Автореферат: Закономерности взаимоотношений биоценоза и физико-химических свойств ротовой жидкости при кариесе

Качественный и количественный состав микрофлоры полости рта изучен в зубном налете, слизистой оболочке языка, неба и щеки, содержимом кариозной полости.

При проведении бактериологического исследования учитывали: 1) общее количество микроорганизмов; 2) стрептококков: 3) лактобактерий; 4) стафилококков; 5) дрожжеподобных грибов; 6) энтеробактерий; 7) анаэробов.

Идентификация выделенных микроорганизмов проводилась на основании морфологических, культуральных, биохимических признаков в соответствии с классификацией Берджи (1980). Для оценки биохимических свойств стрептококков, стафилококков, энтеробактерий, анаэробов использовали тест-системы Strepto-test, Staphy-test, Entero-test, API-20А (Франция).

Плотность популяции определяли путем подсчета микроорганизмов в 1 г зубного налета, на 1 смІ слизистой оболочки (КОЕ/ед. субстрата).

Активность плазмокоагулазы изучали, используя стандартную методику с цитратной плазмой кролика согласно приказу №535 Министерства Здравоохранения СССР от 22 апреля 1985 г.

Гиалуронидазную активность определяли по методу Мак-Клина в модификации М.Ш. Могилевского и Л.С. Коган.

Оценку гемолитической и лецитиназной активности проводили, используя методики Г.Н. Чистовича (1961).

Активность каталазы бактериальных штаммов изучали по методу М.А. Королюк и соавт. (1988).

Определение ДНК-азной активности штаммов стафилококка проводили согласно приказу МЗ РФ от 22.04.1985 г. №585.

Полученные количественные значения были переведены в баллы. Индекс вирулентности стафилококков рассчитывали по Н.Г. Ходаковой (2008).

Определение чувствительности к антибиотикам проводили методом диффузных стандартных дисков производства ЗАО «НИЦФ» (г. Санкт-Петербург).

Все материалы были подвергнуты статистической обработке. Вычисления проводились в среде пакета STATISTICA 5.0, а также с использованием программы статистического и инженерного анализа MS Excel 97.

Результаты исследования и их обсуждение

Для выполнения поставленных задач обследовано 200 человек.

Анализ состояния зубочелюстной системы показал, что распространенность кариеса и его осложнений была высокой (100,0%), пломбированные и удаленные зубы выявлены также у всех больных (табл. 2).

Из данных табл. 2 явствует, что у обследуемых I группы среднее количество зубов, пораженных кариесом, было равно 2,96±0,5, у II группы - 6,08±0,7, в то время как в группе сравнения этот показатель составил 0,15±0,03 у. е., удельный вес удаленных зубов равнялся 2,0±0,4 и 3,1±0,7 у. е. соответственно (у здоровых лиц 2,5±0,5 у. е.).

Таблица 2. Состояние зубного ряда у лиц обследуемых групп по КПУ, Мm, у. е., %

Обращало внимание на то, что 34 человека из обследуемых имели по 2 кариозных зуба, 85 - по 4, 25 - по 8, 50 пациентов имели по 9 и более пораженных зубов. Количество пломбированных зубов у 60 обследуемых - 145, у 75 - 230 и у 59 - 280, в среднем составляло 3,71 на одного человека.

Составляющими элементами коэффициента КПУ у больных I группы был кариес, пломбированные и удаленные зубы, в то время как во II группе регистрировалось снижение показателя интенсивности кариеса и увеличение числа удаленных зубов.

Проведенный корреляционный анализ показателя КПУ выявил наличие взаимосвязи между изучаемыми параметрами у больных всех обследуемых групп.

Биологические свойства ротовой жидкости у лиц с кариозным процессом представлены в табл. 3, из которой видно, что наиболее стабильным признаком ротовой жидкости у пациентов с кариесом, как и у практически здоровых, был показатель рН среды, наблюдалось его снижение в зависимости от степени КА. Так, при низкой кариозной активности рН ротовой жидкости не имел достоверных различий с таковыми контрольной группой и составлял 6,8±0,2, при средней активности - 6,6±0,1 у. е., при низкой - 6,3±0,1. Таким образом, снижение рН приводит к проявлению декомпенсации кариозного процесса, замыкая порочный круг патогенеза.

