекомых и растений (Keuch и соавт. [79]).

Р-синтаза

В последние годы удалось картировать и клонировать ген, кодирующий трансферазу β3GalNAc-T1. Указанный фермент обеспечивает присоединение N-ацетилгалактозаминового остатка к глобозиду 3 (P k), в результате чего происходит превращение вещества P k в антиген Р (Almeida и соавт. [4, 5],

512

Kijimoto-Ochiai и соавт. [82], Okajama и соавт. [129]). Ген β3GalNAc-T1 незави-

сим от других групповых антигенов крови, он представлен одним экзоном, расположенным в позиции 3q25. Последнее послужило основанием присвоить антигену Р статус групповой системы эритроцитов – GLOB (028) [136]. Вещество P присутствует в различных тканях организма: головном мозге, миокарде, легких, тестикулах, почках, печени, селезенке, желудке, плаценте. Степень экспрессии в органах варьирует в широких пределах.

Р1-синтаза

Считается, что Р1-синтаза представляет собой разновидность α1,4-галакто- зилтрансферазы, которая способна превращать параглобозид в антигенную субстацию Р1 (Furukawa и соавт. [50], Steffenson и соавт. [155]) и, возможно, р (Iizuka и соавт. [64]).

Предложены 2 генетические модели биосинтеза вещества Р1, Р и ассоциированных с ними антигенов, которые в той или иной мере объясняют зависимость Pp-фенотипа от синтеза глобозидов и параглобозидов (Fletcher и соавт. [45], Kundu и соавт. [89] и др.).

Одна из моделей, предложенная Graham и Williams [51], предполагает существование 2 локусов: Р и Р1.

––P1k кодирует α1,4-галактозилтрансферазу, которая превращает параглобозид и лактозилцерамид в вещества P k и Р1;

––P k кодирует α1,4-галактозилтрансферазу, способную преобразовать лактозилцерамид в вещество P k;

––р – молчащий аллель, в присутствии которого антигены P k и Р1 не образуются.

Локус Р представлен двумя аллелями: Р + и Р–, последний из них – молчащий.

Согласно этой модели, у родителей р × Р2 не должно быть детей с группой Р1, что подтверждено результатами посемейных исследований.

Naiki и Marcus [124] предложили трехлокусную модель: Р, P k и Р1 с вариантом Р1 +. Эта модель допускает возможность рождения детей с группой Р1 у родителей р × Р2. Однако в действительности такой комбинации ни разу не наблюдали. Предположение о сцепленности генов P k и Р1 на хромосоме не подтвердилось в экспериментах по секвенированию региона 22q13.2 генома человека

(Steffenson и соавт. [155]).

513

Связь антигенов Р, GLOB с патологией Рецепторы для микробов и вирусов

Кишечнаяпалочка(Escherichiacoli),вызывающаяпиелонефритидругиерецидивирующие воспаления мочеполового тракта, прилипает к эпителию слизистой оболочки с помощью адгезинов – лектиноподобных веществ, расположенных на поверхностибактериальнойклетки(Lingwoodисоавт.[102],Stapletonисоавт.[154]).

Адгезины связываются с гликоконъюгатами глобозидов, содержащими дисахарид Galα1 → 4Gal, а также сиалозил- и дисиалозилгалактозил (Elder, Spitalnik [40], Lindstrom и соавт. [101], Moulds и соавт. [118]). Указанные вещества со-

ставляют основу специфичностей Р1, Р, P k, LKE и других антигенов, объединенных в систему Р и GLOB.

Как показали Kallenius и соавт. [72], способность уропатогенных штаммов Escherichia coli связываться с эритроцитами и эпителиальными клетками лиц, имеющих фенотип р, снижена. Следовало ожидать, что лица, имеющие группу крови р, резистентны к урогенитальным инфекциям, однако изучение коррелятивной связи фенотипа Р1 с урогенитальными инфекциями не дало однозначных результатов (Kallenius и соавт. [72]) .

Некоторые штаммы Escherichia coli выделяют энтеротоксины, в частности веротоксин, подобный токсину Шига, который продуцируют бациллы Shigella dysenteriae. Веротоксин вызывает воспаление слизистой оболочки тонкой кишки, диарею, инициирует гемолитический уремический синдром (Green [52], Elder, Spitalnik [40]). Р-группоспецифический дисахарид Galα1 → 4Gal выступает в роли лиганда, фиксирующего веротоксин на эпителии слизистой оболочки.

