Материал: Методическое пособие. Общая микробиология

4. Методы культивирования анаэробов. Демонстрация способов удаления кислорода из атмосферы роста и питательных сред для анаэробов. Посев почвы на среды Китта-Тароцци и Вильсон-Блэра (в трубки Вейон-Виньяля). Способ Фортнера.

5. Дифференциально-диагностические питательные среды: Плоскирева, Эндо, Левина и др. Посев различных культур бактерий на среды Плоскирева, Эндо и МПА.

Методические указания

1. Установить, соответствует ли внешний вид выросшей куль­туры внешнему виду колонии, из которой был сделан посев (поверхность, пигмент, прозрачность, консистенция культуры). Приготовить из выросшей культуры препарат-мазок, окрасить его фуксином Пфейффера и, установив форму бактерий и характер их взаимоположения. отметить, правильно ли был сделан пересев культуры.

2. Описать внешний вид колоний одного из двух видов бактерий, выросших на пластинках МПА. Приготовить препараты-мазки из описанных колоний, окрасить их фуксином Пфейффера и определить морфологию бактерии для каждого вида колоний. Одну из колоний пересеять на косячок для получения чистой культуры.

Протокол исследования колонии.

1.Размер колонии_______________________________________

2.Форма колонии_______________________________________

3. Поверхность колонии_________________________________

4. Края колонии________________________________________

5.Прозрачность колоний_________________________________

6.Пигмент_____________________________________________

7.Консистенция________________________________________

8.Форма бактерий______________________________________

9. Взаиморасположение бактерий_________________________

10.Латинское морфологическое название бактерий___________________________

3. Объяснить принципы конструирования сред "пестрого ряда"; а также характерные изменения последних, наступающие в результате ферментативной деятельности бактерии. Произвести посев на среды "пестрого ряда" культур кишечной палочки и фекального шелочеобразователя.

Помимо общепринятых сред, в состав "пестрого ряда" нередко включаются среды с другими углеводами, а также среда для определения уреазы - фермента, расщепляющего мочевину. Среда представляет собой мясопептонный бульон с добавлением 1-2% мочевины и индикатора фе­нолового красного. При разложении мочевины образуется аммиак, вызы­вающий изменение рН среды и соответственно желтой окраски индикатора, на красную.

4. Разобрать типы дыхания, их сущность и разницу, группы бактерий по типу дыхания. Перечислить и раскрыть сущность механических, физических, химических и биологических методов культивирования анаэробов.

Приготовить взвесь почвы в физиологическом растворе. С помощью пастеровской пипетки засеять 1-2 капли взвеси на среду Кита-Тароцци.

Сделать посев почвенной взвеси на среду Вильсон-Блера в трубки Вейон-Виньяля. Для этого исходная взвесь почвы последовательно разводится в трех пробирках с 10 мл физиологического раствора¹*. Несколько капель из последней пробирки засеять в расплавленную и остуженную до 42°-45° среду Вильсон-Блера. Среда с засеянным материалом переме­шивается и насасывается в трубки Вейон-Виньяля, которые после застывания среды запаивают и помещают в термостат.

1. Выделение чистых культур патогенных клостридий

Исследуемый материал:

Микроскопия и пересев на мясную или казеиновую среду колоний, вызывающих гемолиз, покраснение, опалесценцию или почернение на одной из указан­ных сред и состоящих из грамположительных палочек, для получения чистых культур и последующего изучения их свойств.

Среда Виллиса-Хоббс : смесь (400 мл бульона Хоттингера + 4,8 грамма агара; 4,8 грамма лактозы и 1,3 мл 1% раствора нейтрального красного) автоклавируют, охлаждают до 55-50 и добавляют 15 мл суспензии яичного желтка и 60 мл стерильного обезжиренного молока.

2. Причины высокой чувствительности строгих анаэробов к кислороду объясняют следующими обстоятельствами:

1. Отсутствием у них каталазы (в присутствии кислорода накап­- ливается перекись водорода, которая и оказывает бактерицидное действие на анаэробы).

