Материал: Arutyunov - Voennaya epidemiologiya 2013

5. Этапы, методы, схемы и очередность проведения индикации БС

Специфическая индикация – определение с помощью лабораторных методов микробиологического анализа вида микроба, использованного противником в качестве средства (агента) бактериального нападения.

Специфическая индикация осуществляется в три этапа:

-отбор проб внешней среды;

-транспортировка;

-лабораторные исследования.

Индикация БС проводится в следующей очередности:

-регистрация и сортировка всех поступающих в лабораторию проб;

-первичная обработка и подготовка материала для анализа;

-исследование материалов проб поэтапно;

-оценка результатов анализа и выдача ответов.

Регистрация и сортировка проб предусматривает:

-увлажнение сухих материалов пробы небольшим объемом физраствора;

-определение очередности исследования проб и порядок их усреднения.

Первичная обработка и подготовка материалов для анализа предусматривает:

-приготовление нативных материалов мазков или мазков-отпечатков на предметных стеклах для иммунофлюоресцентной микроскопии;

-перевод пробы (сухие и плотные материалы) в жидкую фазу и подготовку ее к исследованию;

-концентрированную физическими методами микроорганизмов, содержащихся в жидких пробах или суспензиях (при наличии больших объемов).

Мазки-отпечатки из нативного материала делают одновременно на 3-х

графленых стеклах и после высушивания и фиксации, окрашивают 1 стекло:

-бактериальной полигрупповой люминесцирующей сывороткой;

-полигрупповыми люминесцирующими сыворотками на риккетсии;

-полигрупповыми люминесцирующими сыворотками на вирусные агенты;

-полигрупповыми люминесцирующими сыворотками на патогенные грибки (кокцидиоидомикозы).

При положительном результате микроскопии, второе стекло при полном объеме индикации БС окрашивают типоспецифическими люминесцирующими сыворотками, например, при положительном результате микроскопии с бактериальной полигрупповой люминесцирующей сывороткой, второе стекло окрашивают в строгой последовательности на возбудители:

-чумы;

-туляремии;

-бруцеллеза;

-сибирской язвы;

46

-сапа;

-милиоидоза.

Микроскопируют и по результатам иммунофлюоресценции дают предварительный ответ. При отрицательном результате мазок повторяют, но уже с обогащенной пробой.

После перевода пробы в жидкую фазу и доведения ее до необходимого объема (22 мл), проводят постановку РНГА с полигрупповыми эритроцитарными диагностикумами на микропланшетах. При положительном результате в одной из групп

– РНГА повторяют, при полном объеме индикации БС, но уже с типоспецифическими диагностикумами. По положительным результатам люминесцентной микроскопии и РНГА выдается предварительный положительный ответ на наличие биологического агента. На этом завершается 1 этап индикации БС. На 1 этапе (сокращенном) используется только 1/3 пробы, и контрольные мазки отправляются на вышестоящий этап.

6. Порядок проведения индикации биологических средств в сокращенном объеме

СХЕМА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИНДИКАЦИИ БС В СОКРАЩЁННОМ ОБЪЁМЕ

ПРОБА

Исследования нативного материала пробы экспресс-методом с помощью полигрупповых диагностических препаратов в отношении условно-токсономических групп

Индикация БС в сокращенном объеме предусматривает:

1.прием, сортировку, регистрацию проб, первичную обработку и приготовление мазков-отпечатков из нативного материала;

2.анализ нативного материала с помощью метода люминесцентной микроскопии, полигрупповыми люминесцентными сыворотками на бактериальные, вирусные агенты, риккетсии и патогенные грибки;

3.анализ материала методом постановки РНГА с полигрупповыми эритроцитарными диагностикумами на микропланшетах.

4.при положительном результате люминесцентной микроскопии и РНГА выдается предварительный положительный ответ на наличие биологического агента;

47

5.на 1 этапе (сокращённом) исследуется только 1/3 часть пробы, а 2/3 пробы

иконтрольные мазки отправляются на вышестоящий этап для исследования в полном объёме;

6.при исследовании по сокращённой схеме, предварительный положительный ответ выдаётся через 1-3 часа, а при массовом поступлении проб – через 5 часов.

7. Понятие о полном объеме индикации и идентификации биологических средств, показания, к использованию полной (классической) схемы микробиологического анализа

ЕДИНАЯ СХЕМА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИНДИКАЦИИ БС

2-й этап

Исследование биологически обогащенных материалов пробы с помощью МФА и РНГА

48

В дополнение к индикации биологических средств в сокращенном объеме, полная схема индикации предусматривает:

1)постановку биопробы на ботулотоксин;

2)посев исследуемого материала на питательные среды;

3)биологическое обогащение исследуемого материала;

4)исследование биологически обогащенных материалов пробы с помощью метода флюоресцирующих антител и РНГА;

5)определение чувствительности БС к антибиотикам;

6)окончательный ответ по результатам индикации по полному объему выдаются через 48 часов.

При необходимости окончательного подтверждения отрицательных результатов индикации БС, а также во всех случаях, вызывающих сомнение или требующих контрольной проверки и выделения возбудителя в чистой культуре, материалы пробы подлежат дальнейшему исследованию с помощью общепринятых методов полного (классического) микробиологического (вирусологического) анализа. Эти исследования целесообразно проводить в специализированных (бактериологических, вирусологических или других) отделениях фронта и военных округов или в соответствующих союзных (республиканских) центрах индикации БС Гражданской обороны страны.

Полный микробиологический анализ

Приемы и методы полного (классического) микробиологического анализа длительны и трудоемки, так как предусматривают обязательное выделение чистой культуры возбудителя и его идентификацию (многократные пассажи на питательных средах, культурах клеток, куриных эмбрионах, лабораторных животных, применение различных серологических реакций и других микробиологических и иммунологических тестов). Как правило, в лабораториях военно-медицинской службы для специфической индикации БС они не применяются.

Их использование в обязательном порядке предусматривается только в случаях:

−продолжения исследования, когда результаты индикации оказываются сомнительными или отрицательными и требуется окончательное заключение о наличии или отсутствии в пробе БС;

−необходимости выделения из пробы чистой культуры возбудителя и изучения его особых свойств (вирулентности, устойчивости к имеющимся лекарственным препаратам и т.д.) при случаях выявления БС в воздухе, на объектах внешней среды или на материалах от первых заболевших людей и животных;

−проведения выборочных контрольных анализов и экспертизы пищевых продуктов, воды и других материалов, требующих для заключения об отсутствии в них БС всестороннего и полного микробиологического анализа.

Необходимость использования классических приемов анализа во всех других случаях определяется начальником лаборатории в зависимости от конкретной обстановки.

Проведение полного микробиологического (вирусологического) исследования в полевых условиях возлагается на территориальный ОСЭО и подразделения, выделенные командованием специально для этой цели.

49