Свиной стрептококк (Streptococcus suis), один из возбудителей менингита человека, способен связываться с веществом P k – трисахаридом Galα1 → 4Galβ1 → 4Glc. Препараты их этих бактерий сильнее агглютинировали эритроциты P1 k и P2 k по сравнению с Р1 и Р2, но не вызывали склеивания эритроцитов р

(Haataja и соавт. [53]).

Антиген Р (глобозид) является клеточным рецептором для парвовируса В19, проявляющего высокую тропность к костномозговым клеткам, особенно к эритроидным предшественникам, в которых он реплицируется (Brown и соавт. [20]). Оболочки лизированного вируса В19 вызывали агглютинацию эритроцитов Р1 и Р2, но не реагировали с эритроцитами P k и р. Цитотоксичность парвовируса в клеточной культуре удавалось предотвратить с помощью моноклональных антител анти-Р. Антитела анти-Р1 и анти-P k цитотоксичность указанного вируса не отменяли. Цитотоксичность не наблюдали в культурах костномозговых клеток, полученных от лиц р (Brown и соавт. [19–21]).

При двойном иммунном окрашивании клеток костного мозга, инфицированных парвовирусом В19, установлено, что вирусные частицы адсорбируются на клетках, экспрессирующих антиген Р (Kerr и соавт. [78]).

514

Лица, имеющие фенотип р, оказались невосприимчивы к парвовирусной ин-

фекции В19 (Kerr и соавт. [78]).

Имеются данные, что лиганд Gb3 (P k) может выступать в роли кофактора, способствующего проникновению вируса иммунодефицита человека HIV-1 в

Т-клетки (Hammache и соавт. [54], Puri и соавт. [132]).

Невынашивание беременности

Частота привычных выкидышей (ранних спонтанных абортов) существенно выше среди женщин с фенотипом р, чем в популяции в целом. У многих женщин фенотип р были выявлен именно по этой причине.

Прерывание беременности, обусловленное анти-Р-антителами, происходит в I триместре беременности. Если этого не происходит, беременность развивается нормально и завершается рождением здорового ребенка. У большинства детей Р1 и Р2, родившихся от матерей группы р, ГБН не развивается (Sheedan и соавт. [148], Yamaguchi и соавт. [174]), хотя легкие формы указанной патологии в ряде случаев были описаны (Hayashida и соавт. [56], Levene и соавт. [91]).

Установлено (Cantin, Lyonnais [24], Levine и соавт. [97], Weiss и соавт. [169]),

что причиной ранних самопроизвольных выкидышей у женщин, имеющих группу крови р, являются антитела анти-РР1P k. Какая именно фракция этих антител обусловливает указанную патологию, пока неизвестно.

Ikin и соавт. [65] и Levine [92] полагали, что невынашивание беременности обусловлено анти-Р1-фракцией, поскольку антиген Р1 формируется у эмбриона на ранних стадиях внутриутробного развития. Sanger и Tippett [143] не разделяли эту точку зрения, поскольку у женщин р, имевших мужей Р1 и Р2,рождались и здоровые дети, при этом соотношение детей Р1:Р2 не отличалось от имеющегося в популяции в целом.

Kato и соавт. [76] связывают невынашивание беременности с анти-P k-антителами: антиген P k также хорошо выражен в растущих тканях развивающегося эмбриона.

Lopez и соавт. [103]) установили, что в 75 % случаев антитела анти-P k обладают in vitro цитотоксическими свойствами и, следовательно, способны вызвать патологию in vivo.

Энзимные и радиоиммунные тесты показали, что сыворотки крови почти всех лиц, имеющих фенотип р, содержат антитела анти-РР1P k IgG3-субкласса

(Rydberg и соавт. [140], Soderstrom и соавт. [151]), которые, как известно, могут преодолевать плацентарный барьер.

В гликосфинголипидах, выделенных из тканей спонтанно абортированных 12- и 17-недельных плодов, антигены Р и P k обнаруживали в следовых количествах. В то жевремягликосфинголипиды,выделенныеизплацент,хорошоэкспрессировалиуказанные антигены (Lindstrom и соавт. [100]). Таким образом, мишенью для антител, обусловливающихневынашиваниебеременности,являетсянеплод,аплацента.

515