2. В аэробных условиях тормозятся анаэробные энергетические процессы (пастеровский эффект).

3. Отсутствием у анаэробов систем регуляции окислительно- восстановительного потенциала. В присутствии кислорода он повы­- шается, анаэробы не могут понизить его до необходимого уровня, и поэтому их рост подавляется.

З А Н Я Т И Е 6

Дата ______________

Тема: Бактериологический метод (3 день). Идентификация чистых культур бактерий. Биохимическая активность бактерий.

Итоговое контрольное занятие «Морфология и физиология бактерий».

План занятия:

1. Ферменты бактерий. Регистрация результатов посева на среды пестрого ряда.

2. Регистрация результатов опыта с посевами бактерий на среды Эндо, Плоскирева и МПА.

3. Итоговый контроль по теме «Морфология и физиология бактерий».

Методические указания

1. Зарегистрировать результаты посева на среды «пестрого ряда» кишечной палочки и фекального щелочеобразователя. Ферментация углевода с образованием кислоты и газа обозначается буквами КГ; с образование только кислоты - буквой К. Свертывание молока и образование индола обозначается +; отсутствие ферментации углевода, свертывания молока или образования индола и сероводорода обоз­начается знаком -.

Результаты посева на среды “пестрого ряда”.

5. Записать состав среды Плоскирева и Эндо и характер их изменений при росте различных бактерий. Произвести посев культур кишечной палочки, фекального щелочеобразователя и стафилококка на среды Плоскирева, Эндо и МПА. Для этого чашка с каждой средой де­лится на три сектора и на каждый сектор с помощью петли засевается одинаковое количество культуры одного из микробов (культура рассеивается по всей поверхности сектора в виде газона). При посеве на разные среды и разных микробов следует стремиться засеять одинаковое количество бактерий и одинаковым способом для того, чтобы на следующем занятии можно было сравнить интенсивность роста.

Рецепт среды Эндо:____________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Рецепт среды Плоскирева:______________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Контрольные вопросы

Какие методы определения чистоты выросшей культуры Вы знаете?

Как можно по внешнему виду культуры определить ее чистоту?

В чем заключается микроскопический метод проверки чистоты вы­деленной культуры бактерий?

Для чего добавляется индикатор в углеводные среды "пестрого ряда"?

Какие различия между бактериоскопическим и бактериологическим анализами?

Какие углеводы чаше всего включаются в среды "пестрого ряда"?

Какой цвет имеет углеводная среда с индикатором Андреде в случае ферментации углевода?

Какого цвета углеводная среда с индикатором ВР, если бактерии потребляют углевод? Почему?

Как определяется способность бактерий ферментировать углеводы с образованием газа?

Как определяется индол в среде?

Как определяется уреазная активность бактерий?

Как определить способность бактерий образовывать H₂S?

Что такое анаэробиоз?

Кто открыл анаэробные бактерии?

Какие методы применяются для удаления кислорода из атмосферы роста и питательных сред для анаэробов?

В чем заключается метод выращивания анаэробов, предложенный Фортнером?

Какой состав имеет среда Вильсон-Блера?

Чём отличаются облигатные анаэробы от факультативных?

Что такое регенерация питательной среды и как она производится?

Какие изменения вызывают анаэробы на среде Тароцци?

Почему происходит почернение среды Вильсон-Блера при росте анаэробов?

Как выделяют чистые культуры анаэробных бактерий?

Какой состав имеют среды Эндо, Левина, Плоскирева?

Почему среда Плоскирева обладает бактериостатическим действие?

Для чего в среды Плоскирева, Эндо, Левина добавляется молочный сахар (лактоза)?

Почему колонии кишечной палочки на средах Эндо, Левина и Плоскирева окрашены?

Какие бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева вырастают в виде бесцветных колоний?

Приложение к ЗАНЯТИЮ 5.