Таблица 3. Биологические свойства ротовой жидкости у лиц с кариозном процессом, в зависимости от степени компенсированности, M±m

* - достоверность различий показателей, р<0,05

Из табл. 3 видно, что при вязкость слюны достоверно увеличивалась по мере усиления патологического процесса и при высокой кариозной активности была в 1,2 раза больше, чем в группе сравнения (р<0,05), также отмечено увеличение в слюне муцина. Уровень лизоцима в ротовой жидкости, напротив, динамично снижался и при низкой КА составил 1610,3±19,7 у. е., при средней КА - 1480,0±31,8 у. е., высокой - 600,0±43,6, что было в 2,5 раза ниже, чем в группе здоровых людей (р<0,05).

В дальнейшем интерес представлял анализ одного из показателей воспалительных процессов в полости рта С-реактивного белка.

Уровень этого белка в слюне здоровых людей был невелик и обнаруживался преимущественно в следовых реакциях, составляя в среднем 3,02 ± 0,05 у. е.

Анализ полученных данных по С-реактивному белку у обследуемых 1 группы показал, что уровень его в ротовой жидкости составил 638 ± 0,06 у. е., при этом у пациентов 2 группы его содержание увеличивалось до 8,00 ± 0,03 у. е., что заметно отличалось от физиологической нормы.

Учитывая это, представляло интерес установить, взаимосвязаны ли изменения биологических свойств ротовой жидкости, обеспечивающие неспецифическую резистентность, с некоторыми показателями стоматологического статуса у лиц обследуемых групп.

Анализ полученных данных показал, что низкий уровень продукции муцина у здоровых людей коррелировал с низким индексом гигиены (г = 0,30), а состояние слизистых оболочек через, активность кариозного процесса влияет на уровень КПУ (г = 0,50 и r =0,45). Достоверных корреляций в уровне секреции лизоцима и муцина установлено не было.

Проведение корреляционного анализа данных биологии полости рта у больных 1 группы выявило, что уровень рН слюны зависел от интенсивности кариозного процесса (г = 0,29), величина сопряжения изученных признаков достигала своих максимальных показателей у наблюдаемых 2 группы.

В дальнейшем представляло интерес рассмотрение вопроса о влиянии различных степеней резистентности зубов на состояние показателей биологии полости рта. С этой целью рассмотрены вышеуказанные показатели в зависимости от их степеней выраженности.

Полученные результаты очевидно демонстрируют, что в ротовой жидкости пациентов второй группы на фоне заболеваний кариесом наиболее отчетливо происходит снижение окислительно-восстановительного потенциала в кислую сторону (6,35 ± 0,19) и фермента мурамидазы равное 658,0 ± 103,4 у. е., который оказывает на микроорганизмы литическое и бактерицидное действие.

Анализируя структурные характеристики биологических жидкостей, в частности ротовой жидкости, по мнению Д.С. Саркисова (1981), А.К. Аюпова с соавт. (2007), можно с определенной долей вероятности судить о состоянии всего организма в целом.

Важное информационное значение для анализа состояния гомеостаза организма имеет не только системная организация биожидкостей, но и их построений в кристаллические структуры. Форма кристаллов определяется волновым градиентом между кристаллообразующими элементами и факторами окружающей среды. При патологических процессах происходят изменения на молекулярном и субмолекулярном уровнях, что оказывает соответствующее влияние на ауторитм кристаллоообразующих элементов и выражается в изменении формы фаций. При кажущейся хаотичности кристаллообразования распределение веществ в них происходит строго упорядоченно согласно аутоволновым процессам, происходящим в макроорганизме.

