Материал: Melnuchuk_Promuslova biotexnologij

РОЗДІЛ 1. ОРГАНІЗАЦІЯ ДОСЛІДЖЕНЬ З ПРОМИСЛОВОЇ БІОТЕХНОЛОГІЇ

Рис.1. Ламінарний бокс

Конструкція ламінарного боксу дозволяє працювати в стерильних умовах з мікроорганізмами в нестерильному приміщенні.

Асептичні умови в ламінарі створюються за рахунок струменя стерильного повітря, забір якого відбувається з приміщення, і який стерилізується, проходячи через бактерицидні фільтри. Ламінарний рух повітря – рух, при якому хвилі повітря рухаються паралельно, обтікаючи перепони рівномірними шарами. Потік повітря, проходячи через ламінар, рухається до дослідника, що дозволяє звільнити внутрішній простір ламінарну від спор мікроорганізмів. Таким чином, посіви мікроорганізмів проводяться в потоці стерильного повітря, що пройшов через бактерицидні фільтри та розподілився всередині ламінарну у вигляді ламінарного потоку (без завихрень). Однак в ламінарі слід працювати біля полум’я спиртівки.

Інша назва ламінарного боксу – установка обезпилювання з горизонтальними або вертикальними потоками повітря (УО-БГ або УО-БВ, Ужгород або КПГ-1М; ШЛВ-1 або ШЛВ -2а-01в, м.Харків, «БіоаАналітичні Технології»).

1.2. Посуд, інструменти та матеріали

Лабораторія повинна бути укомплектована приладами й обладнанням, необхідним для роботи з різними групами мікроорганізмів з урахуванням особливостей їх біології, а також для проведення дослідів і виконання аналізів різних матеріалів (рис.2.).

Рис. 2. Інвентар, необхідний для проведення лабораторних робіт

11

РОЗДІЛ 1. ОРГАНІЗАЦІЯ ДОСЛІДЖЕНЬ З ПРОМИСЛОВОЇ БІОТЕХНОЛОГІЇ

Влабораторії для роботи з мікроорганізмами необхідно мати наступне обладнання:

-петлі та голки бактеріологічні (рис.3);

-шпателі скляні та металеві;

-пінцети, ножиці, скальпелі, шприци;

-ємності з дезінфікуючими розчинами; олівці по склу;

-газові або спиртові пальники;

-самплери (автоматичні піпетки або дозатори);

Рис.3. Бактеріологічні голка (а), гачок (б) та петля (в).

-набір стерильного посуду (чашки Петрі, пробірки, колби, мірні пляшки, піпетки градуйовані, скляні матраци тощо).

–набір фарб і реактивів для фарбування препаратів;

–пристрої для фарбування препаратів;

–скельця предметні та покривні; скельця з лунками;

–штативи для пробірок;

–негігроскопічна вата і марля з метою виготовлення ватно – марлевих пробок, ватних пробок для піпеток й скляних трубок, дезінфекції та стерилізації робочих поверхонь, інструментів, рук, для фільтрування середовищ

–прибори для фільтрування (фільтри Зейтца, бактеріальні фільтри

різної конструкції тощо).

Якщо використовується одноразовий пластиковий мікробіологічний посуд (пробірки, піпетки, чашки Петрі), необхідно мати спеціальне обладнання для його дезінфекції та утилізації.

1.3. Правила роботи в лабораторії промислової біотехнології

Співробітники мікробіологічних лабораторій та студенти на лабораторних заняттях повинні пам’ятати, що вони працюють із культурами мікроорганізмів, які не завжди є нешкідливими для здоров’я людини. Тому, при роботі в лабораторії промислової лабораторії необхідно завжди дотримуватись правил безпеки:

1.До приміщення лабораторії заборонено заходити без спеціального одягу - халату.

2.Забороняється заносити до лабораторії сторонні речі.

3.Робоче місце мікробіолога повинно бути добре освітленим та зручним.

4.Працювати у лабораторії дозволяються лише у спецодязі (халаті) з прибраним волоссям.

5.Не дозволяється виходити за межі лабораторії в халатах або одягати верхній одяг на халат.

6.Двері лабораторії повинні бути постійно зачиненими.

12

РОЗДІЛ 1. ОРГАНІЗАЦІЯ ДОСЛІДЖЕНЬ З ПРОМИСЛОВОЇ БІОТЕХНОЛОГІЇ

7.У приміщенні лабораторії не дозволяється приймати їжу, не допускається зайвих розмов і непотрібних переходів. Працювати бажано сидячи.

8.При використанні біологічного матеріалу не дозволяється ставити посуд, який містить матеріал для дослідження, безпосередньо на стіл. Для цього використовуються підноси або кювети, посуд попередньо протирають ззовні дезінфікуючим розчином.

9.У випадках пошкодження посуду з мікробіологічним матеріалом або його витіканням слід негайно повідомити відповідальну особу і

провести заходи для обеззараження забрудненого одягу, частин тіла, предметів робочого місця.