Заключение:_____________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

2. Отметить различия в характере роста кишечной палочки и фекального щелочеобразователя (размер, прозрачность и окраска колоний на средах Плоскирева и Эндо), а также интенсивность роста их и стафилококка на средах Плоскирева, Эндо и МПА. В случае роста бактерий в виде отдельных колоний подсчитать количество колоний каждо­го вида бактерий на всех средах. Результаты зарисовать и зарегистрировать в таблице .

Результаты посева на среды Плоскирева, Эндо, мпа

3. Вопросы к итоговому контролю по теме «Морфология и физиология бактерий».

1. Строение бактериальной клетки.

2. Спора бактерий, строение, назначение, отличия от спор грибов.

3. Основные компоненты белоксинтезирующей системы бактерий.

4. Принцип фазовоконтрастной микроскопии.

5. Принцип темнопольной микроскопии.

6. Основные отличия между прокариотами и эукариотами.

7. Основные типы культур бактерий.

8. Признаки, применяемые для идентификации микроорганизмов.

9. Определения всех методов микробиологической диагностики.

10. Структура жгутика бактерий.

11. Классификация бактерий по количеству и взаиморасположению жгутиков.

12. Методы определения подвижности бактерий.

13. Структура пептидогликана.

14. Принцип окраски бактерий по Граму, отличия клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.

15. В каких случаях употребляются термины «бактерии», «бациллы», «клостридии»?

16. Что такое L-формы бактерий, в каких случаях они возникают?

17. Методы выявления спор у бактерий.

18. Что такое нумерическая таксономия?

19. Что такое конститутивные, индуцибельные, репрессибельные ферменты?

20. Отличия между ядерным аппаратом прокариот и эукариот.

21. Структура и функции цитоплазматической мембраны.

22. Функции клеточной стенки бактерий.

23. Что такое мини-клетки, когда они образуются?

24. Типы дыхания бактерий, сущность и разница.

25. Строение и функции липополисахарида клеточной стенки.

26. Что такое «вид» микроорганизма?

27. Что такое архебактерии?

28. Классификация бактерий по морфологии и взаиморасположению.

29. Механизм деления бактерий. Время жизни клетки (формула).

30. Механизмы поступления питательных веществ в бактериальную клетку.

31. Активный транспорт веществ у бактерий.

32. Классификации питательных сред, требования к ним.

33. Что такое плазмиды?

34. Что такое микроаэрофилы?

35. Причины чувствительности анаэробов к молекулярному кислороду воздуха.

36. Состав среды Китта-Тароцци.

37. Состав и химизм работы среды Вильсон-Блера.

38. Что такое волютин, как его выявляют и у каких бактерий?

39. Этапы выделения чистой культуры возбудителя.

40. Как изучают протеолитические свойства бактерий?

41. Как изучают сахаролитические свойства бактерий?

42. Методы культивирования анаэробов.

43. Определение подвижности бактерий по Пешкову.

44. Как у бактерий определяют способность выделять индол?

45. Как у бактерий определяют способность выделять сероводород?

46. Состав среды Эндо, как на ней растут разные кишечные бактерии?

47. Как изучают развернутые биохимические свойства бактерий?

48. Какой состав имеют МПА и МПБ?

49. Как судят о чистоте выделенной культуры микроорганизма?

50. Актиномицеты, морфология, друза.

51. Плесневые (нитчатые) грибы, родовые морфологические отличия.

52. Микроскопическая дифференциальная диагностика малярии.

53. Назвать патогенных простейших из класса Flagellata.

54. Морфология трипаносом, какие заболевания они вызывают?

55. Морфологические отличия дрожжей и дрожжеподобных грибов Candida.

56. Морфология токсоплазмы, ее роль в патологии человека.

57. Диагностика амебиаза, морфология и жизненный цикл возбудителя.

58. Морфологические отличия возбудителя вивакс и тропической малярии.

59. Чем отличается лейшманиальная форма лейшмании от лептомонадной?

60. Патогенные спирохеты, морфология и классификация.

61. Что такое стерилизация и дезинфекция?

62. Методы стерилизации.

63. Методы контроля качества стерилизации.