Выявленные различия в концентрации минеральных веществ в ротовой жидкости в зависимости от времени года нашли своё отражение при изучении кристаллической структуры фаций ротовой жидкости.

Рассмотрение процесса кристаллизации слюны при различных степенях активности кариеса установило прямо пропорциональную зависимость происходящих процессов, при этом выявлено уменьшение поколений, нарушение угла ветвления и присутствие содержания папоротникообразных структур.

При проведении морфометрического исследования кристаллограмм показано, что наибольшие отличия по изучаемым признакам определялись в летний и зимний периоды, в то время как в весенние и осенние месяцы достоверных различий по данным критериям зарегистрировано не было.

Наиболее значимыми качественными показателями являлись четкость кристаллической структуры, наличие кристаллов крестообразной формы, деформирующие и деструктивные изменения морфологического построения. Четкая кристаллическая решетка определялась в летние месяцы, однако именно в этот период времени обнаруживалась максимальная деформация кристаллов. Независимо от сезона в фациях ротовой жидкости здоровых людей отсутствовали ассиметричные кристаллы, кристаллы без ветвления неравномерные и (или) уплощенные структуры.

Среди количественных признаков наиболее информативными были: ширина краевой зоны, соотношение краевой и центральной зон, количество поколений кристаллов. Ширина краевой зоны значительно варьировала в зависимости от времени года и в зимний период была в 1,84 раза больше, чем в летний (р<0,05). Обращает внимание большое количество поколений кристаллов, с максимумом - в летние месяцы (6,74±0,29). Угол ветвления кристаллов вне зависимости от сезона был близок к прямому, амплитуда которого была в диапазоне 87,39±2,11 (зимой) - 93,48±1,82 (весной).

Итак, в результате проведенного комплексного изучения физико-химического состава ротовой жидкости установлено, что содержание минеральных веществ подвержено сезонным колебаниям: наибольшая концентрация минералов определяется в летние месяцы, наименьшая - в зимние. По-видимому, данный показатель является относительным, а не абсолютным и зависит от ряда факторов, таких как объём ротовой жидкости, вязкость, содержания белка.

Резкое снижение количества кристаллов, их деструктуризация и выпадение аморфных структур по всему полю зрения характеризует морфологическую картину средней формы резистентности кариеса. Ветвление кристаллов значительно уменьшено, при этом острые углы ветвления были хаотичны и чередовались с тупыми.

Изучение нативных препаратов фаций ротовой жидкости у пациентов с высокой степенью активности кариеса показало уменьшение, а на некоторых микрофотограммах - полную деминерализацию центральной зоны. Единичные аморфные кристаллы дополняли деградацию структурного построения, фиксируемую в слюне у данной категории обследуемых лиц.

Фации краевой зоны утратили структурированность, характеризующую данную зону у практически здоровых людей.

Установлено, что при компенсированном кариесе сохранялись переходные участки между центральной и краевой зонами, по периферии определялись единичные деформированные структуры.

При субкомпенсированном кариесе в фации ротовой жидкости в переходной зоне остаются единичные мостики, свидетельствующие о нарушении белковых ее составляющих.

Выявлено, что при декомпенсированном кариесе регистрируется более глубокая деструкция кристаллической решетки с полным стиранием границ между центральной и краевой зоной фации, что является крайним проявлением нарушения структуры биологической жидкости. При этом изменения в структуропостроении затрагивают не только минеральную составляющую, но и белковую компоненту. Являясь матрицей для создания биоструктуры жидкости, белковые молекулы образуются раньше, а в дальнейшем происходит интеграция минеральных комплексов в образовавшиеся белковые поры. В связи с этим, именно деградация белка является тем процессом, который приводит к необратимой перестройки фаций ротовой жидкости при декомпенсированном кариесе.

Поляризационная микроскопия при анализе фаций ротовой жидкости позволила установить прогрессивное снижение позитивных кристаллов в ряду: лица с интактным зубным рядом - пациенты с компенсированным кариесом - субкомпенсированным кариесом - дкомпенсированным кариесом.