10.При роботі з мікробіологічним матеріалом необхідно використовувати загальноприйняті технічні прийоми, які виключають можливість контакту рук з мікробіологічним матеріалом.

11.Користуватися лише своїм робочим місцем і прикріпленим до нього обладнанням.

12.Всі посіви мають бути підписані.

13.Під час роботи підтримувати чистоту та порядок. Уникати зайвих рухів руками над відкритими чашками Петрі. Всі реактиви та барвники ставити на свої місця, не класти на столи пробки від пробірок, піпетки, бактеріологічні петлі.

14.Використані піпетки, предметні й покривні скельця, шпателі і т.д. поміщають у дезінфікуючий розчин. Пінцети, бактеріологічні петлі фламбують у полум’ї пальника і ставлять у штатив.

15.Усі використані матеріали (відпрацьовані пробірки з культурами мікроорганізмів, інфіковані матеріали) знешкоджують в автоклаві. Ця робота виконується співробітниками лабораторії.

16.Інструменти, які використовувалися в роботі, та поверхню робочого столу необхідно дезінфікувати.

17.Необхідно також пильно слідкувати за чистотою рук - по закінченні роботи руки дезінфікуються.

18.Після закінчення роботи поставити в термостат засіяні чашки й пробірки. Культури мікроорганізмів і залишки досліджуваного матеріалу необхідно здати викладачеві, а робоче місце привести в порядок і продезінфікувати.

19.Необхідно проводити вологе прибирання і періодичну дезінфекцію всіх робочих приміщень.

1.4. Ведення лабораторного журналу

Журнал лабораторних робіт є документом, що дозволяє контролювати правильність отриманих результатів, їх узагальнювати і аналізувати. Записи роблять ретельно і розбірливим почерком, у певному порядку:

13

РОЗДІЛ 1. ОРГАНІЗАЦІЯ ДОСЛІДЖЕНЬ З ПРОМИСЛОВОЇ БІОТЕХНОЛОГІЇ

1 – дата досліджень;

2 – об’єкт досліджень;

3 – мета досліджень;

4 – умови проведення досліду;

5 – основні методи досліджень і аналізу; 6 – отримані результати (як правило, оформляють у вигляді таблиці, графіка, діаграми);

7 – аналіз отриманих результатів, оформлення висновків.

14

РОЗДІЛ 2. ОСОБЛИВОСТІ ОРГАНІЗАЦІЇ ПЕРЕДФЕРМЕНТАЦІЙНОЇ СТАДІЇ БІОТЕХНОЛОГІЧНИХ ВИРОБНИЦТВ

РОЗДІЛ 2. ОСОБЛИВОСТІ ОРГАНІЗАЦІЇ ПЕРЕДФЕРМЕНТАЦІЙНОЇ СТАДІЇ БІОТЕХНОЛОГІЧНИХ ВИРОБНИЦТВ

Процес стерилізації є одним з найнеобхідніших заходів у практиці промислової біотехнології. Процедурі стерилізації підлягають мікробіологічні середовища, посуд, інструменти, деякі пристрої. Це робиться з метою недопущення розвитку сторонніх мікроорганізмів при роботі з досліджуваними культурами.

Стерилізація (від лат. sterilis – безплідний) – це повне знешкодження матеріалу від вегетативних клітин мікроорганізмів та їх форм спокою (спор, цист та ін.).

Для стерилізації використовують різні методи, які можна поділити на фізичні та хімічні.

Можливість і доцільність застосування того чи іншого способу визначається особливостями матеріалу, що підлягає стерилізації, його фізичними і хімічними властивостями, метою дослідження. Найчастіше в практиці промислової біотехнології застосовується термічна стерилізація.

2.1.Фізичні методи стерилізації 2.1.1. Термічні методи (дії високих температур)

а)прожарюванням в полум'ї пальника

стерилізують безпосередньо перед використанням платинові металеві частини мікробіологічної петлі, дрібні металеві інструменти.

При цьому необхідно пам’ятати, що найвищою є температура у верхній та периферійних частинах полум’я пальника (рис. 4).

Рис. 4. Значення температури

(у 0C) в різних частинах полум’я пальника

б)стерилізація сухим жаром (гарячим повітрям у сушильній шафі). Таким чином стерилізують, в основному, лабораторний посуд, який складають у спеціальні бікси або загортають у папір. Проводиться у спеціальних сухожарових шафах за різних режимів (табл.1).

Перед стерилізацією пробірки і колби закривають корками. Ватномарлеві корки не тільки захищають посуд та його вміст від попадання сторонніх мікроорганізмів, але на відміну від інших (гумових, алюмінієвих, пластмасових), забезпечують повітрообмін із зовнішнім середовищем. При стерилізації скляних піпеток їх верхні кінчики також закривають шматочками вати. При роботі з ними доцільно користуватися

15